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1. (WO2016012789) PROCÉDÉ DE DÉTECTION DE NUCLÉOTIDES UNIQUES
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2016/012789    N° de la demande internationale :    PCT/GB2015/052119
Date de publication : 28.01.2016 Date de dépôt international : 22.07.2015
CIB :
C12Q 1/68 (2006.01)
Déposants : BASE4 INNOVATION LTD [GB/GB]; Broers Building JJ Thomson Avenue Cambridge Cambridgeshire CB3 0FA (GB)
Inventeurs : BALMFORTH, Barnaby; (GB).
FRAYLING, Cameron Alexander; (GB)
Mandataire : LAU, Sarah; (GB)
Données relatives à la priorité :
1412977.9 22.07.2014 GB
Titre (EN) SINGLE NUCLEOTIDE DETECTION METHOD
(FR) PROCÉDÉ DE DÉTECTION DE NUCLÉOTIDES UNIQUES
Abrégé : front page image
(EN)SINGLE NUCLEOTIDE DETECTION METHOD A method of sequencing a nucleic acid such as DNA or RNA is provided. It is characterised by the steps of (1) generating a stream of single nucleoside triphosphates by progressive pyrophosphorolysis of the nucleic acid; (2) producing at least one substantially double-stranded oligonucleotide used probe by reacting in the presence of a polymerase and a ligase at least one of the single nucleoside triphosphates with a corresponding probe system comprising (a) a first single-stranded oligonucleotide labelled with characteristic detectable elements in an undetectable state and (b) second and third single-stranded oligonucleotides capable of hybridising to complementary regions on the first oligonucleotide; (3) digesting the used probe with an enzyme having double-stranded exonucleolytic activity to yield the detectable elements in a detectable state and a single-stranded fourth oligonucleotide which is at least in part the sequence complement of the first oligonucleotide; (4) reacting the fourth oligonucleotide with another first oligonucleotide to produce a substantially double-stranded oligonucleotide product corresponding to the used probe; (5) repeating steps (3) and (4) in a cycle and (6) detecting the characteristic detectable elements released in each iteration of step (3). Suitably the detectable elements are fluorophores. The method of the present invention generates a stronger fluorescence signal from a single nucleoside triphosphate than has been described previously. Suitable probe systems are also disclosed.
(FR)La présente invention concerne un procédé de détection de nucléotides uniques, un procédé de séquençage d'un acide nucléique tel que l'ADN ou l'ARN. Le procédé est caractérisé par les étapes consistant à (1) générer un flux de triphosphates nucléosidiques uniques par pyrophosphorolyse progressive de l'acide nucléique; (2) à produire au moins une sonde oligonucléotide sensiblement double brin utilisée en faisant réagir en présence d'une polymérase et d'une ligase au moins l'un des triphosphates nucléosidiques uniques avec un système de sonde correspondant comprenant (a) un premier oligonucléotide monocaténaire marqué avec des éléments détectables caractéristiques dans un état non détectable et (b) des deuxième et troisième oligonucléotides monocaténaires capables de s'hybrider à des régions complémentaires sur le premier oligonucléotide; (3) à digérer la sonde utilisée avec une enzyme ayant une activité exonucléolytique double brin pour obtenir les éléments détectables dans un état détectable et un quatrième oligonucléotide à brin unique qui est au moins en partie la séquence complément du premier oligonucléotide; (4) à faire réagir le quatrième oligonucléotide avec un autre premier oligonucléotide pour produire un produit oligonucléotidique sensiblement double-brin correspondant à la sonde utilisée; (5) à répéter les étapes (3) et (4) dans un cycle et (6) à détecter les éléments caractéristiques détectables libérés dans chaque itération de l'étape (3). De façon appropriée, les éléments détectables sont des fluorophores. Le procédé de la présente invention génère un signal de fluorescence plus fort à partir d'un triphosphate nucléosidique unique qui a été décrit précédemment. L'invention concerne également des systèmes sonde adaptées.
États désignés : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)