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1. WO2020111885 - COMPOSITION VACCINALE POUR LA PRÉVENTION OU LE TRAITEMENT D'UNE MALADIE ŒDÉMATEUSE PORCINE, COMPRENANT UNE PROTÉINE RECOMBINANTE FRAGMENT TERMINAL STX2EA-C-PENTAMÈRE STX2EB EN TANT QU'ANTIGÈNE

Numéro de publication WO/2020/111885
Date de publication 04.06.2020
N° de la demande internationale PCT/KR2019/016771
Date du dépôt international 29.11.2019
CIB
A61K 38/16 2006.01
ANÉCESSITÉS COURANTES DE LA VIE
61SCIENCES MÉDICALE OU VÉTÉRINAIRE; HYGIÈNE
KPRÉPARATIONS À USAGE MÉDICAL, DENTAIRE OU POUR LA TOILETTE
38Préparations médicinales contenant des peptides
16Peptides ayant plus de 20 amino-acides; Gastrines; Somatostatines; Mélanotropines; Leurs dérivés
A61K 39/108 2006.01
ANÉCESSITÉS COURANTES DE LA VIE
61SCIENCES MÉDICALE OU VÉTÉRINAIRE; HYGIÈNE
KPRÉPARATIONS À USAGE MÉDICAL, DENTAIRE OU POUR LA TOILETTE
39Préparations médicinales contenant des antigènes ou des anticorps
02Antigènes bactériens
108Escherichia; Klebsiella
A61K 39/39 2006.01
ANÉCESSITÉS COURANTES DE LA VIE
61SCIENCES MÉDICALE OU VÉTÉRINAIRE; HYGIÈNE
KPRÉPARATIONS À USAGE MÉDICAL, DENTAIRE OU POUR LA TOILETTE
39Préparations médicinales contenant des antigènes ou des anticorps
39caractérisées par les additifs immunostimulants, p.ex. par les adjuvants chimiques
A61P 31/04 2006.01
ANÉCESSITÉS COURANTES DE LA VIE
61SCIENCES MÉDICALE OU VÉTÉRINAIRE; HYGIÈNE
PACTIVITÉ THÉRAPEUTIQUE SPÉCIFIQUE DE COMPOSÉS CHIMIQUES OU DE PRÉPARATIONS MÉDICINALES
31Agents anti-infectieux, c. à d. antibiotiques, antiseptiques, chimiothérapeutiques
04Agents antibactériens
C07K 14/245 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
07CHIMIE ORGANIQUE
KPEPTIDES
14Peptides ayant plus de 20 amino-acides; Gastrines; Somatostatines; Mélanotropines; Leurs dérivés
195provenant de bactéries
24provenant d'Entérobacteriaceae (F), p.ex. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
245Escherichia (G)
A23K 20/142 2016.01
ANÉCESSITÉS COURANTES DE LA VIE
23ALIMENTS OU PRODUITS ALIMENTAIRES; LEUR TRAITEMENT, NON COUVERT PAR D'AUTRES CLASSES
KPRODUITS ALIMENTAIRES SPÉCIALEMENT ADAPTÉS AUX ANIMAUX; PROCÉDÉS SPÉCIALEMENT ADAPTÉS À LEUR FABRICATION
20Éléments nutritifs accessoires pour produits alimentaires pour animaux
10Substances organiques
142Acides aminés; Leurs dérivés
CPC
A23K 20/142
AHUMAN NECESSITIES
23FOODS OR FOODSTUFFS; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
KFODDER
20Accessory food factors for animal feeding-stuffs
10Organic substances
142Amino acids; Derivatives thereof
A23K 50/30
AHUMAN NECESSITIES
23FOODS OR FOODSTUFFS; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
KFODDER
50Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
30for swines
A61K 2039/552
AHUMAN NECESSITIES
61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
39Medicinal preparations containing antigens or antibodies
55characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
552Veterinary vaccine
A61K 38/164
AHUMAN NECESSITIES
61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
38Medicinal preparations containing peptides
16Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
164from bacteria
A61K 39/0258
AHUMAN NECESSITIES
61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
39Medicinal preparations containing antigens or antibodies
02Bacterial antigens
025Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
0258Escherichia
A61K 39/39
AHUMAN NECESSITIES
61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
39Medicinal preparations containing antigens or antibodies
39characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
Déposants
  • 전북대학교산학협력단 INDUSTRIAL COOPERATION FOUNDATION CHONBUK NATIONAL UNIVERSITY [KR]/[KR]
  • 주식회사 코미팜 KOMIPHARM INTERNATIONAL CO., LTD [KR]/[KR]
Inventeurs
  • 허진 HUR, Jin
  • 박정희 PARK, Jung Hee
  • 김원일 KIM, Won Il
  • 김소영 KIM, So Young
  • 서병주 SEO, Byoung Ju
  • 정창기 JEONG, Chang Gi
  • 문자영 MOON, Ja Young
  • 김원경 KIM, Won Kyoung
  • 라오찌리 RAO, Zhili
  • 문성철 MOON, Seong Cheol
  • 정호경 JUNG, Ho Kyoung
  • 박수연 PARK, Su Yeon
Mandataires
  • 특허법인 이룸리온 ERUUM & LEEON INTELLECTUAL PROPERTY LAW FIRM
Données relatives à la priorité
10-2018-015164730.11.2018KR
Langue de publication coréen (KO)
Langue de dépôt coréen (KO)
États désignés
Titre
(EN) VACCINE COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING PORCINE EDEMA DISEASE, COMPRISING STX2EA-C-TERMINAL FRAGMENT-STX2EB-PENTAMERIC RECOMBINANT PROTEIN AS ANTIGEN
(FR) COMPOSITION VACCINALE POUR LA PRÉVENTION OU LE TRAITEMENT D'UNE MALADIE ŒDÉMATEUSE PORCINE, COMPRENANT UNE PROTÉINE RECOMBINANTE FRAGMENT TERMINAL STX2EA-C-PENTAMÈRE STX2EB EN TANT QU'ANTIGÈNE
(KO) STX2EA-C-말단 단편-STX2EB-오량체 재조합 단백질을 항원으로 포함하는 돼지 부종병의 예방 또는 치료용 백신 조성물
Abrégé
(EN)
In the present invention, in order to overexpress a Stx2eA-C-terminal fragment-Stx2eB-pentameric recombinant protein, a Stx2eA-C-terminal fragment gene and a Stx2eB gene, among Stx2e toxins which are one of the causes of porcine edema disease, were cloned into pTWIN1 and pET30a, respectively, and then the vectors were transformed into E.coli BL21(DE3)pLysS. When five Stx2eB monomers expressed from a Stx2eB gene are gathered, monomers form a pentagon structure so as to form a Stx2eB pentamer, and the Stx2eB pentamer and a Stx2eA-C-terminal fragment are coupled so that a stable Stx2eA-C-terminal fragment-Stx2eB-pentameric recombinant protein is produced. A recombinant protein thus produced and an Alum adjuvant were mixed and inoculated, as an antigen of a vaccine for preventing edema disease, in various concentrations into the muscles when piglets were 5 days old and 4 weeks old. After inoculation, in the piglets from groups inoculated with 50 ug and 100 ug of the Stx2eA-C-terminal fragment-Stx2eB-pentameric recombinant protein, an antibody titer that is more remarkable than that of a control group was observed. Although mortality due to clinical symptoms, occurring at a rate similar to that of the control group, was observed in the piglets of a group inoculated with 25 ug, in a group inoculated with 50 ug, a mortality rate decrease by approximately 42% in comparison to the control group was observed. In addition, in a group inoculated with 100 ug, no clinical symptoms and mortality of edema disease were observed. Moreover, in a group inoculated with Stx2eB only and an alum adjuvant, 80% of the inoculated group died. Therefore, a recombinant Stx2eA-C-terminal fragment and a Stx2eB protein of the present invention are one type of toxoid vaccines, are toxoids on which a site where toxins adhere to cells is maintained and which have no toxic ingredient, and allows anti-Stx2eB antibody to prevent the adhesion of Stx2e toxins to effective cells, thereby being expected to be useful in the development of a toxinoid vaccine enabling prevention of porcine edema disease.
(FR)
Dans la présente invention, afin de surexprimer une protéine recombinante fragment terminal STX2eA-C-pentamère STX2eB, un gène de fragment de terminal Stx2eA-C-terminal et un gène Stx2eB, parmi les toxines Stx2e qui sont l'une des causes d'une maladie œdémateuse porcine, ont été clonés dans pTWIN1 et pET30a, respectivement, puis les vecteurs ont été transformés dans E. coli BL21(DE3)pLysS. Lorsque cinq monomères Stx2eB exprimés à partir d'un gène Stx2eB sont regroupés, des monomères forment une structure pentagonale de façon à former un pentamère de Stx2eB, et le pentamère de Stx2eB et un fragment terminal Stx2eA-C sont couplés de sorte qu'une protéine recombinante fragment terminal STX2eA-C-pentamère STX2eB est produite. Une protéine recombinante produite ainsi et un adjuvant d'alun ont été mélangés et inoculés, en tant qu'antigène d'un vaccin pour prévenir une maladie œdémateuse, à différentes concentrations dans les muscles lorsque des porcelets sont âgés de 5 jours et 4 semaines. Après inoculation, chez les porcelets de groupes inoculés avec 50 µg et 100 µg de la protéine recombinante fragment terminal STX2eA-C-pentamère STX2eB, un titre d'anticorps qui est plus notable que celui d'un groupe témoin a été observé. Bien que la mortalité due à des symptômes cliniques, survenant à un taux similaire à celui du groupe témoin, ait été observée chez les porcelets d'un groupe inoculé avec 25 µg, dans un groupe inoculé avec 50 µg, une diminution du taux de mortalité d'environ 42 % par rapport au groupe témoin a été observée. En outre, dans un groupe inoculé avec 100 µg, aucun symptôme clinique ni aucune mortalité de maladie œdémateuse n'a été observé. De plus, dans un groupe inoculé avec Stx2eB uniquement et un adjuvant d'alun, 80 % du groupe inoculé est mort. Par conséquent, un fragment terminal Stx2eA-C recombinant et une protéine Stx2eB de la présente invention sont un type de vaccins à base d'anatoxine, sont des anatoxines sur lesquelles un site auquel des toxines adhèrent à des cellules est maintenu et qui ne comportent pas de composant toxique, et permet à un anticorps anti-Stx2eB d'empêcher l'adhésion de toxines Stx2e à des cellules efficaces, ce qui devrait les rendre utiles dans le développement d'un vaccin à base d'anatoxine permettant la prévention d'une maladie œdémateuse porcine.
(KO)
본 발명은 돼지의 부종병 원인 중 하나인 Stx2e 독소 중에서 Stx2eA-C-말단 단편-Stx2eB 오량체 재조합 단백질을 과발현 시키기 위해 Stx2eA-C-말단 단편 유전자 및 Stx2eB 유전자를 각각 pTWIN1 및 pET30a에 각각 클로닝 한 후 이들 벡터를 E. coli BL21(DE3)pLysS를 형질 전환시켰다. Stx2eB 유전자로부터 발현된 단량체 Stx2eB가 5개가 모이면 펜타곤 구조를 이루면서 Stx2eB 오량체를 형성하게 되고, 상기 오량체 Stx2eB 및 Stx2eA-C-말단 단편이 결합하여 안정적인 Stx2eA-C-말단 단편-Stx2eB-오량체 재조합 단백질이 제조된다. 이렇게 제조된 재조합 단백질 및 Alum adjuvant을 혼합하여 항원으로써 부종병 예방백신으로 자돈이 5일령, 4주령일 때 각각 근육으로 다양한 농도로 접종하였다. 접종 후 Stx2eA-C-말단 단편-Stx2eB-오량체 재조합 단백질이 50ug 및 100ug 을 접종한 그룹의 자돈에서는 대조군에 비해 현저한 항체 역가가 관찰되었으며, 비록 25ug을 접종한 그룹의 자돈에서는 대조군과 비슷한 비율의 임상증상으로 인한 폐사가 관찰되었지만, 50ug을 접종한 그룹에서는 대조군에 비해 약 42%가 감소한 폐사률이 관찰되었다, 더욱이 100ug을 접종한 그룹에서는 부종병의 임상 증상 및 폐사가 관찰되지 않았다. 또한 Stx2eB만을 alum adjuvant와 혼합하여 접종한 그룹에서는 접종한 그룹의 80%가 폐사하였다. 따라서 본 발명의 재조합 Stx2eA-C-말단 단편과 Stx2eB 단백질은 톡소이드 백신의 일종으로 독성성분은 없으면서 독소가 세포와 부착하는 부위는 유지되고 있는 톡소이드로 항 Stx2eB 항체는 Stx2e 독소가 유효한 세포에 부착하지 못하도록 하여 돼지 부종병을 예방할 수 있는 톡소이드 백신 개발에 유용할 것으로 기대된다.
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