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1. WO2001072999 - EXPRESSION DE PROTEINES EUCARYOTES FONCTIONNELLES

Numéro de publication WO/2001/072999
Date de publication 04.10.2001
N° de la demande internationale PCT/US2000/024795
Date du dépôt international 01.09.2000
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 15.10.2001
CIB
C12N 9/08 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
9Enzymes, p.ex. ligases (6.); Proenzymes; Compositions les contenant; Procédés pour préparer, activer, inhiber, séparer ou purifier des enzymes
02Oxydoréductases (1.), p.ex. luciférase
08agissant sur le peroxyde d'hydrogène comme accepteur (1.11)
C12N 15/10 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
10Procédés pour l'isolement, la préparation ou la purification d'ADN ou d'ARN
C12N 15/81 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
63Introduction de matériel génétique étranger utilisant des vecteurs; Vecteurs; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci; Régulation de l'expression
79Vecteurs ou systèmes d'expression spécialement adaptés aux hôtes eucaryotes
80pour fongi
81pour levures
CPC
C07K 2319/02
CCHEMISTRY; METALLURGY
07ORGANIC CHEMISTRY
KPEPTIDES
2319Fusion polypeptide
01containing a localisation/targetting motif
02containing a signal sequence
C12N 15/102
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
10Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
102Mutagenizing nucleic acids
C12N 15/1058
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
10Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
1034Isolating an individual clone by screening libraries
1058Directional evolution of libraries, e.g. evolution of libraries is achieved by mutagenesis and screening or selection of mixed population of organisms
C12N 15/815
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
80for fungi
81for yeasts
815for yeasts other than Saccharomyces
C12N 9/0065
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof
0004Oxidoreductases (1.)
0065acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
Déposants
  • CALIFORNIA INSTITUTE OF TECHNOLOGY [US]/[US] (AllExceptUS)
  • ARNOLD, Frances, H. [US]/[US] (UsOnly)
  • LIN, Zhanglin [CN]/[US] (UsOnly)
Inventeurs
  • ARNOLD, Frances, H.
  • LIN, Zhanglin
Mandataires
  • SCHAFFER, Robert
Données relatives à la priorité
09/538,59127.03.2000US
Langue de publication anglais (EN)
Langue de dépôt anglais (EN)
États désignés
Titre
(EN) EXPRESSION OF FUNCTIONAL EUKARYOTIC PROTEINS
(FR) EXPRESSION DE PROTEINES EUCARYOTES FONCTIONNELLES
Abrégé
(EN)
This invention relates to the improved expression of evolved polynucleotide and polypeptide sequences encoding for eukaryotic enzymes, particularly peroxidase enzymes, in conventional or facile expression systems. Various methods for directed evolution of polynucleotide sequences can be used to obtain the improved sequences. The improved characteristics of the polypeptides or proteins generated in this manner include improved folding, without formation of inclusion bodies, and retained functional activity. In a particular embodiment, the invention relates to improved expression of the horseradish peroxidase (HRP) gene and HRP enzymes. HRP mutants that are highly expressed, highly active, and/or thermostable, are disclosed.
(FR)
L'invention concerne l'expression améliorée de séquences évoluées de polynucléotides et de polypeptides codant pour des enzymes eucaryotes, en particulier des enzymes peroxydases, dans des systèmes d'expression classiques ou sans difficulté. On peut mettre en application différents procédés d'évolution dirigée de séquences de polynucléotides afin d'obtenir ces séquences améliorées. Les caractéristiques améliorées des polypeptides ou des protéines générées de cette manière consistent en un pliage amélioré, sans formation de corps d'inclusion, et en une activité fonctionnelle retenue. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'expression améliorée du gène de la peroxydase du radis noir (HRP) et les enzymes de HRP. Elle concerne également des mutants de HRP présentant un niveau d'expression élevé, une activité et/ou une thermostabilité importante.
Également publié en tant que
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