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1. (WO2019067711) COMPOSITIONS ET PROCÉDÉS NUMÉRIQUES DE DÉTECTION DE NUCLÉASE
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N° de publication : WO/2019/067711 N° de la demande internationale : PCT/US2018/053107
Date de publication : 04.04.2019 Date de dépôt international : 27.09.2018
CIB :
C12Q 1/04 (2006.01) ,C12Q 1/68 (2018.01) ,G01N 33/50 (2006.01) ,G01N 33/53 (2006.01) ,G01N 33/543 (2006.01)
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
Q
PROCÉDÉS DE MESURE, DE RECHERCHE OU D'ANALYSE FAISANT INTERVENIR DES ENZYMES OU DES MICRO-ORGANISMES; COMPOSITIONS OU PAPIERS RÉACTIFS À CET EFFET; PROCÉDÉS POUR PRÉPARER CES COMPOSITIONS; PROCÉDÉS DE COMMANDE SENSIBLES AUX CONDITIONS DU MILIEU DANS LES PROCÉDÉS MICROBIOLOGIQUES OU ENZYMOLOGIQUES
1
Procédés de mesure, de recherche ou d'analyse faisant intervenir des enzymes ou des micro-organismes; Compositions à cet effet; Procédés pour préparer ces compositions
02
faisant intervenir des micro-organismes viables
04
Détermination de la présence ou du type de micro-organisme; Emploi de milieux sélectifs pour la recherche ou l'analyse d'antibiotiques ou de bactéricides; Compositions à cet effet contenant un indicateur chimique
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
Q
PROCÉDÉS DE MESURE, DE RECHERCHE OU D'ANALYSE FAISANT INTERVENIR DES ENZYMES OU DES MICRO-ORGANISMES; COMPOSITIONS OU PAPIERS RÉACTIFS À CET EFFET; PROCÉDÉS POUR PRÉPARER CES COMPOSITIONS; PROCÉDÉS DE COMMANDE SENSIBLES AUX CONDITIONS DU MILIEU DANS LES PROCÉDÉS MICROBIOLOGIQUES OU ENZYMOLOGIQUES
1
Procédés de mesure, de recherche ou d'analyse faisant intervenir des enzymes ou des micro-organismes; Compositions à cet effet; Procédés pour préparer ces compositions
68
faisant intervenir des acides nucléiques
G PHYSIQUE
01
MÉTROLOGIE; ESSAIS
N
RECHERCHE OU ANALYSE DES MATÉRIAUX PAR DÉTERMINATION DE LEURS PROPRIÉTÉS CHIMIQUES OU PHYSIQUES
33
Recherche ou analyse des matériaux par des méthodes spécifiques non couvertes par les groupes G01N1/-G01N31/146
48
Matériau biologique, p.ex. sang, urine; Hémocytomètres
50
Analyse chimique de matériau biologique, p.ex. de sang, d'urine; Recherche ou analyse par des méthodes faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques par ligands; Recherche ou analyse immunologique
G PHYSIQUE
01
MÉTROLOGIE; ESSAIS
N
RECHERCHE OU ANALYSE DES MATÉRIAUX PAR DÉTERMINATION DE LEURS PROPRIÉTÉS CHIMIQUES OU PHYSIQUES
33
Recherche ou analyse des matériaux par des méthodes spécifiques non couvertes par les groupes G01N1/-G01N31/146
48
Matériau biologique, p.ex. sang, urine; Hémocytomètres
50
Analyse chimique de matériau biologique, p.ex. de sang, d'urine; Recherche ou analyse par des méthodes faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques par ligands; Recherche ou analyse immunologique
53
Essais immunologiques; Essais faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques; Matériaux à cet effet
G PHYSIQUE
01
MÉTROLOGIE; ESSAIS
N
RECHERCHE OU ANALYSE DES MATÉRIAUX PAR DÉTERMINATION DE LEURS PROPRIÉTÉS CHIMIQUES OU PHYSIQUES
33
Recherche ou analyse des matériaux par des méthodes spécifiques non couvertes par les groupes G01N1/-G01N31/146
48
Matériau biologique, p.ex. sang, urine; Hémocytomètres
50
Analyse chimique de matériau biologique, p.ex. de sang, d'urine; Recherche ou analyse par des méthodes faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques par ligands; Recherche ou analyse immunologique
53
Essais immunologiques; Essais faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques; Matériaux à cet effet
543
avec un support insoluble pour l'immobilisation de composés immunochimiques
Déposants :
UNIVERSITY OF IOWA RESEARCH FOUNDATION [US/US]; 112 N. Capitol Street 6 Gilmore Hall Iowa City, Iowa 52242-5500, US
Inventeurs :
MCNAMARA, James, O.; US
Mandataire :
VIKSNINS, Ann, S.; US
HARRIS, Robert, J.; US
MALEN, Peter, L.; US
KRUEGER, Katherine, A.D.; US
MICKELSON, John, W.; US
ANDRUS, Alex; US
Données relatives à la priorité :
62/565,67429.09.2017US
Titre (EN) DIGITAL NUCLEASE DETECTION COMPOSITIONS AND METHODS
(FR) COMPOSITIONS ET PROCÉDÉS NUMÉRIQUES DE DÉTECTION DE NUCLÉASE
Abrégé :
(EN) In certain embodiments, the present invention provides a detection composition comprising a picodroplet comprising (a) an aqueous solution, and (b) a substrate probe comprising (i) an oligonucleotide of 2 to 75 nucleotides in length, (ii) a fluorophore operably linked to the oligonucleotide, and (iii) a quencher operably linked to the oligonucleotide. As used herein, the term "picodroplet" comprises a liquid droplet that has a volume of 0.014 to 2.6 picoliters. In certain embodiments, the present invention provides a method of detecting at least one individual nuclease molecule present in a sample, comprising contacting an aqueous sample suspected of containing at least one nuclease with at least one detection composition comprising a picodroplet comprising (a) an aqueous solution, and (b) a substrate probe comprising (i) an oligonucleotide of 2 to 75 nucleotides in length, (ii) a fluorophore operably linked to the oligonucleotide, and (iii) a quencher operably linked to the oligonucleotide to form an aqueous reaction mixture; emulsifying the aqueous mixture in oil to form picoliter-scale droplets in an emulsion, (c) incubating the picoliter-scale droplets in the emulsion in order for the nuclease, if present, to digest the substrate probes linked to the microbeads; recovering the microbeads; and detecting fluorescence emitting from the microbeads.
(FR) Selon certains modes de réalisation, la présente invention concerne une composition de détection comprenant une picogouttelette comprenant (a) une solution aqueuse, et (b) une sonde à substrat comprenant (i) un oligonucléotide de 2 à 75 nucléotides de long, (ii) un fluorophore fonctionnellement lié à l'oligonucléotide, et (iii) un agent d'extinction fonctionnellement lié à l'oligonucléotide. Tel qu'il est utilisé ici, le terme "picogouttelette" désigne une gouttelette liquide ayant un volume de 0,014 à 2,6 picolitres. Dans certains modes de réalisation, la présente invention concerne un procédé de détection d'au moins une molécule de nucléase individuelle présente dans un échantillon, comprenant la mise en contact d'un échantillon aqueux suspecté de contenir au moins une nucléase avec au moins une composition de détection comprenant une picogouttelette comprenant (a) une solution aqueuse, et (b) une sonde à substrat comprenant (i) un oligonucléotide de 2 à 75 nucléotides de long, (ii) un fluorophore fonctionnellement lié à l'oligonucléotide, et (iii) un agent d'extinction fonctionnellement lié à l'oligonucléotide pour former un mélange réactionnel aqueux ; l'émulsionnement du mélange aqueux dans l'huile pour former des picogouttelettes en émulsion, (c) l'incubation des picogouttelettes en émulsion afin que la nucléase, si présente, digère les sondes à substrat liées aux microbilles ; la récupération des microbilles ; et la détection d'une émission de fluorescence émanant des microbilles.
front page image
États désignés : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DJ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JO, JP, KE, KG, KH, KN, KP, KR, KW, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)