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1. MXPA/a/2005/012081 - SUBSTITUTED PYRIMIDINE DERIVATIVES

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[ ES ]

DERIVADOS DE PIRIMIDINA SUSTITUIDOS

CAMPO DE LA INVENCION

La presente invención se refiere, en general, a compuestos que se unen a receptores CRF y, en particular, a derivados de pirimidina sustituidos como antagonistas del receptor CRFi y al uso de los mismos como un tratamiento para trastornos que están asociados con receptores CRF o CRF-i.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

El factor de liberación de, corticotropina (CRF) es un péptido de 41 aminoácidos que es el principal regulador fisiológico de la secreción de péptidos derivados de proopiomelanocortina (POMC) desde la glándula pituitaria anterior [J. Rivier et al., Proc. Nati. Acad. Sci (USA), 80:4851 (1983); W. Vale et al., Science, 213:1384 (1981)]. Además de su papel endocrino en la glándula pituitaria, se sabe que el CRF tiene una amplia distribución extrahipotalámica en el SNC, contribuyendo en él a un amplio espectro de efectos fisiológicos y de conducta autónomos coherentes con un papel neurotransmisor o neuromodulador en el cerebro [W. Vale et al., Rec. Prog. Horm. Res., 39:245 (1983); G.F. Koob, Persp. Behav. Med., 2:39 (1985); E.B. De Souza et al., J. Neuroscl. 5:3189 (1985)]. Existen pruebas de que el CRF desempeña un papel importante en la integración de la respuesta en el sistema inmunológico a factores estresantes fisiológicos, psicológicos e inmunológicos, en trastornos psiquiátricos y enfermedades neurológicas, incluyendo depresión, trastornos relacionados con la ansiedad y trastornos de la alimentación, y en la etiología y patofisiología de la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, la parálisis supranuclear progresiva y la esclerosis lateral amiotrófica, puesto que están relacionadas con la disfunción de las neuronas CRF en el sistema nervioso central [J.E. Blalock, Physiological Revie s 69:1 (1989); J. J.E. Morley, Life Sci. 41:527 (1987); E.B. De Souze, Hosp. Practice 23:59 (1988)].
Existen pruebas de que el CRF desempeña un papel en los trastornos del estado de ánimo. Los trastornos del estado de ánimo, también denominados trastornos afectivos, están bien reconocidos en la medicina actual, e incluyen la depresión, que incluye la depresión grave, depresión de episodios aislados, depresión recurrente, depresión inducida por maltratos a menores, y depresión posparto; distemia; trastornos bipolares; y ciclotimia. Se ha demostrado que en individuos que padecen un trastorno afectivo, o una depresión mayor, la concentración de CRF en el fluido espinal cerebral (CSF) es significativamente mayor [C.B. Nemeroff et al., Science, 226:1342 (1984); C.M. Banki et al., Am. J. Psychiatry, 144:873 (1987); R.D. France et al., Biol. Psychiatry, 28:86 (1988); M. Arato et al., Biol. Psychiatry 25:355 (11989)]. Además, la densidad de receptores CRF es significativamente menor en la corteza frontal de víctimas de suicidio, lo cual resulta coherente con una hipersecreción de CRF [C.B. Memeroff et al., Arch. Gen. Psychiatry 45:577 (11988)]. Además, en pacientes deprimidos se observa una respuesta truncada de la adrenocorticotropina (ACTH) al CRF (administrado por vía intravenosa) [P.W. Gold et al., Am. J. Psychiatry, 141 :619 (1984); F. Holsboer et al., Psychoneuroendocrinology 9:147 (1984); P.W. Gold et al., New Engl. J. Med. 314:1129 (1986)]. Estudios preclínicos en ratas y en primates no humanos proporcionan más apoyos a la hipótesis de que la hipersecreción de CRF puede estar implicada en los síntomas que se observan en la depresión humana [R.M. Sapolsky, Arch. Gen. Psychiatry 46:1047 (1989)]. También existen pruebas preliminares de que los antidepresivos tricíclicos pueden alterar los niveles de CRF y, por tanto, modular el número de receptores en el cerebro [Grigoriadis et al., Neuropsychopharmacology 2:53 (1989)].
El CRF también se ha implicado en la etiología de los trastornos relacionados con la ansiedad. Los trastornos de ansiedad son un grupo de enfermedades, reconocidas en medicina, que incluyen los trastornos fóbicos, estados de ansiedad, trastorno de estrés postraumático, trastorno de ansiedad generalizado, trastorno de ansiedad social, ansiedad con enfermedad depresiva co-mórbida, trastorno de pánico, trastorno obsesivo-compulsivo, y trastornos de ansiedad atípicos [The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 167 edición (1992)]. El estrés emocional es, a menudo, un factor precipitante en los trastornos de ansiedad, y estos trastornos responden, en general, a medicaciones que disminuyen la respuesta al estrés. Se sabe que unos niveles excesivos de CRF producen efectos ansiógenos en modelos animales [véase, por ejemplo, Britton et al., 1982; Berridge y Dunn, 1986 y 1987], Se han demostrado interacciones entre ansiolíticos de benzodiazepina/no benzodiazepina y el CRF en una diversidad de modelos de ansiedad de conducta [D.R. Britton et al., Life Sci. 31:363 (1982); C.W. Berridge, y A.J. Dunn, Regul. Peptides 16:83 (1986)]. Estudios que utilizan el antagonista del receptor CRF putativo CRF ovino en a-hélice (9-41) en una diversidad de paradigmas de conducta demuestran que el antagonista produce efectos "de tipo ansiolítico" que son cualitativamente similares a las benzodiazepinas [C.W. Berridge y A.J. Dunn, Horm. Behav. 21:393 (1987), Brain Research Reviews 15:71 (1990); G.F. Koob y K.T. Britton, en: Corticotropin-Releasing Factor Basic and Clinical Studies of a Neuropeptide, E.B. De Souza y C.B. Nemeroff eds., CRC Press p.22 (1990)], Estudios neuroquímicos, endocrinos y de unión a receptores han demostrado interacciones entre el CRF y los ansiolíticos de benzodiazepina, proporcionando aún más pruebas de la implicación del CRF en estos trastornos. El clordiazepóxido atenúa los efectos "ansiógenos" del CRF en el ensayo de conflicto [K.T. Britton et al., Psychopharmacology 86:170 (1985); K.T. Britton et al., Psychopharmacology 94:306 (1988)], y en el ensayo de sorpresa acústica [N.R. Swerdlow et al., Psychopharmacology 88:147 (1986)] en ratas. El antagonista del receptor benzodiazepínico Ro 15-1788, que en la prueba de conflicto operante no producía actividad de conducta por sí solo, revierte los efectos del CRF de una manera dependiente de la dosis, mientras que el agonista inverso de benzodiazepinas FG 7142 potencia las acciones del CRF [K.T. Britton et al., Psychopharmacology 94:396 (1988)].
En el documento EP 1097709A2 se ha descrito también el uso de antagonistas de CRF1 para tratar el Síndrome X.
En la patente de EE.UU. 6,043,260 se describe el uso de antagonistas de CRF! para tratar la insuficiencia cardiaca congestiva.
También se ha sugerido que los antagonistas de CRF, son útiles para tratar la artritis y los trastornos inflamatorios [E.L. Webster et al., J. Rheumatol 29:1252 (2002); E.P. Murphy et al., Arthritis Rheum 44:782 (2001)]; los trastornos gastrointestinales relacionados con el estrés [K. E. Gabry et al., Molecular Psychiatry 7:474 (2002); y trastornos de la piel [C. C. Zouboulis et al., Proc. Nati. Acad. Sci. 99:7148 (2002)].
Se ha descrito recientemente, en un modelo animal, que la exacerbación, inducida por estrés, de dermatitis de contacto crónica, se bloquea por un antagonista selectivo de CRFL lo cual sugiere que el CRF, está implicado en la exacerbación, inducida por estrés, de dermatitis de contacto crónica, y que el antagonista de CRFi puede ser útil para tratar este trastorno [K. Kaneko et al., Exp Dermatol 12:47 (2003)].
El documento WO 01/60806 describe compuestos de aril piperazinas que pueden unirse con alta afinidad y alta selectividad a receptores CRF-i.
Un objeto de la invención es proporcionar compuestos derivados de pirimidina sustituidos novedosos.

Otro objeto de la invención es proporcionar derivados de pirimidina sustituidos novedosos que son útiles como antagonistas del receptor CRFi.
Otro objeto de la invención es proporcionar compuestos de pirimidina sustituidas como tratamiento de trastornos o afecciones que están asociados con CRF o con receptores CRF-i, tales como trastornos de ansiedad, depresión, y trastornos relacionados con el estrés.
Es otro objeto de la invención proporcionar un método para tratar trastornos o afecciones que están asociados con CRF o receptores CRF-i, tales como trastornos de ansiedad, trastornos del estado de ánimo, y trastornos relacionados con el estrés.
Es aún otro objeto de la invención proporcionar una composición farmacéutica útil para tratar trastornos o afecciones que están asociados con CRF o receptores CRF-i, tales como trastornos de ansiedad, trastornos del estado de ánimo, y trastornos relacionados con el estrés.
Existen otros objetos de la invención que serán evidentes o aparentes a partir de la descripción de la invención en la memoria descriptiva de la solicitud.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION

Esta invención proporciona un compuesto de Fórmula I,



Fórmula I
un estereoisomero del mismo, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un profármaco del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de un profármaco del mismo, en los cuales:
X se selecciona de -NR3R4, -OR3, -CR3R5R5, -C(0)R -S(0)mR3, -NR3C(0)R4, o


m es 0, 1 ó 2
G se selecciona de N o C(R2);
Ri y R2 se seleccionan independientemente de -H, -NH(alquil), -N(alquil)2, -NH(alquil sustituido), -N(alquil sustituido^, -O(alquil), -0(alqu¡l sustituido), halógeno, alquilo, alquilo sustituido, haloalquilo, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, heteroarilo; arilo sustituido, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo sustituido, -CRsR5Ar, -OAr, -S(0)mAr, -NRsAr, -S(0)malquil, -S(0)malquil sustituido, -CN, -N02, -OH, -NH2, -SH, -C(O)NR4R5 y -C(S)NR4R5;

f¾ y R4 se seleccionan independientemente de heteroarilo, heteroarilo sustituido, aril cicloalquilo, aril cicloalquilo sustituido, heteroaril cicloalquilo, heteroaril cicloalquilo sustituido, aril heterocicloalquilo, aril heterocicloalquilo sustituido, heteroaril heterocicloalquilo, heteroaril heterocicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo o heterocicloalquilo sustituido, a condición de que cuando ambos R3 y R4 están presentes uno de el R3 o R4 se selecciona de un grupo proporcionado en la presente memoria más arriba y el otro R3 o R4 se selecciona de -H, alquilo, alquilo sustituido, haloalquilo, cicloalquilo, cicloalquiquilo sustituido, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido, heteroarilo sustituido, aril cicloalquilo, aril cicloalquilo sustituido, heteroaril cicloalquilo, heteroaril cicloalquilo sustituido, aril heterocicloalquilo, aril heterocicloalquilo sustituido, heteroaril heterocicloalquilo, o heteroaril heterocicloalquilo sustituido. Ar se selecciona de arilo, arilo sustituido, heteroarilo, y heteroarilo sustituido; y
R5 cada uno se selecciona independientemente de -H, alquilo, cicloalquilo, y haloalquilo, en los que alquilo puede estar sustituido con 1-3 sustituyentes seleccionados de halógeno , -O(alquil), -NH(alquil), -N(alquil)2, -C(0)NH(alquil), -C(0)N(alquil)2, -NHC(0)alquil, -N(alquil)C(0)alqu¡l, y -S(0)malquil, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido y Ar.
En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, un estereoisómero del mismo, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un profármaco del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de un profármaco del mismo. Las composiciones se pueden preparar en cualquier forma adecuada, tal como comprimidos, pildoras, polvos, pastillas, sobres, obleas, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles, y pomadas.
Los compuestos de la invención son antagonistas del receptor CRF-i. Así, en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para antagonizar los receptores CRFi en un animal de sangre caliente, que comprende administrar al animal un compuesto de la invención en una cantidad eficaz para antagonizar los receptores CRF-i.
Aún en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para seleccionar ligandos para receptores CRF-i, comprendiendo dicho método: a) realizar un ensayo de unión competitiva con receptores CRF-i, un compuesto de Fórmula I que está marcado con un marcador detectable, y un ligando candidato; y b) determinar la capacidad de dicho ligando candidato para desplazar a dicho compuesto marcado.
Aún en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para detectar receptores CRFi en un tejido, que comprende: a) poner en contacto un compuesto de Fórmula I, que está marcado con un marcador detectable, con un tejido, bajo condiciones que permitan la unión del compuesto al tejido; y b) detectar el compuesto marcado unido al tejido.
Aún en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para inhibir la unión de CRF a receptores CRF-i in vitro, que comprende poner en contacto un compuesto de la invención con una disolución que comprende células que expresan el receptor CRF1, tales como células I R32, en el que el compuesto está presente en la disolución a una concentración suficiente para inhibir la unión del CRF al receptor CRFi.
Los compuestos de la invención son útiles para tratar, en un animal de sangre caliente, en particular, un mamífero, y más en particular en un ser humano, diversos trastornos que están asociados con CRF o con receptores de CRF-i, o trastornos cuyo tratamiento puede, realizarse o facilitarse antagonizando receptores CRF!. Los ejemplos de dichos trastornos incluyen trastornos relacionados con la ansiedad (tales como estados de ansiedad, trastorno de ansiedad generalizada, trastorno de ansiedad social, ansiedad con enfermedad depresiva comórbida, trastorno de pánico, y trastorno obsesivo-compulsivo, trastornos fóbicos, trastorno por estrés postraumático, y trastornos de ansiedad atípicos); trastornos del estado de ánimo, también conocidos como trastornos afectivos (tales como depresión, incluyendo depresión mayor, depresión de episodio único, depresión recurrente, depresión inducida por abusos en la infancia, y depresión posparto; distemia; trastornos bipolares; y ciclotimia); trastorno de estrés postraumático; parálisis supranuclear; supresión inmunológica; síntomas de abstinencia de drogas o alcohol; trastorno de abuso de drogas (e.g., nicotina, cocaína, etanol, opiáceos, u otras drogas); trastornos inflamatorios (tales como artritis reumatoide y osteoartritis); problemas de fertilidad, incluyendo infertilidad; dolor; asma; psoriasis y alergias; fobias; trastornos del sueño inducidos por el estrés; percepción del dolor (tal como fibromialgia); distemia;

trastornos bipolares; ciclotimia; síndrome de fatiga; dolor de cabeza inducido por el estrés; cáncer; infecciones por el virus de la inmunodeficiencia humano (HIV); enfermedades neurodegenerativas (tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Huntington); enfermedades gastrointestinales (tales como úlceras, síndrome del intestino irritable, enfermedad de Crohn, colon espástico, diarrea, e hipersensibilidad colónica e iliónica posoperatoria asociada con estrés o alteraciones psicopatológicas); trastornos alimentarios (tales como anorexia y bulimia nerviosas y otros trastornos de la alimentación); estrés hemorrágico; episodios psicóticos inducidos por el estrés; síndrome de enfermedad eutiroide; síndrome de hormona antidiarrética ¡napropiada (ADH); obesidad; traumatismos cefálicos; traumatismos de la médula espinal; daño neuronal isquémico (por ejemplo, isquemia cerebral tal como la isquemia cerebral del hipocampo); daños neuronales excitotóxicos; epilepsia; trastornos cardiovasculares y relacionados con el corazón (tales como hipertensión, taquicardia e insuficiencia cardiaca congestiva); ictus; disfunciones inmunológicas, incluyendo disfunciones inmunológicas inducidas por el estrés (por ejemplo fiebres inducidas por el estrés, síndrome de estrés porcino, fiebre de embarque bovina, fibrilación paroxística equina, y disfunciones inducidas por el confinamiento en pollos, estrés inducido por el esquileo en ovejas, o estrés inducido por la interacción entre seres humanos-animales en perros); espasmos musculares; incontinencia urinaria; demencia senil de tipo Alzheimer; demencia tras múltiples infartos; esclerosis lateral amiotrófica;

adicciones y dependencias químicas (por ejemplo, dependencia del alcohol, cocaína, heroína, benzodiazepinas u otros fármacos); osteoporosis; enanismo psicosocial, hipoglucemia, y trastornos cutáneos (tales como acné, psoriasis, dermatitis por contacto crónica, y trastornos cutáneos exacerbados por el estrés). También son útiles para estimular el abandono del tabaco y el crecimiento capilar, o para tratar la pérdida de cabello.
Así, aún en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno en un animal de sangre caliente, en donde el tratamiento de dicho trastorno pueda realizarse o facilitarse antagonizando receptores CRF-i , comprendiendo el método administrar a un paciente que lo necesite, una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I. En una realización particular, la invención proporciona un método para tratar trastornos que manifiestan hipersecreción de CRF. Los ejemplos de trastornos que se pueden tratar con los compuestos de la invención incluyen trastorno de ansiedad generalizada; trastorno de ansiedad social; ansiedad; trastorno obsesivo-compulsivo; ansiedad con enfermedad depresiva comórbida; trastorno de pánico, y trastornos del estado de ánimo tal como la depresión, incluyendo depresión grave, depresión de episodio único, depresión recurrente, depresión inducida por abusos en la infancia, depresión posparto, caída del cabello, y dermatitis de contacto. Se prefiere que el animal de sangre caliente sea un mamífero y, más preferiblemente, que el animal sea un ser humano.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

La presente invención proporciona un compuesto de Fórmula 1 , descrito anteriormente.
Los compuestos de fórmula general I particularmente preferidos son aquellos en los que X es -NR3R4.
Otros compuestos preferidos de la invención son aquellos de fórmula general 1 en los que X es -NR3R4 y uno de R3 o R4 es aril cicloalquilo o heteroaril cicloalquilo.
Otros compuestos preferidos de la invención son aquellos de fórmula general I en los que X es -NR3R4 y uno de R3 o R4 es aril cicloalquilo o heteroaril cicloalquilo y el punto de unión es el, anillo de cicloalquilo.
Otros compuestos preferidos de la invención son aquellos de fórmula general I en los que X es -NR3R4 y uno de R3 o R4 es aril cicloalquilo o heteroaril cicloalquilo y el punto de unión es el anillo de cicloalquilo y uno de R3 o R4 es hidrógeno.
Otros compuestos preferidos de la invención son aquellos de fórmula general 1 en los que X es -NR3P4 y uno de R3 o R4 es aril cicloalquilo sustituido o heteroaril cicloalquilo sustituido y el punto de unión es el anillo de cicloalquilo y uno de R3 o R4 es hidrógeno.
Otros compuestos preferidos de la invención son aquellos de fórmula general I en los que X es -NR3R.4 y uno de R3 o R es aril cicloalquilo sustituido o heteroaril cicloalquilo sustituido en los que el sustituyente es o alquilo o alcoxilo y está sobre el anillo de cicloalquiio y el punto de unión es el anillo de cicloalquiio y uno de R3 o R4 es hidrógeno.
Otros compuestos preferidos de la invención son aquellos de fórmula general I en los que X es -NR3R4 y uno de R3 o R4 es aril cicloalquiio sustituido o heteroaril cicloalquiio sustituido en los que el sustituyente es o alquilo o alcoxilo y está sobre el anillo de cicloalquiio y la estereoquímica absoluta de estos sustituyentes del anillo es (R,R), (R,S), (S,R), o (S,S) y el punto de unión es el anillo de cicloalquiio y uno de R3 o R4 es hidrógeno.
Los compuestos particularmente preferidos de la invención son aquellos de fórmula general I en los que X es -NR3R4 y R3 es 1-indanilo 2-sustituido y R4 es hidrógeno.
Otros compuestos particularmente preferidos de la invención son aquellos de fórmula general I en los que X es -NR3R4 y R3 es 2-alcoxi-1-indanilo y R4 es hidrógeno.
Otros compuestos particularmente preferidos de la invención son aquellos de fórmula general 1 en los que X es -NR3R4 y R3 es 2(S)-alcoxi-1(R)-indanilo y R4 es hidrógeno.
Los compuestos proporcionados en la presente memoria pueden tener uno o más centros o planos asimétricos, y todas las formas quirales (enantioméricas y diastereoméricas) y racémicas de los compuestos están incluidas en la presente invención. Muchos isómeros geométricos de olefinas, dobles enlaces C=N, y similares, pueden estar presentes en los compuestos, y todos los isómeros estables dichos se contemplan en la presente invención.

Los compuestos de la invención se aislan en forma racémica, o bien en forma ópticamente pura, por ejemplo mediante la resolución de la forma racémica por métodos convencionales, tales como cristalización en presencia de un agente de resolución, o mediante cromatografía utilizando, por ejemplo, una columna de HPLC quiral, o bien pueden ser sintetizados mediante una vía de síntesis asimétrica que permita la preparación de material enantoméricamente enriquecido. La presente invención incluye todos los posibles tautómeros de los compuestos representados por la Fórmula I.
Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse usando los métodos esquematizados en los gráficos A-K y descritos más abajo, junto con los métodos sintéticos conocidos en la técnica de química orgánica sintética, o sus variaciones como se aprecia por los expertos en la técnica. Los que son expertos en la técnica reconocerán que se pueden variar los productos de partida y se pueden emplear etapas adicionales para producir los compuestos abarcados por la invención.

Gráfico A



Los derivados de pirimidina se pueden preparar según se resume en el Gráfico A, en el que R-i y R2 son como se definen para la Fórmula I y X representa halógeno, preferentemente cloruro o bromuro.

Los compuestos tales como A-l se pueden preparar según un procedimiento bibliográfico conocido [J. Org. Chem. 1983, 48, 1060]. La reducción del grupo nitro en A-l se puede llevar a cabo mediante diversos métodos conocidos en la técnica, que incluyen hidrogenación con hidrógeno y catalizadores de metales de transición o el uso de hidrosulfito sódico en disoluciones acuosas para dar All. Alternativamente los compuestos tales como A-II se pueden preparar por alquilación del grupo amino con electrófilos adecuados (por ejemplo, epóxidos como se describe en J. Med. Chem. 1997. 40, 24). La aminopiridina A-ll se puede transformar en A-lll por aminación reductora utilizando aldehidos y agentes reductores tales como el triacetoxiborohidruro de sodio en disolventes inertes. La halopiridina A-III se puede convertir en la arilpirimidina A-IV mediante una reacción de acoplamiento catalizada por metales de transición con un reactivo de arilmetálico, (Ar-[M]). Los pares más comúnmente empleados de reactivo/catalizador incluyen ácido aril borónico/paladio(0) [reacción de Stille : T. N. itchell, Synthesis 1992, 8031 , arilcinc/palad¡o(0) y aril Grignard/níquel(ll). Paladio(O) representa un sistema catalítico hecho de diversas combinaciones de pares metal/ligando, que incluyen, pero no se limitan a, tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0), acetato de paladio(ll)/tri(o-toIil)fosfina, tris(dibencil¡denacetona)palad¡o(0)/tr¡-terc-but¡lfosfina y dicloro[1 ,1'-bis(d¡fenilfosfina)ferroceno]palad¡o(0). Níquel(ll) representa catalizadores que contienen níquel tales como [1 ,2- bis(difenilfosfino)etano]dicloroniquel(ll) [1.3-bis(difenilfosfino)propano]d¡cloroniquel(ll).

Gráfico B



También se pueden prepara compuestos de fórmula B-IV según se esquematiza en el Gráfico B, cambiando la secuencia de acontecimientos en el Gráfico A, pero utilizando los mismos métodos descritos para el Gráfico A.

Gráfico C



Un método alternativo para introducir los sustituyentes R3 y R4 para dar compuestos de fórmula C-IV se esquematiza en el Gráfico C y se puede llevar a cabo por diversos métodos conocidos en la técnica. Estos métodos incluyen la reacción de la amina C-l con cloruros o anhídridos de ácido en presencia de bases tales como, pero no limitadas a, trietilamina o piridina en disolventes inertes tales como diclorometano o tolueno. A continuación el grupo N-H se puede desprotonar mediante una base fuerte tal como, pero no limitada a, hidruro de metal alcalino, amida de meta! alcalino, o alcóxido de metal alcalino en disolventes inertes tales como, pero no limitados a, tetrahidrofurano (THF), dimetilformamida (D F) o dimetilsulfóxido. La aiquilación se puede realizar utilizando haluro de alquilo, convenientemente bromuro o yoduro, a temperaturas que se extienden desde 0°C a 100°C. La reducción de la amida C-lll con agentes reductores tales como, pero no limitados a, hidruro de litio y aluminio, borano o hidruro de diisobutilaluminio en disolventes inertes tales como, pero no limitados a, THF, éter, o tolueno proporciona compuestos de fórmula C-IV.

Gráfico D



En el Gráfico D se ¡lustra otro método para preparar compuestos de fórmula D-ll. El tratamiento de la amina D-l con base tale como, pero no limitada a, hidruro de metal alcalino, amida de metal alcalino, alcóxido de metal alcalino o carbonates de metales alcalinos en disolventes inertes tales como, pero no limitados a, THF, DMF, dimetilsulfóxido o acetonitrilo con o sin la adición de yoduro de metal alcalino, seguido por la aiquilación con haluro de alquilo, convenientemente bromuro o yoduro, o sulfonato de alquilo a temperaturas que se extienden desde 0°C a 100°C proporciona compuestos de fórmula D-ll.

Gráfico E



Los compuestos de piridina de la presente invención se pueden preparar mediante las rutas esquematizadas en los Gráficos F-K. Por ejemplo, los acoplamientos cruzados selectivos catalizados por metales de la 2,5-halopiridina El proporciona 5-halo-2-piridinas E-ll (hal = halógeno). La 3-alcoxi-6-arilpiridina E-lll deseada se obtiene calentando E-ll con alcóxido. La oxidación de E-lll se puede llevar a cabo con un oxidante adecuado, tal como el ácido m-cloroperoxibenzoico para proporcionar E-IV. La calefacción de E-IV en POCI3 proporciona el intermedio halogenado E-V. La conversión de E-V proporciona los compuestos, por ejemplo, 2,3-dialcoxi-6-arilpiridina E-VI por desplazamiento nucleófilo, 2-alquil-3-alcoxi-6-arilp¡r¡dina E-VII por acoplamiento cruzado y 2-amino-3-alcoxi-6-arilpiridina E-VIII por aminación.

Gráfico F



Las 3-alcoxipiridinas también se preparan por alquilación de 3-piridinoles por el método mostrado en el Gráfico F. La nitración de F-l utilizando métodos conocidos por la persona experta en la técnica seguida por hidroxi desdiazotación proporciona FU. El tratamiento de F-II con POCI3 caliente proporciona F-lll. El acoplamiento cruzado de F-lll con una unidad arilo apropiada proporciona F-IV. El grupo nitro de F-IV se reduce posteriormente utilizando métodos conocidos por los expertos en la técnica, que incluyen pero no se limitan a hidrogenación o SnCfe, proporcionando F-V. La hidroxi desdiazotación de F-V proporciona F-VI. La alquilación de F-VI da los compuestos objetivo 3-alcoxi-6-arilpiridina F-VI I .

Las arilpiridinas también se pueden preparar por construcción del anillo de piridina como se muestra en el Gráfico G. La condensación de ácidos malónicos G-l con aminas G-ll da dihidroxipiridinas G-lll. El tratamiento de G-III con POCI3 caliente proporciona G-IV. Se desarrolla el acoplamiento cruzado selectivo de G-IV al halógeno más altamente activado para producir 2-aril-4-cloropiridina G-V. La incorporación de R2 se desarrolla vía sustitución nucleófila para proporcionar G-VI. La hidrólisis de G-VI da el ácido carboxilico G-VII. La transposición de Curtius seguida por la protección de la amina con un grupo protector carbamato proporciona G-VIII. La alquilación de la amida resultante proporciona G-IX.
La desprotección y, si se desea, la alquilación reductora da el compuesto objetivo G-X.

Gráfico H



En el Gráfico H se describe una síntesis alternativa de 2-amino-3-alcoxi-6-arilpirid¡nas. La yodación de H-l proporciona H-ll, que se puede alquilar para dar la correspondiente 3-alcoxipiridina H-lll. Aplicando cuidadosamente la quimioselectividad entre el halo en 2 y el yodo en 6, la halopirazina H-lll se puede convertir en arilpirazina H-IV mediante una reacción de acoplamiento catalizada por metales de transición con un reactivo metaloarílico (G-[M]). Los pares reactivo/catalizador más comúnmente empleados incluyen ácido aril borónico/paladio(0) (reacción de Suzuki; N. Miyaura and A. Suzuki, Chemical Review 1995. 95, 2457), aril trialquilestaño/paladio(0) (reacción de Stille; T. N. Mitchell, Synthesis 1992, 803), arilcinc/paladio(0) y aril Grignard/níquel(ll). La aminación de H-IV en presencia de un catalizador adecuado de metal de transición tal como, pero no limitado a, acetato de paladio(ll) o tris (dibencilidenacetona)dipaladio(O), un ligando tal como, pero no limitado a, 1 ,1'-bis(difenilfosfina)ferroceno, 2,2'-bis(difenilfosfina)-1 ,1'-binaftilo, dicilohexil(2-bifenil)fosfina, triciclohexilfosfina, o tri-terc-butilfosfina, y una base tal como terc-butóxido de sodio o potasio en disolventes inertes tales como, pero no limitados a, tolueno, etilenglicol dimetil éter, diglime, DMF, o N-metilpirrolidinona a temperaturas que se extienden desde ambiente a 100°C proporciona H-V. La halogenación de H-V seguida por una reacción de acoplamiento cruzado catalizada por metales proporciona el compuesto objetivo H-VII.

Gráfico J


En el Gráfico J. aún se esquematiza otra ruta a las piridinas de interés. La alquilación de 3-haIo-5-piridinoI J-l proporciona J-ll. El acoplamiento cruzado catalizado por metales de J-ll da J-lll. Se desarrolla la halogenación de J-lll para entregar J-IV. La ronda posterior de acoplamiento cruzado catalizado por metales a J-IV proporciona la piridina trisustituida J-V. Una segunda etapa de halogenación da J-VI. Un acoplamiento cruzado catalizado por metales final da lugar al compuesto objetivo J-VII.

Gráfico K


En el Gráfico K aún se esquematiza otra ruta a las piridinas de interés. Un acoplamiento de Buchwald de una amina adecuadamente sustituida proporciona K-lll. Finalmente, la alquilacion en presencia de una base adecuada proporcionaría K-IV.
La presente invención también abarca las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula I. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables son sales preparadas a partir de ácidos inorgánicos o ácidos orgánicos, tales como ácidos inorgánicos y orgánicos de restos básicos tales como aminas, por ejemplo, ácido acético, bencenosulfónico, benzoico, amforsulfónico, cítrico, etenosulfónico, fumárico, glucónico, glutámico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, nítrico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, ácido barbárico, p-toluensulfónico y similares; y sales orgánicas o de metales alcalinos de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos, por ejemplo, sales de metales alcalinos y alcalinotérreos derivadas de las siguientes bases: hidruro sódico, hidróxido sódico, hidróxido potásico, hidróxido cálcico, hidróxido de aluminio, hidróxido de litio, hidróxido de magnesio, hidróxido de cinc, amoníaco, trimetilamina, trietilamina, etilendiamina, lisina, arginina, ornitina, colina, Ν,Ν'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, dietanolamina, procaína, n-bencilfenetilamina, dietilamina, piperazina, tris(hidroximetil)-am¡nometano, hidróxido de tetrametilamonio, y similares.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención pueden prepararse mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales se preparan, por ejemplo, haciendo reaccionar las formas de ácido o base libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiados en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos; en general, se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Se encuentran listas de sales adecuadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418, la descripción de las cuales se incorpora en la presente memoria como referencia.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un profármaco de un compuesto de Fórmula I. El profármaco se prepara con el objetivo o los objetivos de mejorar la estabilidad química, mejorar la aceptación y cumplimiento por el paciente, mejorar la biodisponibilidad, prolongar la duración de acción, mejorar la selectividad hacia órganos (que incluye la mejora de la penetración en el cerebro), mejorar la formulación (por ejemplo, el incremento de la hidrosolubilidad), y/o disminuir los efectos secundarios (por ejemplo, la toxicidad). Véase, por ejemplo, T. Higuchi y V. Stella, "Prodrugs as Novel Delivery Systems", vol. 14 de A.C.S. Symposium Series; Bioreversible Carriers ¡n Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, (1987). Los profármacos incluyen, pero sin quedar limitados a éstos, compuestos derivados de compuestos de Fórmula I en los cuales grupos hidroxi, amina o sulfhidrilo, en caso de estar presentes, están unidos a cualquier grupo que, cuando sea administrado al sujeto, se escinda para formar el grupo hidroxilo, amino o sulfhidrilo libre, respectivamente. Ejemplos seleccionados incluyen, pero sin quedar limitados a éstos, amidas biohidrolizables, ésteres biohidrolizables y carbamatos biohidrolizables, carbonatos, derivados de acetato, formiato y benzoato de grupos funcionales alcohol y amina.
El profármaco puede ser preparado con facilidad a partir de los compuestos de Fórmula I utilizando métodos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Notari, R. E., "Theory and Practice of Prodrug Kinetics," Methods in Enzymology, 112:309-323 (1985); Bodor, N., "Novel Approaches in Prodrug Design," Drugs of the Future, 6(3)165-182 (1981); y Bundgaard, H., "Design of Prodrugs: Bioreversible-Derivatives for Various Functional Groups and Chemical Entities," en Design of Prodrugs (H. Bundgaard, ed.), Elsevier, N.Y. (1985); Burger's Medicinal Chemistry and Drug Chemistry, 51 ed., vol. 1, pp. 172-178, 949-982 (1995). Por ejemplo, se pueden transformar en profármacos los compuestos de Fórmula I convirtiendo en ésteres uno o más de los grupos hidroxi o carboxi.
La invención también incluye compuestos marcados isotópicamente, que son idénticos a los citados en la Fórmula I, salvo por el hecho de que uno o más átomos se remplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentra usualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxigeno, fósforo, flúor, yodo y cloro, tales como 3H, 11C, 14C, 8F, 123l, y 125l. Los compuestos de Fórmula I que contienen los isótopos antes mencionados y/u otros isótopos de otros átomos se encuentran dentro del alcance de la invención. Los compuestos de la presente invención marcados isotópicamente, por ejemplo aquellos en los que se han incorporado isótopos radiactivos tales Como 3H y 14C, son útiles en ensayos de distribución tisular del fármaco y/o del sustrato. Los isótopos tritiados, es decir, 3H, y con carbono 14, es decir, 14C, son particularmente útiles en la PET (siglas inglesas de tomografía por emisión de positrones), y los isótopos con 25l son particularmente útiles en la SPECT (siglas inglesas de tomografía de emisión de fotón único asistida por ordenador); todas ellas técnicas útiles en la obtención de imágenes del cerebro. Además, la sustitución con isótopos más pesados, como deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que resultan de la mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, el aumento de la semivida in vivo o la reducción de los requerimientos de dosificación y, por tanto, se pueden preferir en algunas circunstancias. Los compuestos marcados isotópicamente de Fórmula I de esta invención pueden prepararse, en general, llevando a cabo los procedimientos sintéticos mediante la sustitución de un reactivo marcado isotópicamente por un reactivo no marcado isotópicamente.
Los compuestos de Fórmula I son antagonistas en el receptor CRF-i, capaces de inhibir la unión específica del CRF al receptor CRF^ y de antagonizar las actividades asociadas pon el receptor CRF-i. La eficacia de un compuesto como antagonista del receptor CRF puede determinarse mediante diversos métodos de ensayo. Se puede evaluar un compuesto de Fórmula l en cuanto a su actividad como antagonista de CRF mediante uno o más ensayos generalmente aceptados para este fin, que incluyen (pero sin quedar limitados a éstos) los ensayos descritos por De Souza et al.(J. Neuroscience, 7:88, 1987) y Battagiia et al.(Synapse, 1 :572, 1987). La afinidad por el receptor CRF puede determinarse mediante estudios de unión que miden la capacidad de un compuesto para inhibir la unión del CRF marcado radiactivamente (por ejemplo [125l]tirosina-CFR) a su receptor (por ejemplo receptores preparados a partir de membranas de corteza cerebral de rata). El ensayo de unión de radioligando descrito por DeSouza et al. (supra, 1987) proporciona un ensayo para determinar la afinidad de un compuesto hacia el receptor de CRF. Esta actividad se calcula, de forma típica, a partir de la IC50, como la concentración de un compuesto necesaria para desplazar 50% del ligando marcado radiactivamente del receptor, y se indica como valor "Ki". Los valores de IC50 y Ki se calculan empleando métodos habituales conocidos en la técnica, por ejemplo mediante el programa de ajuste no lineal de curvas GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA). Se considera que un compuesto es activo si tiene una Ki inferior a aproximadamente 10 micromolar (μΜ) para la inhibición de receptores CRF-i. La afinidad de unión de los compuestos de Fórmula I expresada como valores de Ki se extiende generalmente desde aproximadamente 0.5 nanomolar a aproximadamente 10 micromolar. Los compuestos de Fórmula I preferidos exhiben valores de Ki de 1 micromolar o inferior, los compuestos de Fórmula I más preferidos exhiben valores de Ki inferiores a 100 nanomolar, los compuestos de Fórmula I aún más preferidos exhiben valores de Ki inferiores a 10 nanomolar.
Además de inhibir la unión al receptor CRF, puede establecerse la actividad antagonista del receptor CRF de un compuesto mediante la capacidad que tiene el compuesto de antagonizar una actividad asociada con CRF. Por ejemplo, se sabe que el CRF estimula diversos procesos bioquímicos, incluyendo la actividad adenilato-ciclasa. Por tanto, se pueden evaluarse como antagonistas del CRF los compuestos a través de su capacidad para antagonizar la actividad de adenilato-ciclasa estimulada por CRF, midiendo, por ejemplo, los niveles de cAMP. El ensayo de actividad adenilato-ciclasa estimulada por CRF descrito en Battaglia et al. (supra, 1987) proporciona un ensayo para determinar la capacidad de un compuesto para antagonizar la actividad del CRF. De manera alternativa, la actividad de adenilato-ciclasa o la producción de cAMP pueden ser evaluadas en un formato de 96/384 pocilios utilizando el sistema ELISA competitivo para cAMP, de Applied Biosystems (Bedford, MA) de acuerdo con los protocolos que se suministran. En pocas palabras, se añade una cantidad fija de conjugado de cAMP y fosfatasa alcalina (cAMP-AP) diluido a placas de 96 o 386 pocilios que contienen muestras de células que han sido estimuladas con CRF en presencia o en ausencia de inhibidores. Se añade a la mezcla anticuerpo anti-cAMP, y se incuba durante 1 hora. Tras sucesivos pasos de lavado, se añade la solución de sustrato quimioluminiscente e intensificador, que produce una señal luminosa que puede ser detectada empleando un contador de centelleo para microplacas tal como el Packard TopCount. El cAMP producido por las células desplazará del anticuerpo el conjugado cAMP-AP, originando una disminución de la señal detectable. En el ejemplo C, que se ofrece a continuación, se proporciona un ejemplo de un ensayo de actividad de adenilat6c¡clasa estimulada por CRF.
Por tanto, en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para antagonizar los receptores CRFi en un animal de sangre caliente, que comprende administrar al animal un compuesto de la invención en una cantidad eficaz para antagonizar los receptores CRF-i. El animal de sangre caliente es preferiblemente un mamífero, y más preferiblemente un ser humano.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno en un animal de sangre caliente, en donde el trastorno manifieste hipersecreción de CRF, o bien el tratamiento de dicho trastorno pueda ser realizado o facilitado antagonizando receptores CRFi, que comprende administrar al animal una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención. El animal de sangre caliente es preferiblemente un mamífero, y más preferiblemente un ser humano.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para seleccionar ligandos para receptores CRF-i, comprendiendo dicho método: a) realizar un ensayo de unión competitiva con receptores CRFi, un compuesto de Fórmula I que está marcado con un marcador detectable, y un ligando candidato; y b) determinar la capacidad de dicho ligando candidato para desplazar a dicho compuesto marcado. El procedimiento de ensayo para la prueba de unión competitiva es bien conocido en la técnica, y está ¡lustrado en el Ejemplo A.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para detectar receptores CRFi en un tejido, que comprende: a) poner en contacto un compuesto de Fórmula I, que está marcado con un marcador detectable, con un tejido, bajo condiciones que permitan la unión del compuesto al tejido; y b) detectar el compuesto marcado unido al tejido. El procedimiento de ensayo para detectar receptores en tejidos es muy conocido en la técnica.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para inhibir la fijación de CRF a receptores CRF-i, que comprende poner en contacto un compuesto de la invención con una solución que comprende células que expresan el receptor CRFi, en donde el compuesto está presente en la solución a una concentración suficiente para inhibir la fijación de CRF al receptor CRF-i. Un ejemplo de la línea celular que expresa el receptor CRF-i y que se puede utilizar en el ensayo ¡n vitro lo constituyen las células IMR32, conocidas en la técnica
Los compuestos de Fórmula l, o un estereoisómero, una sal farmacéuticamente aceptable, o un profármaco de los mismos, son útiles para el tratamiento de un trastorno en un animal de sangre caliente, manifestando dicho trastorno una hipersecreción de CRF, o bien el tratamiento de dicho trastorno puede realizarse o facilitarse antagonizando los receptores CRF-i. En la presente memoria se han descrito más arriba ejemplos de dichos trastornos. También son útiles para estimular el abandono del tabaco o para favorecer el crecimiento capilar.
Por tanto, en otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar un trastorno descrito anteriormente en la presente, que comprende administrar a un animal de sangre caliente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención. El animal de sangre caliente es preferiblemente un mamífero, en particular un ser humano.
Trastornos particulares que se pueden tratar mediante el método de la invención incluyen preferentemente los siguientes: trastornos relacionados con la ansiedad, tales como trastorno de ansiedad generalizada, trastorno de ansiedad social, ansiedad con enfermedad depresiva comórbida, trastorno obsesivo-compulsivo, y trastorno de pánico, estados de ansiedad, trastornos fóbicos, ansiedad con enfermedad depresiva comórbida, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno por estrés postraumático, y trastornos de ansiedad atípicos; trastornos del estado de ánimo tales como depresión, incluyendo la depresión grave, depresión de episodio único, depresión recurrente, depresión inducida por abusos en la infancia, y depresión posparto, trastornos bipolares, trastornos de estrés postraumático, distemia, y ciclotimia; trastorno de abuso de drogas (e.g., nicotina, cocaína, etanol, opiáceos, u otras drogas); trastornos inflamatorios, como artritis reumatoide y osteoaríritis; enfermedades gastrointestinales tales como síndrome del intestino irritable, úlceras, enfermedad de Crohn, colon espástico, diarrea, e hipersensibilidad colónica e iliónica posoperatoria asociada con estrés o alteraciones psicopatológicas; y trastornos cutáneos tales como acné, psoriasis, y dermatitis crónica de contacto.
Trastornos particulares que se pueden tratar mediante el método de la invención incluyen más preferentemente los siguientes: trastornos relacionados con la ansiedad; trastornos del estado de ánimo; trastornos de inflamación; y dermatitis crónica de contacto.
Los trastornos particulares que pueden ser tratados mediante el método de la invención incluyen aún más preferiblemente trastornos relacionados con ansiedad, en particular ansiedad generalizada, y trastornos del estado de ánimo, en particular depresión grave.
Las cantidades de los compuestos de la invención terapéuticamente eficaces para tratar las enfermedades o trastornos antes descritos en un animal de sangre caliente pueden determinarse de diversas formas, conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo administrando diversas cantidades de un agente concreto a un animal que padece un trastorno concreto, y determinando después el efecto sobre el animal. De forma típica, pueden administrarse cantidades terapéuticamente eficaces de un compuesto de esta invención por vía oral, a una dosificación del ingrediente activo de 0.002 a 200 mg/kg de peso corporal. Normalmente será eficaz para obtener el efecto farmacológico deseado una dosis de 0.01 a 10 mg por kilogramo en dosis divididas, de una a cuatro veces al día, o en una formulación de liberación sostenida. Se entenderá, sin embargo, que los niveles específicos de dosis para cualquier paciente particular dependerá de diversos factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso, estado de salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, ruta de administración, y velocidad de excreción, combinación de fármacos y la gravedad de la enfermedad particular. La frecuencia de la dosificación también puede variar dependiendo del compuesto utilizado y de la enfermedad concreta tratada. Sin embargo, para el tratamiento de la mayoría de los trastornos del SNC, se prefiere un régimen de dosificación de cuatro o menos veces al día. Para el tratamiento del estrés y de la depresión, se prefiere particularmente un régimen de dosificación de una o dos veces al día.
Se puede administrar un compuesto de esta invención para tratar los trastornos anteriormente mencionados mediante medios que pongan en contacto el agente activo con el lugar de acción del agente en el cuerpo de un mamífero, tal como la administración por vía oral, tópica, dérmica, parenteral o rectal, o mediante inhalación o pulverización utilizando formas farmacéuticas apropiadas. El término "parenteral", tal como se utiliza en la presente memoria, incluye inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular, intraesternal o técnicas de infusión. El compuesto puede ser administrado solo, pero será administrado, en general, con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Así, en aún otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, un estereoisómero del mismo, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o un profármaco del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de un profármaco del mismo. En una realización, la composición farmacéutica comprende además un vehículo, diluyente o excipiente* farmacéuticamente aceptable para la misma. Un "vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable" es un medio aceptado en general en la técnica para la administración de agentes biológicamente activos a mamíferos, por ejemplo seres humanos. Dichos vehículos se formulan generalmente según un número de factores bien conocidos dentro del alcance de los normalmente expertos en la técnica, para determinar y dar cuenta. Estas incluyen, sin limitación: el tipo y naturaleza del agente activo a formular; el sujeto al que se va a administrar la composición que contiene el agente; la vía prevista de administración de la composición; y la indicación terapéutica que se quiere tratar. Los vehículos y excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen medios líquidos tanto acuosos como no acuosos, además de diversas formas farmacéuticas sólidas y semi-sólidas. Dichos vehículos pueden incluir diversos ingredientes y aditivos además del agente activo, incluyéndose dichos ingredientes adicionales en la formulación por una diversidad de razones, por ejemplo, la estabilización del agente activo, bien conocidas por los expertos ordinarios en la técnica. Descripciones de vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados, y factores implicados en su selección, se encuentran en una diversidad de fuentes fácilmente disponibles, por ejemplo en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a edición, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, cuyo contenido se incorpora en la presente memoria como referencia.
Las composiciones destinadas al uso por vía oral pueden encontrarse en forma de comprimidos, trociscos, pastillas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos dispersables o gránulos, emulsiones, cápsulas duras o blandas, jarabes o elixires, y se pueden preparar de acuerdo con métodos conocidos en la técnica. Estas composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, para proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y de sabor agradable.
Los comprimidos contienen el ingrediente activo mezclado con excipientes inocuos y farmacéuticamente aceptables, que sean adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación y disgregantes, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo almidón, gelatina o goma arábiga, y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden estar sin revestir, o pueden revestirse mediante técnicas conocidas para retrasar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal, y puede emplearse un material de retraso, como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo.
Las formulaciones para uso por vía oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatina dura, en las cuales el ingrediente activo está mezclado con un diluyente sólido inerte, por ejemplo carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda, en las cuales el ingrediente activo está mezclado con agua o con un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.
Las suspensiones acuosas contienen los materiales activos mezclados con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Estos excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidropropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma arábiga; los agentes dispersantes o humectantes pueden ser un fosfátido natural, por ejemplo, lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo poli(estearato de oxietileno), o productos de condensación de un óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ásteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexital tal como poli(monooleato de oxietilensorbitol), o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo poli(monooleato de etilensorbitán). Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes, por ejemplo etil o n-propil p-hidroxibenzoato, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina.
Las suspensiones oleosas pueden formularse suspendiendo los ingredientes activos en un aceite vegetal, por ejemplo aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de soja, aceite de sésamo o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo cera de abejas, parafina sólida o alcohol cetílico. Se pueden añadir agentes edulcorantes tales como los expuestos más arriba, y aromatizantes para proporcionar preparaciones orales apetecibles. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante, tal como el ácido ascórbico.
Los polvos dispersables y los gránulos adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan el ingrediente activo mezclado con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión y uno o más conservantes. Los agentes dispersantes o humectantes y los agentes de suspensión adecuados se ejemplifican por los mencionados anteriormente. Otros excipientes, por ejemplo, agentes edulcorantes, aromatizantes y colorantes, también pueden estar presentes.
Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden encontrarse también en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo parafina líquida, o mezclas de éstos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser gomas presentes en la naturaleza, por ejemplo goma arábiga o goma tragacanto, fosfátidos presentes en la naturaleza, por ejemplo lecitina de soja, y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol, anhídridos, por ejemplo monooleato de sorbitán, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo monooleato de polioxietilensorbitán. Las emulsiones pueden contener también agentes edulcorantes y aromatizantes.
Los jarabes y elixires también pueden formularse con agentes edulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Estas formulaciones también pueden contener un demulcente, un conservante y agentes aromatizantes y colorantes.
Los supositorios para la administración rectal de un compuesto de la invención pueden prepararse mezclando el compuesto con un excipiente no irritante adecuado, que es sólido a temperatura normal, pero líquido a temperatura rectal y, por tanto, se fundirá en el recto para liberar el fármaco. Los ejemplos de estos materiales son mantequilla de cacao y polietilenglicoles.
Las composiciones farmacéuticas pueden encontrarse en forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede haber sido formulada según la técnica conocida, utilizando los agentes dispersantes o humectantes y de suspensión adecuados, que se han mencionado antes. La solución o suspensión inyectable estéril puede estar formulada en un diluyente o disolvente inocuo y parenteralmente aceptable, por ejemplo en forma de una solución en 1 ,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear se encuentran el agua, la disolución de Ringers, y una disolución isotónica de cloruro de sodio. Se. emplean además, de modo convencional, aceites fijos estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este fin puede emplearse cualquier aceite fijo suave, por ejemplo Tono- o diglicéridos sintéticos. Para preparar productos inyectables se pueden utilizar, además, ácidos grasos tales como el ácido oleico.
Las formas farmacéuticas adecuadas para la administración contienen, en general, de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg de ingrediente activo por unidad. En estas composiciones farmacéuticas, el ingrediente activo estará presente, normalmente, en una cantidad de aproximadamente 0.5% a 95% en peso, basada en el peso total de la composición. Los ejemplos de formas de farmacéuticas para la administración de los compuestos de la invención incluyen los siguientes: (1) Cápsulas. Se prepara un gran número de unidades de cápsulas rellenando cápsulas de gelatina dura de dos partes convencionales con 100 mg de ingrediente activo en polvo, 150 mg de lactosa, 50 mg de celulosa y 6 mg de estearato de magnesio cada una; (2) Cápsulas de gelatina blanda. Se prepara una mezcla de ingrediente activo en un aceite digerible, tal como aceite de soja, aceite de semilla de algodón o aceite de oliva, y se inyecta mediante un desplazamiento positivo en gelatina para formar cápsulas de gelatina blanda que contienen 100 mg del ingrediente activo. Las cápsulas se lavan y se secan; (3) Comprimidos. Un gran número de comprimidos se preparan mediante procedimientos convencionales de modo que la unidad de dosificación sea 100 mg de ingrediente activo, 0.2 mg de dióxido de silicio coloidal, 5 mg de estearato de magnesio, 275 mg de celulosa microcristalina, mg de almidón, y 98.8 mg de lactosa. Los revestimientos apropiados pueden aplicarse para aumentar la apetecibilidad o la absorción retrasada.
En aún otro aspecto, la presente invención proporciona un artículo de fabricación que comprende: a) un material de envase; b) un agente farmacéutico que comprende un compuesto de la invención contenido dentro de dicho material de envase; y c) una etiqueta o inserto dentro del envase que indique que dicho agente farmacéutico puede utilizarse para tratar un trastorno descrito más arriba.

Definiciones v convenciones
Se utilizan las siguientes definiciones a lo largo de la solicitud, a menos que se describa lo contrario.
El término "halógeno" significa un grupo seleccionado de -F, -Cl,

-Br, o -I.
La terminología "aril cicloalquilo" significa un anillo bicíclico que consta de 9 a 14 átomos de carbono en el que un anillo es el arilo y el otro anillo es el cicloalquilo fusionado al anillo de arilo, en el que cualquier anillo puede actuar como un punto de unión. El anillo de cicloalquilo puede estar total o parcialmente saturado en la parte del anillo no fusionado al anillo de arilo.
La terminología "aril cicloalquilo sustituido" significa un grupo aril cicloalquilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, -R5, -OR5l -S(0)mR5l -NR5R5, -C(0)R5, -CN, -C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5) -S(0)2NR5R5, -NR5S(0)2R5, y -N02.
La terminología "heteroaril cicloalquilo" significa un anillo bicíclico que consta de 9 14 átomos, en el que un anillo es el heteroarilo y el otro anillo es el cicloalquilo fusionado al anillo de arilo, y en el que cualquier anillo puede actuar como un punto de unión. El anillo de cicloalquilo puede estar total o parcialmente saturado en la parte del anillo no fusionado al anillo de arilo.
La terminología "heteroaril cicloalquilo sustituido" significa un heteroaril cicloalquilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, -R5, -OR5, -S(0)mR5, -NR5R5, -C(0)R5) -CN, -C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5, -S(0)2NR5R5, -NR5S(0)2R5, y -N02.
La terminología "aril heterocicloalquilo" significa un sistema anular bicíclico que contiene 9 a 14 átomos, en el que un anillo es arilo y el otro anillo es heterocicloalquilo, en el que cualquiera de los anillos puede actuar como punto de unión.
La terminología "aril heterocicloalquilo sustituido" significa un aril heterocicloalquilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, -R5, -OR5, ~S(0)mR5) -NR5R5, -C(0)R5, -CN, -C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5 -S(0)2NR5R5l -NR5S(0)2R5, y -N02;

El término "heteroaril heterocicloalquilo" significa un sistema anular bicíclico que contiene 9 a 14 átomos, en el que un anillo es heteroarilo y el otro anillo es heterocicloalquilo, en el que cualquier anillo puede actuar como punto de unión.
La terminología "heteroaril heterocicloalquilo sustituido" significa un heteroaril heterocicloalquilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, -R5, -OR5, -S(0)mR5, -NR5R5, -C(0)R5, -CN, -C(0)NR5R5l -NR5C(0)R5 -S(0)2NR5R5, -NR5S(0)2R5, y -N02.
El término "alquilo" significa restos de hidrocarburos tanto de cadena lineal como ramificada que tienen de 1-10 átomos de carbono.
La terminología "alquilo sustituido" significa un resto alquilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, -S(0)mR5, -NR5R5, -C(0)R5, -CN, C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5, -S(0)2NR5R5, -NR5S(0)2R5, -CN, -N02, y Ar a condición de que un halógeno o halógenos no pueden ser el(los) único(s) sustituyente(s) sobre el grupo alquilo.
El término "haloalquilo" significa un resto alquilo que tiene de 1 a (2v+1) sustituyente(s) halógeno seleccionados de manera independiente, en el que v es el número de átomos de carbono contenidos en el resto.
El término "cicloalquilo" significa un resto de hidrocarburo, monocíclico o bicíclico, no aromático que tiene de 3-10 átomos de carbono. Un cicloalquilo puede contener opcionalmente 1 a 2 enlaces dobles a condición de que los enlaces dobles no estén acumulados.

La terminología "cicloalquilo sustituido" significa un grupo cicloaiquilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, -R5, -OR5, -S(0)mR5, -NR5R5, -C(0)R5, -CN, -C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5, -S(0)2NR5R5, -NR5S(0)2R5, y -N02.
El término "arilo" significa fenilo o naftilo.
La terminología "fenilo sustituido" significa un grupo fenilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, -OR5, SR5, -NR5R5, -C(0)R5, -CN, -C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5, -S(0)2NR5R5, -NR5S(0)2R5l y -N02- La terminología "naftilo sustituido" significa un grupo naftilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, -OR5, SR5, -NR5R5, -C(0)R5, -CN, -C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5, -S(0)2NR5R5, -NR5S(0)2R5, y -N02.
El término "heteroarilo" significa un radical de un anillo aromático monocíclico que contiene cinco o seis átomos en el anillo consistentes en carbono y 1 a 4 heteroátomos, seleccionados cada uno del grupo consistente en O no-peróxido, S, y N, con enlazamiento adecuado para satisfacer los requisitos de valencia, en el que la unión puede efectuarse a través de un carbono del anillo o un átomo de nitrógeno. El término "heteroarilo" incluye también un radical de un anillo heteroaromático bicíclico fusionado que tiene de aproximadamente ocho a diez átomos en el anillo consistentes en carbono y 1 a 6 heteroátomos, seleccionados cada uno del grupo consistente en 0 no-peróxido, S, y N, con enlazamiento apropiado para satisfacer los requisitos de valencia, en el que la unión puede efectuarse a través de un carbono del anillo o un átomo de nitrógeno. Los ejemplos no limitantes de heteroarilo incluyen tienilo, benzotienilo, piridilo, tiazolilo, quinolilo, piraziniio, pirimidilo, imidazolilo, furanilo, benzofuranilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, benzoisotiazolilo, benzoisoxazolilo, benzoimidazolilo, indolilo, y benzoxazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, isoxazolilo, oxazolilo, pirrolilo, isoquinolinilo, cinolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, piridazinilo, triazinilo, isoindolilo, purinilo, oxadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo, y furopiridinilo.
La terminología "heteroarilo sustituido" significa un grupo hereroarilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, -R5, -OR5, -S(0)mR5, -NR5R5, -C(0)R5, -CN, -C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5, -S(0)2NR5R5, -NR5S(0)2R5, y -N02, fenilo, fenilo sustituido, naftilo, naftilo sustituido, heteroarilo, y derivados de heteroarilo.
La terminología "derivados de heteroarilo" significa un grupo heteroarilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, -R5) -OR5 -S(0)mR5, -NR5R5, -C(0)R5, -CN, -C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5, -S(0)2NR5R5, -NR5S(0)2R5, y -N02.
El término "heterocicloalquilo" significa un anillo no aromático monocíclico de 4 a 8 miembros o un anillo no aromático bicíclico de 6 a 12 miembros, en el que se sustituye de 1 a 4 átomo(s) de carbono cada uno con un heteromiembro seleccionado de oxígeno, nitrógeno, -NH-, o -S(0)m- en el que del es cero, 1 , o 2, en el que la unión del anillo puede tener lugar tanto en un átomo de carbono como en un átomo de nitrógeno. Un heterocicloalquilo puede contener opcionalmente de 1 a 3 enlaces dobles. Los ejemplos de heterocicloalquilo incluyen tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, anillos [2.2.1 ]-azabicíclicos, anillos [2.2.2]-azabicídicos, anillos [3.3.1]-azabicíclicos, quinuclidinilo, azetidinilo, azetidinonilo, oxindolilo, dihidroimidazolilo, y pirrolidinonilo.
La terminología "heterocicloalquilo sustituido" significa un grupo heterocicloalquilo que tiene 1-3 sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, -OR5, -S(0)ml¾, -NR5R5, -C(0)R5, -CN, -C(0)NR5R5, -NR5C(0)R5, -S(0)2NR5R5j -NR5S(0)2R5, y -N02.
La terminología "farmacéuticamente aceptable", a menos que se describa de otro modo, se refiere a los compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que, dentro del alcance del juicio médico razonable, son adecuados para ser usados en contacto con los tejidos de seres humanos y animales, sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otros problemas o complicaciones, en proporción a una relación beneficio/riesgo razonable.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal que mantiene la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos de esta invención y que no es indeseable biológicamente o de otro modo.

El término "estereoisómero" se refiere a compuestos formados por los mismos átomos unidos por los mismos enlaces, pero que tienen diferentes estructuras tridimensionales que no son intercambiables. Las estructuras tridimensionales se denominan configuraciones. Tal como se utiliza en la presente, el término "enantiómero" se refiere a dos estereoisómeros cuyas moléculas son imágenes especulares no superponibles del otro. La expresión "centro quiral" se refiere a un átomo de carbono al cual están unidos cuatro grupos diferentes. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "diastereómeros" se refiere a estereoisómeros que no son enantiómeros. Además, dos diastereómeros que tienen una configuración que sólo difiere en un centro quiral se denominan en la presente memoria "epímeros". El término "racemato" o la expresión "mezcla racémica" se refieren a una mezcla a partes iguales de enantiómeros.
El término "profármaco" significa compuestos que se transforman in vivo para proporcionar un compuesto de Fórmula I. La transformación puede tener lugar por diversos mecanismos, tales como por hidrólisis en la sangre.
Las expresiones "cantidad terapéuticamente eficaz", "cantidad eficaz", "cantidad terapéutica", o "dosis eficaz" significan la cantidad suficiente para producir los efectos farmacológicos o terapéuticos deseados, procurando así la prevención o tratamiento eficaz de la enfermedad.
Las expresiones "un compuesto de la invención", "un compuesto de la presente invención", "compuestos de la presente invención", o "un compuesto según la Fórmula 1", y similares, se refieren a compuestos de Fórmula I, o su estereoisómeros, sus sales farmacéuticamente aceptables, o sus profármacos, o sales farmacéuticamente aceptables de un profármaco de compuestos de Fórmula I.
Los términos "tratamiento", "tratar", y similares pretenden incluir tanto la ralentización como la reversión de la progresión de un trastorno, así como la curación del trastorno. Estos términos también incluyen aliviar, mejorar, atenuar, eliminar o reducir uno o más síntomas de un trastorno o afección, incluso si el trastorno o afección no se elimina realmente, e incluso si la progresión del trastorno o afección no se ralentiza o revierte en sí misma. El término "tratamiento" y términos similares también incluyen el tratamiento preventivo (por ejemplo, profiláctico) y paliativo. La prevención de la enfermedad se manifiesta mediante una prolongación o retraso de la aparición de los síntomas de la enfermedad.

EJEMPLOS

Sin elaboración adicional, se cree que un experto en la técnica puede, usando la descripción precedente, poner en práctica la presente invención en su mayor extensión. Los ejemplos A-D se proporcionan para ilustrar los ensayos biológicos que se pueden utilizar para determinar las propiedades biológicas de los compuestos de las invenciones. Estos ejemplos no se deben interpretar como limitantes de la invención en alcance o espíritu a los procedimientos específicos descritos en ellos. Los expertos en la técnica reconocerán en seguida variaciones apropiadas de los procedimientos descritos en los ejemplos.

EJEMPLO A
Ensayo de unión al Receptor CRFi in vitro para la Evaluación de la
Actividad Biológica

A continuación se ofrece una descripción de un ensayo de unión in vitro estándar para la evaluación de la actividad biológica de un compuesto de prueba sobre los receptores CRFi. Se basa en un protocolo modificado descrito por De Souza (De Souza, 1987).
El ensayo de unión utiliza membranas cerebrales, normalmente de ratas. Para preparar las membranas cerebrales para los ensayos de unión, se homogeneiza la corteza frontal de ratas en 10 mL de tampón de tejidos enfriado en hielo (tampón HEPES 50 mM, pH 7.0, que contiene MgCfe 10 mM, EGTA 2 mM, aprotinina 1 pg/mL, leupeptina 1 pg/mL y pepstatina 1 pg/mL). El homogeneizado se centrifuga a 48,000 x g durante 10 min., y el sedimento resultante se rehomogeneiza en 10 mL de tampón de tejido. Después de otra centrifugación a 48,000 x g durante 10 min., el sedimento se resuspende hasta una concentración de proteínas de 300 pg/mL.
Los ensayos de unión se llevan a cabo en placas de 96 pocilios a un volumen final de 300 pL. Se inician los ensayos añadiendo 150 pL de suspensión de membranas a 150 pL de tampón de ensayo que contiene 25l-CRF ovino (concentración final 150 pM) y diversas concentraciones de inhibidores. El tampón de ensayo es el mismo que se describió anteriormente para la preparación de membranas, con la adición de ovoaibúmina al 0.1 % y bacitracina 0.15 m . La unión del radioligando se termina después de 2 horas a temperatura ambiente mediante filtración a través de placas de un filtro único Packard GF/C (preempapadas con polietilenimina al 0.3%) utilizando un recolector de células Packard. Los filtros se lavaron tres veces con disolución salina tamponada con fosfato enfriada en hielo, pH 7.0, que contiene Tritón X-100 al 0.01%. Los filtros se evaluaron para determinar la radiactividad en un Packard TopCount.
Como alternativa, se pueden emplear tejidos y células que expresan, de modo natural, los receptores CRF, tales como células de neuroblastoma humano IMR-32 (ATCC; Hogg et al., 1996), en ensayos de unión análogos a los descritos más arriba.
Se considera que un compuesto es activo si tiene un valor de Ki menor de aproximadamente 10 μΜ para la inhibición de CRF. La unión no específica se determina en presencia de CRF de hélice a, en exceso ( 0 μΜ).

EJEMPLO B
Ensayo de Unión al Receptor CRIF, ex vivo para la Evaluación de la
Actividad Biológica

A continuación se ofrece una descripción de un ensayo de unión al receptor CRFi ex vivo típico para evaluar la actividad biológica de un compuesto de prueba sobre los receptores CRF-t.
Se administró dosificadamente por vía oral a ratas Sprague-Dawley, de raza Harlen, macho y en ayunas (170-210 g), o bien compuesto de prueba o bien vehículo, a través de una sonda gástrica entre las 12:30 y 2:00 de la tarde. Los compuestos se prepararon en vehículo (normalmente aceite de soja al 10%, polisorbato 80 al 5%, en H20 destilada). Dos horas después de la administración del fármaco, las ratas se sacrificaron mediante decapitación, se diseccionaron rápidamente las cortezas frontales y se colocaron sobre hielo seco, después se congelaron a -80°C hasta que se analizaron; se recogió sangre del tronco en tubos heparinizados, se separó el plasma mediante centrifugación (2500 rpm durante 20 minutos), y se congeló a -20°C.
En el día del ensayo de unión, se pesaron las muestras de tejidos y se dejaron descongelar en tampón Hepes 50 mM enfriado en hielo (que contiene MgCI2 10 mM, EGTA 2 mM, aprotinina 1 pg/mL, hemisulfato de leupeptina 1 pg/mL, y pepstatina A 1 pg/mL, bacitracina 0.15 mM, y ovoalbúmina al 0.1%, pH = 7.0 a 23°C), y después se homogeneizaron durante 30 segundos, con el ajuste a 5 (Polytron de Kinematica). Los homogenelzados se incubaron (dos horas, 23°C, en la oscuridad) con [125l]-CRF (0.15 nM, NEN) en presencia de tampón de ensayo (como se describió anteriormente) o DMP-904 (10 uM). El ensayo se terminó mediante filtración (Packard FilterMate, placas de filtro GF/C); las placas se contaron en un Packard TopCount LSC; se calcularon los fmoles totales y no específicos a partir de DPM. Los datos se expresan como porcentaje respecto a los testigos con vehículo (fmoles específicos fijados). Se determinó la significación estadística utilizando el ensayo de la t de Student.

EJEMPLO C
Inhibición de la Actividad de Adenilato-ciclasa Estimulada por CRF

La inhibición de la actividad de adenilato-ciclasa estimulada por CRF puede realizarse tal como se ha descrito con anterioridad [G. Battaglia et al., Synapse, 1:572 (11987)]. En pocas palabras, los ensayos se realizan a 37°C durante 10 minutos en 200 mL de tampón que contiene Tris-HCl 100 mM (pH 7.4 a 37°C), MgCI2 10 mM, EGTA 0.4 mM, BSA al 0.1%, isobutilmetilxantina (IBMX) 1 mM, fosfocreatina-cinasa 250 unidades/mL, fosfato de creatina 5 mM, guanosina 5'-trifosfato 100 mM, o-CRF 100 nM, péptidos antagonistas (diversas concentraciones) y 0.8 mg del tejido en peso húmedo original (aproximadamente 40-60 mg de proteína). Las reacciones se inician mediante la adición de ATP/[32P]ATP 1 mM (aproximadamente 2-4 mCi por tubo) y se finalizan mediante la adición de 100 ml_ de Tris-HCI 50 mM, ATP 45 mM, y dodeciisulfato de sodio al 2%. Para controlar la recuperación de cAMP, se añaden 1 ml_ de [3H]cAMP (aproximadamente 40,000 dpm) a cada tubo antes de la separación. La separación de [32P]cAMP a partir de [32P]ATP se realiza mediante elución secuencial en columnas Dowex y de alúmina.
Como alternativa, la actividad adenilato-ciclasa puede evaluarse en un formato de 96 pocilios utilizando el ensayo FlashPlate de activación de adenilil-ciclasa de NEN Life Sciences, según los protocolos proporcionados. En resumen, una cantidad fija de cAMP marcado radiactivamente se añade a placas de 96 pocilios que están prerrevestidas con anticuerpo anti-AMP cíclico. Se añaden las células o tejidos, y se estimulan en presencia o ausencia de inhibidores. El cAMP sin marcar -producido por las células desplazará al cAMP marcado radiactivamente del anticuerpo. El cAMP marcado radiactivamente unido produce una señal de luz que puede detectarse utilizando un contador de centelleo de microplacas, como Packard TopCount. Unas cantidades mayores de cAMP sin marcar producen una disminución de la señal detectable a lo largo de un tiempo de incubación fijado (2-24 horas).

EJEMPLO P
Ensayo Biológico in vivo

La actividad in vivo de un compuesto de la presente invención puede evaluarse utilizando uno cualquiera de los ensayos biológicos disponibles y aceptados dentro de la técnica. Los ejemplos de estos ensayos incluyen el ensayo de sorpresa acústica, el ensayo de subir escaleras, y el ensayo de administración crónica. Estos y otros modelos útiles para probar los compuestos de la presente invención se han descrito en C.W. Berridge y A.J. Dunn, Brain Research Reviews, 15:71 (1990). Un compuesto puede ensayarse en cualquier especie de roedor o pequeño mamífero.