Traitement en cours

Veuillez attendre...

PATENTSCOPE sera indisponible durant quelques heures pour des raisons de maintenance le samedi 31.10.2020 à 7:00 AM CET
Paramétrages

Paramétrages

Aller à Demande

1. WO2020182229 - PROTÉINE DE FUSION ET PROCÉDÉ DE PRÉPARATION D'UN POLYPEPTIDE INTERMÉDIAIRE DE LIRAGLUTIDE ASSOCIÉ

Numéro de publication WO/2020/182229
Date de publication 17.09.2020
N° de la demande internationale PCT/CN2020/088521
Date du dépôt international 30.04.2020
CIB
C07K 19/00 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
07CHIMIE ORGANIQUE
KPEPTIDES
19Peptides hybrides
C12N 15/62 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
11Fragments d'ADN ou d'ARN; Leurs formes modifiées
62Séquences d'ADN codant pour des protéines de fusion
C12N 15/70 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
63Introduction de matériel génétique étranger utilisant des vecteurs; Vecteurs; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci; Régulation de l'expression
70Vecteurs ou systèmes d'expression spécialement adaptés à E. coli
C12N 1/21 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
1Micro-organismes, p.ex. protozoaires; Compositions les contenant; Procédés de culture ou de conservation de micro-organismes, ou de compositions les contenant; Procédés de préparation ou d'isolement d'une composition contenant un micro-organisme; Leurs milieux de culture
20Bactéries; Leurs milieux de culture
21modifiés par l'introduction de matériel génétique étranger
C12R 1/19 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
RSCHÉMA D'INDEXATION ASSOCIÉ AUX SOUS-CLASSES C12C-C12Q77
1Micro-organismes
01Bactéries ou actinomycètes
185Escherichia
19Escherichia coli
CPC
C07K 14/605
CCHEMISTRY; METALLURGY
07ORGANIC CHEMISTRY
KPEPTIDES
14Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
435from animals; from humans
575Hormones
605Glucagons
C07K 2319/00
CCHEMISTRY; METALLURGY
07ORGANIC CHEMISTRY
KPEPTIDES
2319Fusion polypeptide
C07K 7/06
CCHEMISTRY; METALLURGY
07ORGANIC CHEMISTRY
KPEPTIDES
7Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
04Linear peptides containing only normal peptide links
06having 5 to 11 amino acids
C12N 15/70
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
70Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
Déposants
  • 美药星(南京)制药有限公司 AMPHASTAR NANJING PHARMACEUTICALS, INC. [CN]/[CN]
  • 南京汉欣医药科技有限公司 NANJING HANXIN PHARMACEUTIAL TECHNOLOGY CO.LTD [CN]/[CN]
Inventeurs
  • 潘尚书 PAN, Shangshu
  • 汤传根 TANG, Chuangen
  • 李宬 LI, Cheng
  • 刘晓锐 LIU, Xiaorui
  • 崔怀言 CUI, Huaiyan
  • 陈松 CHEN, Song
  • 张昊宁 ZHANG, Haoning
Données relatives à la priorité
201910195438.214.03.2019CN
201910515446.014.06.2019CN
Langue de publication chinois (ZH)
Langue de dépôt chinois (ZH)
États désignés
Titre
(EN) FUSION PROTEIN AND METHOD OF PREPARING LIRAGLUTIDE INTERMEDIATE POLYPEPTIDE THEREOF
(FR) PROTÉINE DE FUSION ET PROCÉDÉ DE PRÉPARATION D'UN POLYPEPTIDE INTERMÉDIAIRE DE LIRAGLUTIDE ASSOCIÉ
(ZH) 一种融合蛋白及其制备利拉鲁肽中间体多肽的方法
Abrégé
(EN)
Provided are a fusion protein Leading Peptide-DDDDK-GLP-1(7-37) and a method using same to prepare a liraglutide intermediate polypeptide GLP-1 (7-37). The preparation method comprises: constructing an engineering strain that expresses the fusion protein; by means of cultivation, inducing the expression of a fusion protein in an intracellular insoluble inclusion body mode; and obtaining an intermediate polypeptide GLP-1 (7-37) by means of denaturation, renaturation, enzyme digestion, and separation and purification. The leading peptide sequence of the fusion protein enables the expression mode of the fusion protein to be changed to intracellular insoluble inclusion body-expression, and the expression quantity is markedly increased; washed inclusion bodies are dissolved at a high pH; large amounts of denaturants are not needed; the denaturation and renaturation time is not longer than 1h; the renaturation procedure is simplified, the enzyme digestion system is reduced, and the cost of chemical reagents is lowered, and the degree of separation is high, facilitating greater industrialization.
(FR)
La présente invention concerne le domaine technique des procédés de préparation de polypeptides, et concerne en particulier une protéine de fusion et un procédé de préparation d'un polypeptide intermédiaire GLP-1 (7-37) de liraglutide associé. Les étapes principales du procédé comprennent : la construction d'une souche d'ingénierie recombinante intermédiaire de liraglutide; l'expression d'une protéine de fusion GLP-1 (737) au moyen de la culture et de l'induction d'Escherichia coli; et l'obtention d'un polypeptide intermédiaire GLP-1 (7-37) par dénaturation, renaturation, digestion enzymatique, et séparation et purification. Selon le procédé, en changeant la séquence de peptides d'attaque, le mode d'expression est modifié en une expression de corps d'inclusion insoluble intracellulaire, et la quantité d'expression est considérablement augmentée; des corps d'inclusion lavés sont dissous à un pH élevé; de grandes quantités de dénaturants ne sont pas nécessaires; une solution tampon de dissolution de corps d'inclusion est ajoutée à une concentration de protéines élevée de 5 à 40 g/L; le temps de renaturation n'est pas supérieur à 1h; la digestion par l'entéropeptidase peut être effectuée immédiatement après la dissolution; la procédure de renaturation, le système de digestion enzymatique, et le coût des réactifs chimiques sont réduits, ce qui favorise une industrialisation plus grande; la séparation et la purification d'échange d'ions sont utilisées, et le degré de séparation est élevé. Le polypeptide intermédiaire GLP-1 (7-37) de liraglutide préparé présente une pureté atteignant 92 % ou plus et un rendement supérieur à 87 %.
(ZH)
提供一种融合蛋白Leading Peptide-DDDDK-GLP-1(7-37)及用其制备利拉鲁肽中间体多肽GLP-1(7-37)的方法。制备方法包括构建表达融合蛋白的工程菌,通过培养,诱导胞内不溶性包涵体形式的融合蛋白的表达,再经过变性、复性、酶切和分离纯化得到中间体多肽GLP-1(7-37)。融合蛋白的前导肽序列可以使融合蛋白的表达方式变为胞内不溶性包涵体表达,表达量显著增加,洗涤后的包涵体采用高pH溶解,无需使用大量的变性剂,变复性时间不超过1h,减少复性工序,缩小酶切体系,降低化学试剂成本,分离度高,有利于工业化放大。
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international