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1. (WO1998038296) PROCEDE DE REUNION SIMULTANEE DE PLUSIEURS FRAGMENTS D'ADN
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/1998/038296    N° de la demande internationale :    PCT/IL1998/000094
Date de publication : 03.09.1998 Date de dépôt international : 26.02.1998
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 :    17.09.1998    
CIB :
C12N 15/10 (2006.01), C12N 15/66 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01)
Déposants : GESHER-ISRAEL ADVANCED BIOTECS (1996) LTD. [IL/IL]; P.O. Box 98, 90830 Bet Neqofa (IL) (Tous Sauf US).
SHARON, Gil [IL/IL]; (IL) (US Seulement)
Inventeurs : SHARON, Gil; (IL)
Mandataire : LUZZATTO, Kfir; Luzzatto & Luzzatto, P.O. Box 5352, 84152 Beer-Sheva (IL)
Données relatives à la priorité :
120337 27.02.1997 IL
Titre (EN) METHOD FOR SIMULTANEOUS LIGATION OF MULTIPLE DNA FRAGMENTS
(FR) PROCEDE DE REUNION SIMULTANEE DE PLUSIEURS FRAGMENTS D'ADN
Abrégé : front page image
(EN)A method is described for the simultaneous assembly of two or more primer extension generated, double stranded DNA fragments, into a construct, comprising the steps of: 1) designing the primers such that the fragments subsequently produced by PCR, have 3' termini of 15 nucleotides or more being complementary to a second and third fragment, both having 3' termini of 15 nucleotides or more, complementary to each terminal of first said fragment; 2) providing in each of said primers and subsequently in each of said fragments, at least one dU residue in place of at least one dT residue, being positioned at least 15 nucleotides from the 5' end of said primer and subsequent fragments; 3) adding to the mixture of fragments the enzyme UDG (Uracil DNA Glycosylase) and a compound such as N,N,dimethylethylenedimethylamine, to a-purinate and generate single strand nicks at said dU residues, respectively, thereby to generate a 3' single strand overhang on each fragment to be joined thereto, being complementary to the other 3' single strand overhangs of second, third or more aforementioned fragments, and 4) allowing for all fragments thus generated to anneal into a single and stable DNA construct.
(FR)La présente invention concerne un procédé permettant de rassembler simultanément au moins deux fragments d'ADN à double brin générés par extension d'amorces pour former une construction. Ce procédé comporte au moins 4 temps. 1) Le premier temps consiste à concevoir les amorces de façon que les fragments produits ensuite par amplification en chaîne par polymérase présentent des terminaisons 3' d'au moins 15 nucléotides qui soient complémentaires d'un deuxième et d'un troisième fragment, lesquels fragments comportent quant à eux des terminaisons 3' d'au moins 15 nucléotides complémentaires de chacune des terminaisons du premier fragment considéré. 2) Le deuxième temps consiste à mettre, dans chacune des amorces considérées, et ultérieurement dans chacun des fragments considérés, au moins un radical dU en remplacement d'au moins un radical dT, et ce, à une distance d'au moins 15 nucléotides de l'extrémité 5' de l'amorce considérée et des fragments suivants. 3) Le troisième temps consiste à ajouter, d'une part au mélange de fragments l'enzyme UDG (Uracil DNA Glycosylase) et, d'autre part un composé tel qu'une N,N,diméthyléthylaminediméthylamine à un purinat en a, puis à générer des coupures haplotomiques d'un seul brin au niveau des radicaux dU, générant ainsi un porte-à-faux du brin isolé en 3' sur chacun des fragments à y réunir, et ce, en restant complémentaire avec les autres porte-à-faux de brin isolé en 3' des deuxième, troisième fragments, et plus, déjà mentionnés. 4) Le quatrième temps consiste à laisser la totalité des fragments ainsi générés s'anneler en une seule construction d'ADN stabilisée.
États désignés : AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, GH, GM, GW, HU, ID, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (GH, GM, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)