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1. (WO1983004053) OBTENTION ET EXPRESSION DE GRANDS GENES STRUCTURAUX
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/1983/004053    N° de la demande internationale :    PCT/US1983/000605
Date de publication : 24.11.1983 Date de dépôt international : 25.04.1983
CIB :
C07K 14/555 (2006.01), C07K 14/56 (2006.01), C07K 14/57 (2006.01), C12N 15/10 (2006.01), C12N 15/70 (2006.01), C12P 21/02 (2006.01), G01N 33/534 (2006.01)
Déposants : APPLIED MOLECULAR GENETICS, INC. [US/US]; 1892 Oak Terrace Lane, Newbury Park, CA 91320 (US)
Inventeurs : ALTON, Norman, K.; (US).
PETERS, Mary, A.; (US).
STABINSKY, Yitzhak; (US).
SNITMAN, David, L.; (US)
Mandataire : BORUN, Michael, F.; Merriam, Marshall & Bicknell, Two First National Plaza, Chicago, IL 60603 (US)
Données relatives à la priorité :
375,494 06.05.1982 US
483,451 15.04.1983 US
Titre (EN) THE MANUFACTURE AND EXPRESSION OF LARGE STRUCTURAL GENES
(FR) OBTENTION ET EXPRESSION DE GRANDS GENES STRUCTURAUX
Abrégé : front page image
(EN)Rapid and highly efficient procedures for the total synthesis of linear, double stranded DNA sequences in excess of about 200 base pairs in length, which sequences may comprise entire structural genes. Novel sequences are prepared from two or more DNA subunits provided with terminal regions comprising restriction endonuclease cleavage sites facilitating insertion of subunits into a selected vector for purposes of amplification during the course of the total assembly process. The total, finally-assembled sequences include at least one, and preferably two or more, unique restriction endonuclease cleavage site(s) at intermediate positions along the sequence, allowing for easy excision and replacement of subunits and the correspondingly facile preparation of multiple structural analogs of polypeptides coded for by the sequences. Manufactured genes preferably include codons selected from among alternative codons specifying the same amino acid on the basis of preferential expression in a projected host microorganism (e.g., E. coli) to be transformed. Illustrated is the preparation and expression of manufactured genes capable of directing synthesis of human immune and leukocyte interferons and of other biologically active proteinaceous products, which products differ from naturally-occurring forms in terms of the identity and/or relative position of one or more amino acids, and in terms of one or more biological and pharmacological properties but which substantially retain other such properties.
(FR)Des procédés rapides et de grande efficacité permettent d'effectuer la synthèse totale de séquences d'ADN linéaires à brin double comportant plus que 200 paires de bases en longueur, lesquelles séquences peuvent comprendre des gènes structuraux entiers. Les nouvelles séquences sont préparées à partir de deux ou plusieurs sous-unités d'ADN ayant des régions terminales comprenant des sites de clivage d'endonucléase de restriction qui facilitent l'insertion des sous-unités dans un vecteur sélectionné à des fins d'amplification pendant le processus d'assemblage total. Les séquences totales finalement assemblées comprennent au moins un, et de préférence deux site(s) unique(s) de clivage d'endonucléase de restriction ou davantage, à des positions intermédiaires le long de la séquence, ce qui permet une excision et un remplacement aisés des sous-unités ainsi que la préparation facilitée d'analogues multiples structuraux de polypeptides codés par les séquences. Des gènes fabriqués comprennent de préférence des codons sélectionnés parmi des variantes de codons spécifiant le même acide aminé d'après l'expression préférentielle dans un micro-organisme hôte (p.ex. E. coli) que l'on désire transformer. Sont illustrées, dans la présente invention, la préparation et l'expression de gènes fabriqués capables de diriger la synthèse d'interférons leucocytes et immunologiques humains et d'autres produits protéiniques biologiquement actifs, lesquels produits diffèrent des formes se produisant naturellement quant à l'identité et/ou la position relative d'un ou plusieurs acides aminés et quant à une ou plusieurs de leurs propriétés biologiques et pharmacologiques mais qui, néanmoins, conservent sensiblement d'autres de ces propriétés.
États désignés : JP.
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, CH, DE, FR, GB, LU, NL, SE).
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)