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1. (WO2015104288) NOUVEAUX PROCÉDÉS POUR LA STABILISATION DE PROTÉINES
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2015/104288    N° de la demande internationale :    PCT/EP2015/050161
Date de publication : 16.07.2015 Date de dépôt international : 07.01.2015
CIB :
C07K 16/00 (2006.01)
Déposants : TECHNISCHE UNIVERSITÄT MÜNCHEN [DE/DE]; Arcisstrasse 21 80333 Munich (DE).
HELMHOLTZ ZENTRUM MÜNCHEN - DEUTSCHES FORSCHUNGSZENTRUM FÜR GESUNDHEIT UND UMWELT (GMBH) [DE/DE]; Ingolstädter Landstrasse 1 Neuherberg, 85764 (DE)
Inventeurs : BUCHNER, Johannes; (DE).
FEIGE, Matthias; (US).
MARCINOWSKI, Moritz; (DE).
HENNIG, Janosch; (DE)
Mandataire : VOSSIUS & PARTNER; Siebertstraße 4 81675 München (DE)
Données relatives à la priorité :
14150377.1 07.01.2014 EP
Titre (EN) NOVEL METHODS FOR THE STABILISATION OF IMMUNOGLOBULIN CONSTANT DOMAINS
(FR) NOUVEAUX PROCÉDÉS POUR LA STABILISATION DE PROTÉINES
Abrégé : front page image
(EN)The present invention relates to a method of producing a modified protein having an increased stability and/or improved folding efficiency as compared to the unmodified protein, the method comprising (i) modifying a nucleic acid molecule encoding a protein comprising at least one immunoglobulin constant domain-like region by (a-i) replacing the nucleotides encoding at least one amino acid, preferably an uncharged amino acid, in the loop separating the C strand from the D strand with nucleotides encoding a charged amino acid selected from the group consisting of Arg, Lys, His, Glu and Asp and/or replacing the nucleotides encoding at least one amino acid, preferably an uncharged amino acid, in the helix connecting the E strand with the F strand with nucleotides encoding a charged amino acid selected from the group consisting of Arg, Lys, His, Glu and Asp; (a-ii) replacing the nucleotides encoding at least one amino acid not having a side chain that can form a hydrogen bond in the loop separating the C strand from the D strand with nucleotides encoding an amino acid having a side chain capable of forming a hydrogen bond selected from the group consisting of Gin, Asn, Tyr, Ser and Thr and/or replacing the nucleotides encoding at least one amino acid not having a side chain that can form a hydrogen bond in the helix connecting the E strand with the F strand with nucleotides encoding an amino acid having a side chain capable of forming a hydrogen bond selected from the group consisting of Gin, Asn, Tyr, Ser and Thr; and/or (a-iii) replacing the nucleotides encoding at least one amino acid in the loop separating the C strand from the D strand with nucleotides encoding a cysteine and/or replacing the nucleotides encoding at least one amino acid in the helix connecting the E strand with the F strand with nucleotides encoding a cysteine; and/or (b) replacing the nucleotides encoding at least one non- hydrophobic amino acid at a position suitable to participate in the formation of the hydrophobic core with nucleotides encoding a hydrophobic amino acid selected from the group consisting of Val, He, Leu, Met, Phe, Trp and Pro; and (ii) expressing the nucleic acid molecule to produce the stabilised protein. The present invention further relates to a method of producing a modified protein having an improved secretion from cells as compared to the unmodified protein, as well as to a protein comprising at least one immunoglobulin constant domain-like region having an additional salt bridge, an additional hydrogen bond, an additional disulfide bridge and/or an extended hydrophobic core. The present invention further relates to a nucleic acid molecule encoding the modified protein of the invention, as well as a vector comprising said nucleic acid molecule and a host cell comprising the vector. Further, the present invention relates also to a composition as well as to a kit.
(FR)La présente invention concerne un procédé de production d'une protéine modifiée ayant une stabilité accrue et/ou une efficacité de pliage améliorée par comparaison à la protéine non modifiée, le procédé consistant à (i) modifier une molécule d'acide nucléique codant pour une protéine comprenant au moins une région d'immunoglobuline de type domaine constant en (a-i) remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé, de préférence un acide aminé non chargé, dans la boucle séparant le brin C du brin D avec des nucléotides codant pour un acide aminé chargé sélectionné dans le groupe constitué d'Arg, de Lys, d'His, de Glu et d'Asp et/ou en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé, de préférence un acide aminé non chargé, dans l'hélice connectant le brin E au brin F avec des nucléotides codant pour un acide aminé chargé sélectionné dans le groupe constitué d'Arg, de Lys, d'His, de Glu et d'Asp; (a-ii) en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé n'ayant pas de chaîne latérale qui peut former une liaison hydrogène dans la boucle séparant le brin C du brin D avec des nucléotides codant pour un acide aminé ayant une chaîne latérale capable de former une liaison hydrogène sélectionné dans le groupe constitué de Gin, d'Asn, de Tyr, de Ser et de Thr et/ou en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé n'ayant pas de chaîne latérale qui peut former une liaison hydrogène dans l'hélice connectant le brin E au brin F avec des nucléotides codant pour un acide aminé ayant une chaîne latérale capable de former une liaison hydrogène sélectionné dans le groupe constitué de Gin, d'Asn, de Tyr, de Ser et de Thr; et/ou (a-iii) en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé dans la boucle séparant le brin C du brin D avec des nucléotides codant pour une cystéine et/ou en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé dans l'hélice connectant le brin E au brin F avec des nucléotides codant pour une cystéine; et/ou (b) en remplaçant les nucléotides codant pour au moins un acide aminé non hydrophobe à une position adaptée pour participer à la formation du cœur hydrophobe avec des nucléotides codant pour un acide aminé hydrophobe sélectionné parmi le groupe formé de Val, d'He, de Leu, de Met, de Phe, de Trp et de Pro; et (ii) exprimer la molécule d'acide nucléique pour produire la protéine stabilisée. La présente invention se rapporte en outre à un procédé de production d'une protéine modifiée ayant une sécrétion améliorée à partir de cellules par comparaison à la protéine non modifiée, ainsi qu'à une protéine comprenant au moins une région d'immunoglobuline de type domaine constant ayant un pont salin supplémentaire, une liaison hydrogène supplémentaire, un pont disulfure supplémentaire et/ou un cœur hydrophobe allongé. La présente invention concerne en outre une molécule d'acide nucléique codant pour la protéine modifiée de l'invention, ainsi qu'un vecteur comprenant ladite molécule d'acide nucléique et une cellule hôte comprenant le vecteur. La présente invention concerne en outre une composition ainsi qu'un kit.
États désignés : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)