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1. US20060275830 - Isolation of Proteins Involved in Posttranscriptional Gene Silencing and Methods of Use

Office
États-Unis d'Amérique
Numéro de la demande 11458923
Date de la demande 20.07.2006
Numéro de publication 20060275830
Date de publication 07.12.2006
Type de publication A1
CIB
G01N 33/53
GPHYSIQUE
01MÉTROLOGIE; TESTS
NRECHERCHE OU ANALYSE DES MATÉRIAUX PAR DÉTERMINATION DE LEURS PROPRIÉTÉS CHIMIQUES OU PHYSIQUES
33Recherche ou analyse des matériaux par des méthodes spécifiques non couvertes par les groupes G01N1/-G01N31/146
48Matériau biologique, p.ex. sang, urine; Hémocytomètres
50Analyse chimique de matériau biologique, p.ex. de sang ou d'urine; Test par des méthodes faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques par ligands; Test immunologique
53Tests immunologiques; Tests faisant intervenir la formation de liaisons biospécifiques; Matériaux à cet effet
Déposants MIRKOV T E
INGELBRECHT IVAN L
Inventeurs Mirkov T. Erik
Ingelbrecht Ivan L.
Mandataires BAKER BOTTS L.L.P.
Données relatives à la priorité 10226715 23.08.2002 US
11252080 17.10.2005 US
60314863 24.08.2001 US
Titre
(EN) Isolation of Proteins Involved in Posttranscriptional Gene Silencing and Methods of Use
Abrégé
(EN)

The present invention includes a method for detecting and isolating sugarcane proteins that interact with the HC-Pro and P1 proteins of SrMV and other proteins involved in gene silencing, particularly in sugarcane. The method uses a two hybrid assay with an HC-Pro, P1, or other silencing-related protein-containing bait protein and a prey protein containing a polypeptide encoded by a DNA molecule in a cDNA library. The method also includes identification of false positives through reverse two-hybrid assays and using in vitro techniques such as farwestern blots or pull down assays where plant physiological conditions may be replicated. Finally, interactions may be confirmed in planta. Some novel proteins used in and discovered using the these methods are also identified. Methods of using viral and plant proteins to regulate silencing in plants such as sugarcane are also discussed.