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1. WO2020107879 - PROCÉDÉ DE SYNTHÈSE DE TERLIPRESSINE

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说明书

发明名称 0001   0002   0003   0004   0005   0006   0007   0008   0009   0010   0011   0012   0013   0014   0015   0016   0017   0018   0019   0020   0021   0022   0023   0024   0025   0026   0027   0028   0029   0030   0031   0032   0033   0034   0035   0036   0037   0038   0039   0040   0041   0042   0043   0044   0045   0046   0047   0048   0049   0050   0051   0052   0053   0054   0055   0056   0057   0058   0059   0060   0061   0062   0063   0064   0065   0066   0067   0068   0069   0070   0071   0072   0073   0074   0075   0076   0077   0078   0079   0080   0081   0082   0083   0084   0085   0086   0087   0088   0089   0090   0091   0092   0093   0094   0095   0096   0097   0098   0099   0100   0101   0102   0103   0104   0105   0106   0107   0108   0109   0110   0111   0112   0113  

权利要求书

1   2   3   4   5   6   7   8   9   10  

附图

1   2   3   4   5   6  

说明书

发明名称 : 一种特利加压素的合成方法

[0001]
本申请要求于2018年11月27日提交中国专利局、申请号为201811438164.7、发明名称为“一种特利加压素的合成方法”的中国专利申请的优先权,其全部内容通过引用结合在本申请中。

技术领域

[0002]
本发明属于药物化学技术领域,具体涉及一种特利加压素的合成方法。

背景技术

[0003]
特利加压素(Terlipressin)化学名为N-α-三甘氨酰-8-赖氨酸-加压素,分子式为C 52H 74N 16O 15S 2,分子量为1227.37,其结构如下:
[0004]
[0005]
特利加压素为加压素的类似物,使用赖氨酸替代了内源性加压素肽链中第八位的精氨酸,同时在半胱氨酸增加了由三个甘氨酸组成的氨基酸支链。特利加压素进入体内后,经过酶的裂解作用,代谢为活性产物起到收缩血管和抗出血的作用。使用特利加压素后,内脏区域的血流量明显下降,导致肝脏的血流量和门静脉压下降。药效学的研究结果表明,特利加压素与其它类似的肽一样可导致动脉、静脉和内脏区域的小静脉产生收缩,可导致食道壁平滑肌的收缩,同时增加整个小肠的蠕动和肠鸣音。除了对血管平滑肌的作用外,特利加压素还可以作用于子宫的平滑肌引起子宫运动增加,该活性不因患者妊娠与否而改变。动物和人体的实验数据显示特利加压素的主要作用部位为内脏区域和皮肤。特利加压素还具有抗出血性休克、内毒素和组胺性休克的作用。临床用于治疗严重急性食管静脉曲张破裂出血,严重急性胃、十二指肠溃疡出血,急性糜烂性胃炎或出血性胃炎,膜、胆和肠屡的辅助治疗及糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗。特利加压素本身无 活性,在体内经氨基肽酶作用,脱去N末端的3个甘氨酸残基后,缓慢地转化为有活性的赖氨酸加压素,用于治疗肝硬化口脉高压引起的急性食道静脉曲张出血,是一种安全有效的治疗急性静脉曲张出血的药物。
[0006]
现有的合成特利加压素的方法基本上都是固相合成或固相液相结合的方法,这些方法成本高,产率低,且不易监控,无法实现大规模生产。
[0007]
发明内容
[0008]
有鉴于此,本发明的目的在于针对现有技术中存在的问题,采用液相方法合成,以最小保护策略NCL方法进行合成,在完成主链的合成后在液相中进行氧化,得到的目标产物经HPLC纯化得到目标产物。
[0009]
为实现本发明的目的,本发明采用如下技术方案:
[0010]
一种特利加压素的合成方法,采用液相分片段合成化合物3、化合物8和化合物13,化合物13和化合物8连接得到化合物14,化合物14与Boc-Cys(trt)-OH偶联脱保护后得到化合物15,化合物15和化合物3连接得到化合物16,氧化得到特利加压素,
[0011]
[0012]
[0013]
优选的,所述的合成方法,具体包括:
[0014]
步骤1:Boc-Gly-Gly-Gly-OH与硫醇反应得到对应的巯酯,脱Boc后得到化合物3;
[0015]
步骤2:以Boc-Cys(trt)-OH为起始物料,依次偶联L-Pro-OH、L-Lys(Boc)-OH和Gly-NH 2,得到Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2,脱保护后得到化合物8;
[0016]
步骤3:以Boc-Tyr(tBu)-OH为起始物料,依次偶联L-Phe-OH、L-Gln-OH和L-Asn-OH,得到Boc-Tyr(tBu)-Phe-Gln-Asn-OH,与硫醇反应后得到对应的巯酯,脱保护后得到化合物13;
[0017]
步骤4:化合物13和化合物8连接得到化合物14;
[0018]
步骤5:化合物14与Boc-Cys(trt)-OH进行偶联反应,脱保护后得到化合物15;
[0019]
步骤6:化合物15和化合物3连接得到化合物16;
[0020]
步骤7:化合物16氧化得到特利加压素;
[0021]
其中步骤1、步骤2和步骤3的顺序不分先后。
[0022]
作为优选,本发明所述的合成方法中步骤1所述硫醇为4-乙酰氨基苯硫酚或苯硫酚。在一些实施方案中,步骤1所述硫醇为4-乙酰氨基苯硫酚。
[0023]
作为优选,本发明所述的合成方法中,步骤2所述Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2的合成顺序为N端到C端,合成方法为活化酯法。
[0024]
作为优选,本发明所述的合成方法中,步骤3所述Boc-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-OH的合成顺序为N端到C端,合 成方法为活化酯法。
[0025]
作为优选,本发明所述的合成方法中,步骤3所述硫醇为4-乙酰氨基苯硫酚或苯硫酚。在一些实施方案中,步骤3所述硫醇为4-乙酰氨基苯硫酚。
[0026]
作为优选,本发明所述的合成方法中,所述步骤4中化合物13和化合物8的连接方法为NCL方法。
[0027]
进一步的,作为优选,步骤4所述NCL方法所用缓冲液为含盐酸胍的3-吗啉丙磺酸缓冲液。
[0028]
作为优选,本发明所述的合成方法中,所述步骤6中化合物15和化合物3的连接方法为NCL方法。
[0029]
进一步的,作为优选,步骤6所述NCL方法所用缓冲液为含盐酸胍的3-吗啉丙磺酸缓冲液。
[0030]
作为优选,本发明所述的合成方法中,所述步骤7中氧化为液相O 2氧化,溶剂为乙腈和水的等体积混合溶液,氧化pH为8.0~8.5。
[0031]
由上述技术方案可知,本发明提供了一种特利加压素的合成方法采用液相分片段合成化合物3、化合物8和化合物13,化合物13和化合物8连接得到化合物14,化合物14与Boc-Cys(trt)-OH偶联脱保护后得到化合物15,化合物15和化合物3连接得到化合物16,化合物16氧化得到特利加压素。本发明所述合成方法采用液相片段合成,杂质易去除,收率高,成本低,且易于监控,适合规模化生产。进一步的,本发明所述合成方法采用NCL方法进行片段缩合选择性高,副反应少,产品质量更高。

附图说明

[0032]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0033]
图1示化合物3合成路线图;
[0034]
图2示化合物8合成路线图;
[0035]
图3示化合物13合成路线图;
[0036]
图4示特利加压素合成路线图;
[0037]
图5示实施例12合成的化合物16的质谱图;
[0038]
图6示实施例13合成的特利加压素的质谱图。

具体实施方式

[0039]
本发明公开了一种特利加压素的合成方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及产品已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
[0040]
为实现本发明的目的,本发明采用如下技术方案:
[0041]
一种特利加压素的合成方法,采用液相分片段合成化合物3、化合物8和化合物13,化合物13和化合物8连接得到化合物14,化合物14与Boc-Cys(trt)-OH偶联脱保护后得到化合物15,化合物15和化合物3连接得到化合物16,氧化得到特利加压素。
[0042]
优选的,所述的合成方法,具体包括:
[0043]
步骤1:Boc-Gly-Gly-Gly-OH与硫醇反应得到对应的巯酯,脱Boc后得到化合物3;
[0044]
步骤2:以Boc-Cys(trt)-OH为起始物料,依次偶联L-Pro-OH、L-Lys(Boc)-OH和Gly-NH 2,得到Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2,脱保护后得到化合物8;
[0045]
步骤3:以Boc-Tyr(tBu)-OH为起始物料,依次偶联L-Phe-OH、L-Gln-OH和L-Asn-OH,得到Boc-Tyr(tBu)-Phe-Gln-Asn-OH,与硫醇反应后得到对应的巯酯,脱保护后得到化合物13;
[0046]
步骤4:化合物13和化合物8连接得到化合物14;
[0047]
步骤5:化合物14与Boc-Cys(trt)-OH进行偶联反应,脱保护后得到化合物15;
[0048]
步骤6:化合物15和化合物3连接得到化合物16;
[0049]
步骤7:化合物16氧化得到特利加压素;
[0050]
其中步骤1、步骤2和步骤3的顺序不分先后。
[0051]
本发明采用液相片段合成方法合成特利加压素,步骤1、步骤2和步骤3分别合成化合物3、化合物8和化合物13。
[0052]
其中,步骤1中化合物3的合成方法为Boc-Gly-Gly-Gly-OH与硫醇偶联反应得到对应的巯酯,脱Boc后得到。
[0053]
作为优选,步骤1中化合物3的合成方法所述硫醇为4-乙酰氨基苯硫酚或苯硫酚。在一些实施方案中,所述硫醇为4-乙酰氨基苯硫酚。
[0054]
在一些实施方案中,步骤1中所述Boc-Gly-Gly-Gly-OH与硫醇偶联的偶联剂为DIC、HOBt和THF。
[0055]
在一些实施方案中,步骤1中所述脱Boc的裂解剂为TFA与水的混合溶液。
[0056]
作为优选,本发明所述的合成方法中,步骤2化合物8的合成方法为以Boc-Cys(trt)-OH为起始物料从N端到C端采用活化酯法依次偶联L-Pro-OH、L-Lys(Boc)-OH和Gly-NH 2,得到Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2,脱保护后得到化合物8。
[0057]
在一些实施方案中,所述化合物8的合成方法具体为Boc-Cys(trt)-OH用HONB、TNF和DCC活化后在Na 2CO 3存在下与L-Pro-OH反应得到化合物5(Boc-Cys(trt)-Pro-OH)。然后化合物5(Boc-Cys(trt)-Pro-OH)用HONB、TNF和DCC活化后在Na 2CO 3存在下与L-Lys(Boc)-OH反应得到化合物6(Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)OH)。之后化合物6(Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)OH)用HONB、TNF和DCC活化后在Na 2CO 3存在下与Gly-NH 2反应得到化合物7(Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2)。随后化合物7 (Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2)脱保护获得化合物8。所述化合物7脱保护的裂解剂为TFA与水的混合溶液。
[0058]
作为优选,本发明所述的合成方法中,步骤3化合物13的合成方法为以Boc-Tyr(tBu)-OH为起始物料,从N端到C端采用活化酯法依次偶联L-Phe-OH、L-Gln-OH和L-Asn-OH,得到Boc-Tyr(tBu)-Phe-Gln-Asn-OH,与硫醇反应后得到对应的巯酯,脱保护后得到化合物13。
[0059]
在一些实施方案中,所述化合物13的合成方法具体为Boc-Tyr(tBu)-OH偶联L-Phe-OH的具体方法为Boc-Tyr(tBu)-OH用HONB、TNF和DCC活化后在Na 2CO 3存在下与L-Phe-OH反应得到化合物10。然后化合物10用HONB、TNF和DCC活化后在Na 2CO 3存在下与L-Gln-OH反应得到化合物11。之后化合物11用HONB、TNF和DCC活化后在Na 2CO 3存在下与L-Asn-OH反应得到化合物12。随后化合物12与硫醇反应脱保护后得到化合物13。其中,与化合物12反应的硫醇为4-乙酰氨基苯硫酚。所述脱保护的裂解剂为TFA与水的混合溶液。
[0060]
本发明所述的合成方法中,所述步骤4中化合物13和化合物8采用NCL方法连接获得化合物14。
[0061]
作为优选,步骤4所述NCL方法所用缓冲液为含盐酸胍的3-吗啉丙磺酸缓冲液。
[0062]
在一些实施方案中,步骤4所述NCL方法所用缓冲液为含6M盐酸胍的0.1M、pH7.5的3-吗啉丙磺酸缓冲液。
[0063]
本发明所述的合成方法中,所述步骤5中化合物14与Boc-Cys(trt)-OH进行偶联反应,脱保护后得到化合物15。
[0064]
在一些实施方案中,步骤5中所述化合物14与Boc-Cys(trt)-OH偶联的偶联剂为DCC、HONB和THF。
[0065]
在一些实施方案中,步骤5中所述脱保护的裂解剂为TFA与水的混合溶液。
[0066]
本发明所述的合成方法中,所述步骤6中化合物15和化合物3采用NCL方法连接获得化合物16。
[0067]
作为优选,步骤6所述NCL方法所用缓冲液为含盐酸胍的3-吗啉丙磺酸缓冲液。
[0068]
在一些实施方案中,步骤6所述NCL方法所用缓冲液为含6M盐酸胍的0.1M、pH7.5的3-吗啉丙磺酸缓冲液。
[0069]
本发明所述的合成方法中,所述步骤7中化合物16经氧化后得到特利加压素。
[0070]
在一些实施方案中,所述步骤7中氧化为液相O 2氧化,溶剂为乙腈和水的等体积混合溶液,氧化pH为8.0~8.5。
[0071]
由上述技术方案可知,本发明提供了一种特利加压素的合成方法采用液相分片段合成化合物3、化合物8和化合物13,化合物13和化合物8连接得到化合物14,化合物14与Boc-Cys(trt)-OH偶联脱保护后得到化合物15,化合物15和化合物3连接得到化合物16,化合物16氧化得到特利加压素。本发明所述合成方法采用液相片段合成,杂质易去除,收率高,成本低,且易于监控,适合规模化生产。进一步的,本发明所述合成方法采用NCL方法进行片段缩合选择性高,副反应少,产品质量更高。
[0072]
为了进一步理解本发明,下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
[0073]
如无特殊说明,本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品,均可以通过商业渠道购买获得。其中实施例中所涉及的试剂缩写及英文含义如下:
[0074]
[表0001]
缩写及英文 含义
Boc 叔丁氧羰基
MOPS 3-吗啉丙磺酸
NCL Native Chemical ligation
tBu 叔丁基
Trt 三苯甲基
HOBt 1-羟基苯并三唑
HONb N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺
DCC 二环己基碳二亚胺
DIC N,N’-二异丙基碳二亚胺
Na 2CO 3 碳酸钠
Na 2SO 4 硫酸钠
THF 四氢呋喃
DCM 二氯甲烷
EA 乙酸乙酯
Et 2O 乙醚
PE 石油醚
MeOH 甲醇

[0075]
实施例1:化合物3的合成
[0076]
[0077]
将Boc-Gly-Gly-Gly-OH(2.89g,10mmol)、4-乙酰氨基苯硫酚(2.51g,15mmol)和HOBt(2.03g,15mmol)溶解在40ml四氢呋喃中,加入DIC(1.89g,15mmol),室温搅拌反应16h,真空浓缩,残留物溶解在DCM中,水洗3次,饱和食盐水洗2次,有机相用无水Na 2SO 4干燥,过滤除去Na 2SO 4,滤液真空浓缩,得到白色泡沫状固体。向装有上述固体的圆底烧瓶中加入47.5ml三氟乙酸和2.5ml水的混合溶液,室温搅拌2h。将反应液加入到200ml冰冻无水乙醚中,过滤收集固体,真空干燥后得到4.40g化合物3,收率:86.7%,MS:339.4(M+1),纯度:98.7%。
[0078]
实施例2:化合物5的合成
[0079]
[0080]
将Boc-Cys(trt)-OH(9.27g,20mmol)和HONB(4.3g,24mmol)溶解在50ml THF中,冰浴条件下加入DCC并搅拌反应2h,TLC显示Boc-Cys(trt)-OH反应完全,过滤,滤液待用。将L-Pro-OH(2.30g,20mmol)和Na 2CO 3(4.24g,40mmol)溶解在50ml水中,室温搅拌下缓慢滴加上述滤液,滴加完毕后继续反应4h,真空浓缩掉THF,水相用EA洗涤2次,将水相pH调节至3.0~4.0,EA萃取2次,合并有机相,饱和食盐水洗涤3次,无水Na 2SO 4干燥,真空浓缩,残留物用Et 2O结晶,得到8.41g Boc-Cys(trt)-Pro-OH,收率:75.0%,纯度:99.7%,MS:561.8(M+1)。
[0081]
实施例3:化合物6的合成
[0082]
[0083]
将Boc-Cys(trt)-Pro-OH(8.41g,15mmol)和HONB(3.23g,18mmol)溶解在50ml THF中,冰浴条件下加入DCC并搅拌反应2h,过滤,滤液待用。将L-Lys(Boc)-OH(3.69g,15mmol)和Na 2CO 3(3.18g,30mmol)溶解在50ml水中,室温搅拌下缓慢滴加上述滤液,滴加完毕后继续反应4h,真空浓缩掉THF,水相用EA洗涤2次,将水相pH调节至3.0~4.0,EA萃取2次,合并有机相,饱和食盐水洗涤3次,无水Na 2SO 4干燥,真空浓缩,残留物用DCM/Et 2O结晶,得到9.47g Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)OH,收率:80.0%,纯度:99.8%,MS:790.1(M+1)。
[0084]
实施例4:化合物7的合成
[0085]
[0086]
将Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)OH(9.47g,12mmol)和HONB(2.58g,14.4mmol)溶解在400ml THF中,冰浴条件下加入DCC并搅拌反应2h,过滤,滤液待用。将H-Gly-NH 2(1.61g,12mmol)和Na 2CO 3(2.54g,24mmol)溶解在40ml水中,室温搅拌下缓慢滴加上述滤液,滴加完毕后继续反应4h,真空浓缩掉THF,水相用EA洗涤2次,将水相pH调节至3.0~4.0,EA萃取2次,合并有机相,饱和食盐水洗涤3次,无水Na 2SO 4干燥,真空浓缩,残留物用MeOH结晶,得到8.73g Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2,收率:86.0%,纯度:98.8%,MS:847.1(M+1)。
[0087]
实施例5:化合物8的合成
[0088]
[0089]
将Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2(8.73g,10.3mmol)溶解在95ml TFA和5ml H 2O的混合溶液中,室温搅拌反应2h,将反应液倒入1L冰冻无水乙醚中,离心收集固体,干燥后得到3.67g化合物8,收率:88.3%,纯度:98.9%,MS:404.4(M+1)。
[0090]
实施例6:化合物10的合成
[0091]
[0092]
将Boc-Tyr(tBu)-OH(6.75g,20mmol)和HONB(4.3g,24mmol)溶解在50ml THF中,冰浴条件下加入DCC并搅拌反应2h,TLC显示Boc-Tyr(tBu)-OH反应完全,过滤,滤液待用。将L-Phe-OH(3.58g,20mmol)和Na 2CO 3(4.24g,40mmol)溶解在50ml水中,室温搅拌下缓慢滴加上述滤液,滴加完毕后继续反应4h,真空浓缩掉THF,水相用EA洗涤2次,将水相pH调节至3.0~4.0,EA萃取2次,合并有机相,饱和食盐水洗涤3次,无水Na 2SO 4干燥,真空浓缩,残留物用Et 2O结晶,得到8.01g化合物10,收率:82.6%,纯度:99.5%,MS:485.6(M+1)。
[0093]
实施例7:化合物11的合成
[0094]
[0095]
将化合物10(8.01g,16.5mmol)和HONB(3.55g,19.8mmol)溶解在50ml THF中,冰浴条件下加入DCC并搅拌反应2h,TLC显示化合物10反应完全,过滤,滤液待用。将L-Gln-OH(2.41g,16.5mmol)和Na 2CO 3(3.50g,33mmol)溶解在50ml水中,室温搅拌下缓慢滴加上述滤液,滴加完毕后继续反应4h,真空浓缩掉THF,水相用EA洗涤2次,将水相pH调节至3.0~4.0,EA萃取2次,合并有机相,饱和食盐水洗涤3次,无水Na 2SO 4干燥,真空浓缩,残留物用EA/PE结晶,得到8.21g化合物11,收率:81.2%,纯度:99.8%,MS:613.8(M+1)。
[0096]
实施例8:化合物12的合成
[0097]
[0098]
将化合物11(8.21g,13.4mmol)和HONB(2.88g,16.1mmol)溶解在50ml THF中,冰浴条件下加入DCC并搅拌反应2h,TLC显示化合物11反应完全,过滤,滤液待用。将L-Asn-OH(1.77g,13.4mmol)和Na 2CO 3(2.84g,26.8mmol)溶解在50ml水中,室温搅拌下缓慢滴加上述滤液,滴加完毕后继续反应4h,真空浓缩掉THF,水相用EA洗涤2次,将水相pH调节至3.0~4.0,EA萃取2次,合并有机相,饱和食盐水洗涤3次,无水Na 2SO 4干燥,真空浓缩,残留物用DCM/Et 2O结晶,得到7.73g化合物12,收率:79.4%,纯度:98.7%,MS:727.8(M+1)。
[0099]
实施例9:化合物13的合成
[0100]
[0101]
将化合物12(7.73g,10.6mmol)、4-乙酰氨基苯硫酚(3.55g,21.2mmol)和HOBt(2.86g,21.2mmol)溶解在50ml四氢呋喃中,加入DIC(2.68g,21.2mmol),室温搅拌反应16h。真空浓缩,残留物溶解在DCM中,水洗3次,饱和食盐水洗2次,有机相用无水Na 2SO 4干燥,过滤,滤液真空浓缩,得到白色粉末状固体。向装有上述固体的圆底烧瓶中加入95ml三氟乙酸和5ml水的混合溶液,室温搅拌2h。将反应液加入到500ml冰冻无水乙醚中,过滤收集固体,真空干燥后得到6.15g化合物13,收率:80.6%,MS:720.8(M+1),纯度:98.9%。
[0102]
实施例10:化合物14的合成
[0103]
[0104]
将化合物13(0.72g,1mmol)和化合物8(0.40g,1mmol)溶解在1L含有6M盐酸胍的3-吗啉丙磺酸缓冲液(pH7.5,0.1M)中,并向其中加入20ml苯硫酚和20ml苄硫醇,室温搅拌反应8h,反应液由RP-HPLC制备后得到0.785g化合物14,收率:82.1%,MS:957.1(M+1),纯度:99.8%。
[0105]
实施例11:化合物15的合成
[0106]
[0107]
将Boc-Cys(trt)-OH(0.464g,1mmol)和HONB(0.214g,1.2mmol)溶解在5ml THF中,冰浴条件下加入DCC(0.248g,1.2mmol)并搅拌反应2h,TLC显示Boc-Cys(trt)-OH反应完全,过滤,滤液待用。将化合物14(0.785g,0.82mmol)和Na 2CO 3(0.174g,1.64mmol)溶解在5ml水中,室温搅拌下缓慢滴加上述滤液,滴加完毕后继续反应6h,真空浓缩掉THF,水相用EA洗涤3次,将水相pH调节至3.0~4.0,EA萃取2次,合并有机相,饱和食盐水洗涤3次,无水Na 2SO 4干燥,真空浓缩,残留物中加入4.5ml TFA和0.5ml水,室温搅拌反应2h,得到0.779g化合物15,收率:89.7%,纯度:94.6%,MS:1060.2(M+1)。
[0108]
实施例12:化合物16的合成
[0109]
[0110]
将化合物15(0.53g,0.5mmol)和化合物3(0.17g,0.5mmol)溶解在500ml含有6M盐酸胍的3-吗啉丙磺酸缓冲液(pH7.5,0.1M)中,并向其中加入10ml苯硫酚和10ml苄硫醇,室温搅拌反应6h,反应 液由RP-HPLC制备后得到0.538g化合物16,收率:87.5%,MS:1229.666(M+1),纯度:99.7%。
[0111]
实施例13:特利加压素的合成
[0112]
[0113]
将化合物16(0.538g,0.438mmol)溶解在30ml乙腈和30ml水的混合溶液中,调pH至8.0~8.5,通O 2,室温搅拌反应4h,醋酸调pH至3.5~4.0终止反应,RP-HPLC制备后得到特利加压素0.42g,收率:78.1%,MS:1227.571(M+1),纯度:99.9%。

权利要求书

[权利要求 1]
一种特利加压素的合成方法,采用液相分片段合成化合物3、化合物8和化合物13,化合物13和化合物8连接得到化合物14,化合物14与Boc-Cys(trt)-OH偶联脱保护后得到化合物15,化合物15和化合物3连接得到化合物16,氧化得到特利加压素,
[权利要求 2]
根据权利要求1所述的合成方法,具体包括: 步骤1:Boc-Gly-Gly-Gly-OH与硫醇反应得到对应的巯酯,脱Boc后得到化合物3; 步骤2:以Boc-Cys(trt)-OH为起始物料,依次偶联L-Pro-OH、L-Lys(Boc)-OH和Gly-NH 2,得到Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2,脱保护后得到化合物8; 步骤3:以Boc-Tyr(tBu)-OH为起始物料,依次偶联L-Phe-OH、L-Gln-OH和L-Asn-OH,得到Boc-Tyr(tBu)-Phe-Gln-Asn-OH,与硫醇反应后得到对应的巯酯,脱保护后得到化合物13; 步骤4:化合物13和化合物8连接得到化合物14; 步骤5:化合物14与Boc-Cys(trt)-OH进行偶联反应,脱保护后得到化合物15; 步骤6:化合物15和化合物3连接得到化合物16; 步骤7:化合物16氧化得到特利加压素; 其中步骤1、步骤2和步骤3的顺序不分先后。
[权利要求 3]
根据权利要求2所述的合成方法,步骤1和步骤3中所述硫醇为4-乙酰氨基苯硫酚或苯硫酚。
[权利要求 4]
根据权利要求2所述的合成方法,步骤2所述Boc-Cys(trt)-Pro-Lys(Boc)-Gly-NH 2的合成顺序为N端到C端,合成方法为活化酯法。
[权利要求 5]
根据权利要求2所述的合成方法,步骤3所述Boc-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-OH的合成顺序为N端到C端,合成方法为活化酯法。
[权利要求 6]
根据权利要求2所述的合成方法,所述步骤4中化合物13和化合物8的连接方法为NCL方法。
[权利要求 7]
根据权利要求6所述的合成方法,步骤4所述NCL方法所用缓冲液为含盐酸胍的3-吗啉丙磺酸缓冲液。
[权利要求 8]
根据权利要求2所述的合成方法,所述步骤6中化合物15和化合物3的连接方法为NCL方法。
[权利要求 9]
根据权利要求8所述的合成方法,步骤6所述NCL方法所用缓冲液为含盐酸胍的3-吗啉丙磺酸缓冲液。
[权利要求 10]
根据权利要求2所述的合成方法,所述步骤7中氧化为液相O 2氧化,溶剂为乙腈和水的等体积混合溶液,氧化pH为8.0~8.5。

附图

[ 图 1]  
[ 图 2]  
[ 图 3]  
[ 图 4]  
[ 图 5]  
[ 图 6]