(EN) The present invention is concerned with orthogonal translation systems which allow for the site-specific introduction of non-canonical amino acid residues into a target protein (POI) in a POI-mRNA-selective manner. Specifically, the present invention relates to assembler fusion proteins which bring an RNA-targeting polypeptide (RNA-TP) segment and an orthogonal aminoacyl tRNA synthetase (O-RS) segment into spatial proximity of one another, either by direct linkage in RNA-TP/O-RS fusion proteins, or though the action of "assemblers" fused to each of these segments in assembler fusion proteins (AFPs). The invention also relates to AFP combinations and nucleic acid molecules comprising a POI-encoding sequence together with a targeting nucleotide sequence that is able to interact with an RNA-TP. The invention further relates to nucleic acid molecules, expression cassettes and expression vectors encoding said RNA-TP/O-RS fusion proteins or AFPs, cells comprising same, as well as methods and kits for translationally preparing POIs.
(FR) La présente invention concerne des systèmes de traduction orthogonale permettant l'introduction spécifique à un site de résidus d'acides aminés non canoniques dans une protéine cible (POI) d'une manière sélective vis-à-vis de POI-ARNm. Plus particulièrement, la présente invention concerne des protéines de fusion assembleuses permettant d'amener un segment polypeptidique ciblant l'ARN (ARN-TP) et un segment d'aminoacyl-ARNt synthétase orthogonal (O-RS) à proximité spatiale l'un de l'autre, soit par liaison directe dans des protéines de fusion ARN-TP/O-RS, soit par l'action des " éléments d'assemblage " fusionnés à chacun de ces segments dans les protéines de fusion assembleuses (AFP). L'invention concerne également des combinaisons d'AFP et de molécules d'acide nucléique comprenant une séquence codant pour POI conjointement avec une séquence nucléotidique de ciblage qui est capable d'interagir avec un ARN-TP. L'invention concerne en outre des molécules d'acide nucléique, des cassettes d'expression et des vecteurs d'expression codant pour lesdites protéines de fusion ARN-TP/O-RS ou AFP, des cellules les comprenant, ainsi que des procédés et des kits pour la préparation traductionnelle de POI.