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1. (WO2009132811) MICROSCOPIE À LUMINESCENCE À RÉSOLUTION ACCRUE
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2009/132811    N° de la demande internationale :    PCT/EP2009/003036
Date de publication : 05.11.2009 Date de dépôt international : 25.04.2009
CIB :
G01N 21/64 (2006.01), H01J 31/50 (2006.01), G02B 21/36 (2006.01)
Déposants : CARL ZEISS MICROIMAGING GMBH [DE/DE]; Carl-Zeiss-Promenade 10 07745 Jena (DE) (Tous Sauf US).
WOLLESCHENSKY, Ralf [DE/DE]; (DE) (US Seulement)
Inventeurs : WOLLESCHENSKY, Ralf; (DE)
Mandataire : HAMPE, Holger; c/o Carl Zeiss AG Standort Jena Carl-Zeiss-Promenade 10 07745 Jena (DE)
Données relatives à la priorité :
10 2008 021 641.0 30.04.2008 DE
Titre (DE) AUFLÖSUNGSGESTEIGERTE LUMINESZENZMIKROSKOPIE
(EN) RESOLUTION-ENHANCED LUMINESCENCE MICROSCOPY
(FR) MICROSCOPIE À LUMINESCENCE À RÉSOLUTION ACCRUE
Abrégé : front page image
(DE)Es wird beschrieben ein Verfahren zur räumlich hochauflosenden Lumineszenzmikroskopie einer Probe, die mit Markierungsmolekülen markiert ist, welche mit einem Umschaltsignal aktivierbar sind, so daß sie erst dann zur Abgabe von Lumineszenzstrahlung anregbar sind, wobei das Verfahren folgende Schritte aufweist a) Einbringen des Umschaltsignals auf die Probe derart, daß nur eine Teilmenge der in der Probe vorhandenen Markierungsmoleküle aktiviert werden, wobei in der Probe Teilbereiche bestehen, in denen innerhalb eines Volumens, das durch eine beugungsbegrenzte maximale Auflosung einer Detektion von Lumineszenzstrahlung begrenzt ist, nur genau ein durch das Umschaltsignal aktiviertes Molekül liegt, b) Anregen der aktivierten Moleküle zur Abgabe von Lumineszenzstrahlung, c) Detektion der Lumineszenzstrahlung mit beugungsbegrenzter Auflosung und d) Erzeugen von Bilddaten aus der in Schritt c) aufgenommenen Lumineszenzstrahlung, wobei die die geometrischen Orte der Lumineszenzstrahlung abgebenden Markierungsmoleküle mit einer über die Beugungsgrenze gesteigerten Ortsauflösung angeben, wobei e) die Detektion der Lumineszenzstrahlung in Schritt c) oder die Erzeugung der Bilddaten in Schritt d) eine nichtlineare, höhere Intensitäten bevorzugende Verstärkung aufgenommener Lumineszenzstrahlung umfaßt, um die Ortsauflösung über die beugungsbegrenzte Auflösung zu schärfen.
(EN)Described is a method for the high spatial resolution luminescence microscopy of a sample which is marked with marking molecules which can be activated by way of a switch-over signal such that only then can they be stimulated to emit luminescent radiation, wherein the method has the following steps a) introducing the switch-over signal onto the sample such that only a partial amount of the marking molecules present in the sample are activated, wherein partial regions exist in the sample, in which partial regions only exactly one molecule, which is activated by the switch-over signal, is located inside a volume which is delimited by a diffraction-limited maximum resolution of a detection of luminescent radiation, b)stimulating the activated molecules to emit luminescent radiation, c) detecting the luminescent radiation with diffraction-limited resolution and d) generating image data from the luminescent radiation recorded in step c), wherein the marking molecules, which emit the geometric locations of the luminescent radiation, indicate with a spatial resolution which is increased to above the diffraction limit, wherein e) the detection of the luminescent radiation in step c) or the generation of the image data in step d) comprises a non-linear increase, which prefers higher intensities, of recorded luminescent radiation in order to enhance the spatial resolution to above the diffraction-limited resolution.
(FR)L’invention concerne un procédé de microscopie à luminescence avec une haute résolution dans l’espace d’un échantillon qui est marqué avec des molécules de marquage, lesquelles peuvent être activées avec un signal de permutation afin de pouvoir, alors seulement, être excitées pour délivrer un rayonnement luminescent. Selon l’invention, le procédé présente les étapes suivantes : a) Induction du signal de permutation sur l’échantillon de telle sorte qu’une quantité partielle seulement des molécules de marquage présentes dans l’échantillon soit activée, l’échantillon contenant des zones partielles dans lesquelles, à l’intérieur d’un volume qui est délimité par une résolution maximale limitée par la diffraction d’une détection du rayonnement luminescent, ne se trouve exactement qu’une seule molécule qui peut être activée par le signal de permutation, b) Excitation des molécules activées pour délivrer un rayonnement luminescent, c) Détection du rayonnement luminescent avec une résolution limitée par la diffraction et d) Génération de données d’image à partir du rayonnement luminescent enregistré à l’étape c). Selon l’invention, les molécules de marquage qui délivrent les emplacements géométriques du rayonnement luminescent indiquent une résolution de position augmentée au-dessus de la limite de diffraction, e) la détection du rayonnement luminescent à l’étape c) ou la génération des données d’image à l’étape d) comprenant une amplification non linéaire favorisant les intensités élevées du rayonnement luminescent enregistré afin de renforcer la résolution de position au-dessus de la résolution limitée par la diffraction.
États désignés : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : allemand (DE)
Langue de dépôt : allemand (DE)