(EN) The present invention relates to a method for the selection of a Parvoviral nucleotide sequence encoding a mutant Rep polypeptide having one or more improved properties, which method comprises: a. providing a plurality of Parvoviral nucleotide constructs, each construct comprising: a Parvoviral nucleotide sequence encoding a mutant Rep polypeptide operably linked to a regulatory sequence; and at least one Parvoviral Inverted Terminal Repeat (ITR) flanking said mutant Rep encoding sequence and regulatory sequence; b. transferring the plurality of nucleotide constructs into host cells which are capable of expressing Paroviral Cap polypeptides; c. exposing the host cells to conditions which allow for expression of Parvoviral Cap polypeptides and the expression of a Parvoviral mutant Rep polypeptide so that the Parvoviral nucleotide constructs may be packaged into said Cap polypeptides giving rise to Parvoviral virions; d. isolating Parvoviral virions from the host cell culture and/or supernatant; and e. isolating a mutant parvoviral Rep encoding nucleotide sequence from one of said virions,thereby to select a Parvoviral nucleotide sequence encoding a mutant Rep polypeptide having one or more improved properties.
(FR) La présente invention concerne un procédé de sélection d'une séquence nucléotidique de parvovirus codant pour un polypeptide Rep mutant présentant une ou plusieurs propriétés améliorées, ledit procédé consistant: a. à prendre une pluralité de constructions nucléotidiques de parvovirus, chaque construction comprenant: une séquence nucléotidique de parvovirus codant pour un polypeptide Rep mutant lié de manière fonctionnelle à une séquence régulatrice; et au moins une répétition terminale inversée (ITR) de parvovirus flanquant ladite séquence de codage Rep mutante et ladite séquence régulatrice; b. à transférer la pluralité de constructions nucléotidiques dans des cellules hôtes qui peuvent exprimer des polypeptides Cap de parvovirus; c. à exposer les cellules hôtes à des conditions qui permettent l'expression de polypeptides Cap de parvovirus et l'expression d'un polypeptide Rep mutant de parvovirus de sorte que les constructions nucléotidiques de parvovirus peuvent être encapsulées dans lesdits polypeptides Cap, ce qui donne naissance à des virions de parvovirus; d. à isoler des virions de parvovirus à partir de la culture de cellules hôtes et/ou de surnageant; et e. à isoler une séquence nucléotidique de codage Rep de parvovirus mutant à partir d'un desdits virions, pour ainsi sélectionner une séquence nucléotidique de parvovirus codant pour un polypeptide Rep mutant présentant une ou plusieurs propriétés améliorées.