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1. WO2012008821 - SÉRODIAGNOSTIC RAPIDE DE LA MÉLIOÏDOSE

Numéro de publication WO/2012/008821
Date de publication 19.01.2012
N° de la demande internationale PCT/MY2010/000167
Date du dépôt international 09.09.2010
CIB
G01N 33/569 2006.01
GPHYSIQUE
01MÉTROLOGIE; TESTS
NRECHERCHE OU ANALYSE DES MATÉRIAUX PAR DÉTERMINATION DE LEURS PROPRIÉTÉS CHIMIQUES OU PHYSIQUES
33Recherche ou analyse des matériaux par des méthodes spécifiques non couvertes par les groupes G01N1/-G01N31/146
48Matériau biologique, p.ex. sang, urine; Hémocytomètres
50Analyse chimique de matériau biologique, p.ex. de sang ou d'urine; Test par des méthodes faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques par ligands; Test immunologique
53Tests immunologiques; Tests faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques; Matériaux à cet effet
569pour micro-organismes, p.ex. protozoaires, bactéries, virus
G01N 33/53 2006.01
GPHYSIQUE
01MÉTROLOGIE; TESTS
NRECHERCHE OU ANALYSE DES MATÉRIAUX PAR DÉTERMINATION DE LEURS PROPRIÉTÉS CHIMIQUES OU PHYSIQUES
33Recherche ou analyse des matériaux par des méthodes spécifiques non couvertes par les groupes G01N1/-G01N31/146
48Matériau biologique, p.ex. sang, urine; Hémocytomètres
50Analyse chimique de matériau biologique, p.ex. de sang ou d'urine; Test par des méthodes faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques par ligands; Test immunologique
53Tests immunologiques; Tests faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques; Matériaux à cet effet
CPC
C12Q 1/04
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
02involving viable microorganisms
04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
G01N 2469/20
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
2469Immunoassays for the detection of microorganisms
20Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
G01N 33/56911
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
33Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
48Biological material, e.g. blood, urine
50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
569for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
56911Bacteria
G01N 33/6854
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
33Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
48Biological material, e.g. blood, urine
50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
68involving proteins, peptides or amino acids
6854Immunoglobulins
Déposants
  • UNIVERSITI SAINS MALAYSIA [MY/MY]; USM 11800 Pulau Pinang, MY (AllExceptUS)
  • ABDUL KADER , Zainoodin Sheik [MY/MY]; MY (UsOnly)
  • ISMAIL , Asma [MY/MY]; MY (UsOnly)
  • AIYAR , Subramania [MY/MY]; MY (UsOnly)
Inventeurs
  • ABDUL KADER , Zainoodin Sheik; MY
  • ISMAIL , Asma; MY
  • AIYAR , Subramania; MY
Mandataires
  • NANJAPPAN, Puvaneswari; KASS International Sdn . Bhd . 8 - 7 - 2 , Menara Mutiara Bangsar , Jalan Liku Of f Jalan Riong , Bangsar , Bangsar 59100 Kuala Lumpur, MY
Données relatives à la priorité
201000330112.07.2010MY
Langue de publication anglais (EN)
Langue de dépôt anglais (EN)
États désignés
Titre
(EN) RAPID SERODIAGNOSIS OF MELIOIDOSIS
(FR) SÉRODIAGNOSTIC RAPIDE DE LA MÉLIOÏDOSE
Abrégé
(EN)
The present invention relates to a method in rapid serodiagnosis of the disease melioidosis by using a modified method for an acidified glycine extraction of the cell surface proteins (CSP) antigen of Burkholderia pseudomallei and the use of the extracted cell surface proteins (CSP) to develop a rapid and simple modified dot enzyme immunoassay (dotEIA) test. Accordingly, a method for serodiagnosis of melioidosis in a patient, the method comprises steps of (a) preparing a medium for growing Burkholderia pseudomallei; (b) growing the Burkholderia pseudomallei in broth; (c) harvesting the Burkholderia pseudomallei from step (ii) by centrifugation; (d) extracting Burkholderia pseudomallei cell surface proteins (CSP) from step (iii) by acidified glycine extraction method; (e) standardizing and optimizing the CSP antigens from step (iv) and enzyme conjugates reagents to develop a dot enzyme immunoassay; (f) designing assay protocol for dot enzyme immunoassay (dot EIA) based on the concentrations obtained from standardization assay in step (v); (g) preparing serum / plasma from blood specimen obtained from a patient; and (h) detecting antibody isotypes in serum/plasma from patient against the Burkholderia pseudomallei CSP antigens using the dot enzyme immunoassay (dot EIA) from step (vi)and serum/plasma from patient from step (vii). Results from the test can be determined by visible observation of the reaction. This method of diagnosis allows simultaneous detection of serum immunoglobulin G (IgG), immunoglobulin M (IgM) and immunoglobulin A (IgA) antibody isotypes for serodiagnosis of melioidosis. Also provided is a kit for serodiagnosis of melioidosis wherein the kit includes (a) test strips dotted with optimized concentration of cell surface protein (CSP); (b) anti-human immunoglobulin G (IgG), immunoglobulin M (IgM) and immunoglobulin A (IgA); (c) nitroblue tetrazolium (solution A); (d) C 1 -5 bromo-4-chloro-3-indolylphosphate p-toluidine salt (solution B); (e) phosphate buffered saline buffer at pH 9.6 (substrate buffer); (f) 20 mM tris buffered saline at pH 7.4; (g) controls for reaction determination; and (f) reaction tray.
(FR)
La présente invention concerne un procédé de sérodiagnostic rapide de la mélioïdose faisant appel à un procédé modifié d'extraction d'une glycine acidifiée de l'antigène des protéines de surface cellulaire (cell surface proteins, CSP) de Burkholderia pseudomallei et d'utilisation des protéines de surface cellulaire (CSP) extraites pour développer un test modifié par dosage dot-immuno-enzymatique (dot enzyme immunoassay, dotEIA) rapide et simple. En conséquence, un procédé de sérodiagnostic de la mélioïdose chez un patient comporte les étapes consistant à : (a) préparer un milieu de culture de Burkholderia pseudomallei; (b) cultiver les Burkholderia pseudomallei dans un bouillon; (c) récolter les Burkholderia pseudomallei issues de l'étape (ii) par centrifugation; (d) extraire les protéines de surface cellulaire (CSP) de Burkholderia pseudomallei issues de l'étape (iii) par un procédé d'extraction de glycine acidifiée; (e) standardiser et optimiser les antigènes CSP issus de l'étape (iv) et des réactifs conjugués enzymatiques pour développer un dosage dot-immuno-enzymatique; (f) concevoir un protocole de dosage dot-immuno-enzymatique (dot EIA) basé sur les concentrations obtenues à partir du dosage de standardisation de l'étape (v); (g) préparer un sérum / plasma à partir d'un prélèvement sanguin obtenu à partir d'un patient; et (h) détecter des isotypes d'anticorps dans le sérum / plasma provenant du patient par confrontation aux antigènes CSP de Burkholderia pseudomallei à l'aide du dosage dot-immuno-enzymatique (dot EIA) de l'étape (vi) et du sérum / plasma issu du patient à l'étape (vii). Les résultats du test peuvent être déterminés par une observation visuelle de la réaction. Le présent procédé de diagnostic permet la détection simultanée des isotypes d'anticorps de l'immunoglobuline G sérique (IgG), de l'immunoglobuline M (IgM) et de l'immunoglobuline A (IgA) en vue du sérodiagnostic de la mélioïdose. L'invention concerne également un kit de sérodiagnostic de la mélioïdose, ledit kit comprenant : (a) des bandelettes de test ponctuées d'une concentration optimisée de protéine de surface cellulaire (CSP); (b) de l'anti-immunoglobuline humaine G (IgG), de l'immunoglobuline M (IgM) et de immunoglobuline A (IgA); (c) du nitro-bleu de tétrazolium (solution A); (d) un sel de C 1-5 bromo-‌4-‌chloro-‌3-‌indolylphosphate p-‌toluidine (solution B); (e) un tampon salin de phosphate tamponné à un pH 9,6 (tampon de substrat); (f) une solution saline à 20 mM tamponnée tris à un pH 7,4; (g) des témoins pour la détermination de la réaction; et (f) un bac de réaction.
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