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1. WO2004007766 - METHODE D'AMPLIFICATION D'ACIDE NUCLEIQUE

Numéro de publication WO/2004/007766
Date de publication 22.01.2004
N° de la demande internationale PCT/GB2003/002989
Date du dépôt international 10.07.2003
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 09.02.2004
CIB
C12N 15/10 2006.1
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
10Procédés pour l'isolement, la préparation ou la purification d'ADN ou d'ARN
C12Q 1/68 2006.1
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
QPROCÉDÉS DE MESURE OU DE TEST FAISANT INTERVENIR DES ENZYMES, DES ACIDES NUCLÉIQUES OU DES MICRO-ORGANISMES; COMPOSITIONS OU PAPIERS RÉACTIFS À CET EFFET; PROCÉDÉS POUR PRÉPARER CES COMPOSITIONS; PROCÉDÉS DE COMMANDE SENSIBLES AUX CONDITIONS DU MILIEU DANS LES PROCÉDÉS MICROBIOLOGIQUES OU ENZYMOLOGIQUES
1Procédés de mesure ou de test faisant intervenir des enzymes, des acides nucléiques ou des micro-organismes; Compositions à cet effet; Procédés pour préparer ces compositions
68faisant intervenir des acides nucléiques
CPC
C12N 15/1096
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
10Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
1096cDNA Synthesis; Subtracted cDNA library construction, e.g. RT, RT-PCR
C12Q 1/6853
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
68involving nucleic acids
6844Nucleic acid amplification reactions
6853using modified primers or templates
C12Q 2525/131
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
2525Reactions involving modified oligonucleotides, nucleic acids, or nucleotides
10Modifications characterised by
131incorporating a restriction site
C12Q 2600/158
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
2600Oligonucleotides characterized by their use
158Expression markers
Déposants
  • CAMBRIDGE BIOTECHNOLOGY LTD. [GB]/[GB] (AllExceptUS)
  • DIXON, Alastair [GB]/[GB] (UsOnly)
  • SKYNNER, Michael [GB]/[GB] (UsOnly)
Inventeurs
  • DIXON, Alastair
  • SKYNNER, Michael
Mandataires
  • GILL JENNINGS & EVERY
Données relatives à la priorité
0216026.510.07.2002GB
Langue de publication Anglais (en)
Langue de dépôt anglais (EN)
États désignés
Titre
(EN) NUCLEIC ACID AMPLIFICATION METHOD
(FR) METHODE D'AMPLIFICATION D'ACIDE NUCLEIQUE
Abrégé
(EN) A method for increasing the number of polynucleotides containing sequences corresponding to a mRNA species present in a sample, comprises the steps of: (i) reverse transcription of the mRNA species using a heeled 5'-amplification primer (FAP-RAND) and a heeled 3'-amplification primer (TAP-RT), wherein each primer sequence is unique, and either or each heel sequence includes a RNA polymerase promoter site, and the FAP includes a variable sequence, whereby the RNA is reverse-transcribed to produce double-stranded cDNA and then multiple cDNAs according to the variable sequence; and (ii) amplification of the cDNA using primers sufficiently complementary to the primers, i.e. FAP and TAP, within FAP-RAND and TAP-RT. In one embodiment, the method additionally comprises the step of: (iii) in vitro transcription, to produce RNA run-offs from either end of the amplicons.
(FR) La présente invention concerne une méthode permettant d'augmenter le nombre de polynucléotides contenant des séquences correspondant à une espèce d'ARNm présente dans un échantillon. Ladite méthode fait appel : (i) à la transcription par inversion de ladite espèce d'ARNm à l'aide d'une amorce d'amplification 5' « talon » (FAP-RAND) et d'une amorce d'amplification 3' « talon » (TAP-RT), chaque séquence amorce étant unique, chacune des séquences « talon » comprenant un site promoteur de d'ARN polymérase, la FAP comprenant une séquence variable, et l'ARN étant transcrite par inversion afin de produire de l'ADNc bicaténaire puis des ADNc multiples selon la séquence variable; et (ii) à l'amplification de l'ADNc à l'aide d'amorces suffisamment complémentaires des amorces, c'est-à-dire, la FAP et la TAP, dans la FAP-RAND et dans la TAP-RT. Dans un mode de réalisation, l'invention fait en outre appel (iii) à la transcription in vitro, afin de produire des écoulements d'ARN à partir des extrémités des amplicons.
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