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1. WO2020091020 - PROCÉDÉ DE PRODUCTION D’UN ORGANOÏDE INTESTINAL DÉRIVÉ DE CELLULES SOUCHES PLURIPOTENTES

Numéro de publication WO/2020/091020
Date de publication 07.05.2020
N° de la demande internationale PCT/JP2019/042938
Date du dépôt international 31.10.2019
CIB
C12N 5/071 2010.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
5Cellules non différenciées humaines, animales ou végétales, p.ex. lignées cellulaires; Tissus; Leur culture ou conservation; Milieux de culture à cet effet
07Cellules animales ou tissus animaux
071Cellules ou tissus de vertébrés, p.ex. cellules humaines ou tissus humains
C12N 5/0735 2010.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
5Cellules non différenciées humaines, animales ou végétales, p.ex. lignées cellulaires; Tissus; Leur culture ou conservation; Milieux de culture à cet effet
07Cellules animales ou tissus animaux
071Cellules ou tissus de vertébrés, p.ex. cellules humaines ou tissus humains
073Cellules ou tissus embryonnaires; Cellules fœtales ou tissus fœtaux
0735Cellules souches embryonnaires; Cellules germinales embryonnaires
A61L 27/38 2006.01
ANÉCESSITÉS COURANTES DE LA VIE
61SCIENCES MÉDICALE OU VÉTÉRINAIRE; HYGIÈNE
LPROCÉDÉS OU APPAREILS POUR STÉRILISER DES MATÉRIAUX OU DES OBJETS EN GÉNÉRAL; DÉSINFECTION, STÉRILISATION OU DÉSODORISATION DE L'AIR; ASPECTS CHIMIQUES DES BANDAGES, DES PANSEMENTS, DES GARNITURES ABSORBANTES OU DES ARTICLES CHIRURGICAUX; MATÉRIAUX POUR BANDAGES, PANSEMENTS, GARNITURES ABSORBANTES OU ARTICLES CHIRURGICAUX
27Matériaux pour prothèses ou pour revêtement de prothèses
36contenant des constituants de constitution indéterminée ou leurs produits réactionnels
38Cellules animales
C12Q 1/02 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
QPROCÉDÉS DE MESURE OU DE TEST FAISANT INTERVENIR DES ENZYMES, DES ACIDES NUCLÉIQUES OU DES MICRO-ORGANISMES; COMPOSITIONS OU PAPIERS RÉACTIFS À CET EFFET; PROCÉDÉS POUR PRÉPARER CES COMPOSITIONS; PROCÉDÉS DE COMMANDE SENSIBLES AUX CONDITIONS DU MILIEU DANS LES PROCÉDÉS MICROBIOLOGIQUES OU ENZYMOLOGIQUES
1Procédés de mesure ou de test faisant intervenir des enzymes, des acides nucléiques ou des micro-organismes; Compositions à cet effet; Procédés pour préparer ces compositions
02faisant intervenir des micro-organismes viables
Déposants
  • 公立大学法人名古屋市立大学 PUBLIC UNIVERSITY CORPORATION NAGOYA CITY UNIVERSITY [JP]/[JP]
Inventeurs
  • 松永 民秀 MATSUNAGA Tamihide
  • 岩尾 岳洋 IWAO Takahiro
  • 小野里 太智 ONOZATO Daichi
  • 小川 勇 OGAWA Isamu
Mandataires
  • 萩野 幹治 HAGINO Mikiharu
Données relatives à la priorité
2018-20710802.11.2018JP
2019-09233615.05.2019JP
Langue de publication japonais (JA)
Langue de dépôt japonais (JA)
États désignés
Titre
(EN) METHOD FOR PRODUCING PLURIPOTENT STEM CELL-DERIVED INTESTINAL ORGANOID
(FR) PROCÉDÉ DE PRODUCTION D’UN ORGANOÏDE INTESTINAL DÉRIVÉ DE CELLULES SOUCHES PLURIPOTENTES
(JA) 多能性幹細胞由来腸管オルガノイドの作製法
Abrégé
(EN)
The present invention addresses the problem of producing an intestinal organoid, having characteristics more similar to a small intestine of a living body, from pluripotent stem cells. The intestinal organoid is produced from pluripotent stem cells by: (1) a step of differentiating the pluripotent stem cells into endoderm-like cells; (2) a step of differentiating the endoderm-like cells obtained in the step (1) into intestinal stem cell-like cells; (3) a step of culturing the intestinal stem cell-like cells obtained in the step (2) in the presence of an epidermal growth factor, a fibroblast growth factor, a TGFβ receptor inhibitor, a GSK-3β inhibitor and a ROCK inhibitor; (4) a step of forming a spheroid by culturing the cells after the step (3); (5) a step of forming the intestinal organoid by differentiating the spheroid formed in the step (4), wherein the intestinal organoid is produced by a step including a cultivation in the presence of an epidermal growth factor, a BMP inhibitor and a Wnt signal activator. Additionally, the cells constituting the intestinal organoid formed in the step (5) are subjected to planar culture in the presence of an epidermal growth factor and a TGFβ receptor inhibitor to produce a planar culture system. Gas-liquid culture is used during the planar culture to build a high-function evaluation system having a villi structure.
(FR)
La présente invention aborde le problème de la production d'un organoïde intestinal, possédant des caractéristiques plus proches de celles d’un intestin grêle d'un corps vivant, à partir de cellules souches pluripotentes. L'organoïde intestinal est produit à partir de cellules souches pluripotentes au moyen : (1) d’une étape de différenciation des cellules souches pluripotentes en cellules de type endoderme ; (2) d’une étape de différenciation des cellules de type endoderme obtenues à l'étape (1) en cellules de type cellules souches intestinales ; (3) d’une étape de culture des cellules de type cellules souches intestinales obtenues à l'étape (2) en présence d'un facteur de croissance épidermique, d'un facteur de croissance des fibroblastes, d'un inhibiteur du récepteur de TGFβ, d'un inhibiteur de GSK-3β et d'un inhibiteur de ROCK ; (4) d’une étape de formation d'un sphéroïde par culture des cellules après l'étape (3) ; (5) d’une étape de formation de l'organoïde intestinal par différenciation du sphéroïde formé à l'étape (4), l'organoïde intestinal étant produit par une étape comprenant une culture en présence d'un facteur de croissance épidermique, d'un inhibiteur de BMP et d'un activateur de signal Wnt. De plus, les cellules constituant l'organoïde intestinal formé à l'étape (5) sont soumises à une culture plane en présence d'un facteur de croissance épidermique et d'un inhibiteur du récepteur de TGFβ pour produire un système de culture plane. Une culture gaz-liquide est mise en œuvre pendant la culture plane pour construire un système d'évaluation hautement fonctionnel présenta une structure de villosités.
(JA)
より生体小腸に近い特徴を有する腸管オルガノイドを多能性幹細胞から作製することを課題とする。(1)多能性幹細胞を内胚葉様細胞へと分化させる工程、(2)工程(1)で得られた内胚葉様細胞を腸管幹細胞様細胞へと分化させる工程、(3)工程(2)で得られた腸管幹細胞様細胞を、上皮成長因子、線維芽細胞増殖因子、TGFβ受容体阻害剤、GSK-3β阻害剤及びROCK阻害剤の存在下で培養する工程、(4)工程(3)後の細胞を培養し、スフェロイドを形成させる工程、(5)工程(4)で形成されたスフェロイドを分化させ、腸管オルガノイドを形成させる工程であって、上皮成長因子、BMP阻害剤及びWntシグナル活性化剤の存在下での培養を含む工程によって、多能性幹細胞から腸管オルガノイドを作製する。また、工程(5)で形成された腸管オルガノイドを構成する細胞を、上皮成長因子及びTGFβ受容体阻害剤の存在下で平面培養し、平面培養系を作製する。平面培養の際、気液培養を利用し、絨毛構造を有する高機能な評価系の構築を図る。
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