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1. (WO2001077140) MESURE DE LA MOBILISATION DES NUTRIMENTS PAR LES CELLULES ET PROCEDES UTILISANT CETTE MESURE
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication : WO/2001/077140 N° de la demande internationale : PCT/US2000/028913
Date de publication : 18.10.2001 Date de dépôt international : 19.10.2000
CIB :
A61B 5/00 (2006.01) ,A61B 10/00 (2006.01) ,C12Q 1/00 (2006.01) ,C12Q 1/02 (2006.01) ,C12Q 1/54 (2006.01) ,G01N 33/53 (2006.01)
Déposants : FRIEDERICH, Srienc[AT/US]; US
NATARAJAN, Arvind[IN/US]; US
ABU-ABSI, Nicholas, R.[--/US]; US
Inventeurs : FRIEDERICH, Srienc; US
NATARAJAN, Arvind; US
ABU-ABSI, Nicholas, R.; US
Mandataire : FRIEDERICHS, Norman, P.; 1295 Fifth Street Towers 100 South Fifth Street Minneapolis, MN 55402, US
Données relatives à la priorité :
60/160,33519.10.1999US
Titre (EN) MEASUREMENT OF NUTRIENT UPTAKE IN CELLS AND METHODS BASED THEREON
(FR) MESURE DE LA MOBILISATION DES NUTRIMENTS PAR LES CELLULES ET PROCEDES UTILISANT CETTE MESURE
Abrégé :
(EN) The fluorescent glucose analog, 2-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-2-deoxyglucose (2-NBDG), was used to measure rates of glucose uptake by single $i(Escherichia coli) cells. When cell populations were exposed to the glucose analog, the sugar was actively transported and accumulated in single cells to a steady-state level that depended upon the extracellular concentration of the sugar, the sugar transport capacity of the cells, and the intracellular degradation rate. The dependence upon substrate concentration could be described according to Michaelis-Menten kinetics with apparent saturation constant KM=1.75 $g(m)M, and maximum uptake rate = 197 molecules/cell-second. Specificity of glucose transporters to the analog was confirmed by inhibition of uptake of 2-NBDG by D-glucose, 3-o-methyl glucose, and D-glucosamine, and lack of inhibition by L-glucose. The assay for sugar uptake is extremely sensitive such that the presence of even trace amounts of D-glucose in the culture medium ($m(k)0.2 $g(m)M) is detectable. The rates of single-cell sugar uptake were found to increase differentially with cell size as measured by microscopy or single-cell light scattering intensity. A mathematical model was developed to provide a theoretical basis for estimating single-cell glucose uptake rates from single-cell 2-NBDG uptake rates. Because the distribution of single-cell sugar uptake rates of the entire cell population is measured, this assay provides a novel means of estimating the instantaneous rates of nutrient depletion in the culture medium.
(FR) Le 2-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-2-désoxyglucose ou '2-NBDG', qui est un analogue fluorescent du glucose, permettait jusqu'à présent de mesurer la vitesse de mobilisation du glucose par chacunes des cellules d'$i(Escherichia coli). Lorsque des populations de cellules étaient exposées à l'analogue de glucose, le sucre était activement transporté et accumulé dans chacune des cellules jusqu'à un niveau de stabilisation fonction, d'une part de la concentration extracellulaire du sucre, d'autre part de la capacité de transport du sucre des cellules, et enfin de la vitesse de dégradation intracellulaire. La fonction de dépendance par rapport à la concentration du substrat pouvait se décrire selon la cinétique de Michaelis-Menten avec une constante de saturation apparente KM=1,75 $g(m)M, pour une vitesse de mobilisation maximale de 197 molécules/cellule-seconde. La spécificité des transporteurs du glucose par rapport à l'analogue a été confirmée par l'inhibition de la mobilisation du 2-NBDG par les D-glucose, 3-o-méthyle-glucose, et D-glucosamine, et l'absence d'inhibition par le L-glucose. L'essai de mobilisation du sucre est extrêmement sensible, au point que la présence de D-glucose, même à l'état de traces, dans le milieu de culture ($m(k)0.2 $g(m)M) est détectable. Il s'avère que les vitesses de mobilisation du sucre par la cellule augmentent de façon différentielle avec la taille de la cellule telle que mesurée par microscopie ou l'intensité de dispersion lumineuse de la cellule. Un modèle mathématique a été développé pour fournir une base théorique d'estimation de la mobilisation du glucose par la cellule à partir des vitesses de mobilisation du 2-NBDG de la cellule. Dans la mesure où l'on est capable de connaître la distribution des vitesses de mobilisation du sucre par la cellule, cet essai constitue une voie nouvelle pour mesurer les vitesses instantanées d'appauvrissement en nutriment du milieu de culture.
États désignés : AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, BZ, CA, CH, CN, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, MZ, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZA, ZW
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (GH, GM, KE, LS, MW, MZ, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)