(EN) Processes are described for making a cryopreserved Composite Living Construct (CCLC) as well as a corresponding thawed and rinsed CCLC comprised of separated layers of cultured fibroblasts (18) and keratinocytes (12), wherein the percent of viable cells of the CCLC is at least 70 %. The viable cell density in the CCLC is at least about 50 % of that before cryopreservation. The storage stability of the CCLC is at least about 12 months. The metabolic activity of thawed and rinsed CCLC is at least about 50 % of the Composite Living Construct (CLC) before cryopreservation. The process for making the CCLC uses a cryoprotectant solution of at least chondroitin sulfate and dimethylsulfoxide and temperature lowering at a programmed rate.
(FR) L'invention concerne des méthodes de préparation d'une construction vivante composite cryopréservée (CCLC) ainsi qu'une CCLC correspondante décongelée et rincée. Ladite construction comprend des couches séparées de fibroblastes et de kératinocytes cultivés, le pourcentage de cellules viables, c'est-à-dire la viabilité cellulaire de la CCLC étant d'environ 70 %. La densité de cellules viables dans la CCLC est d'au moins environ 50 % de celle avant la cryopréservation. La stabilité de stockage de la CCLC est d'au moins environ 12 mois. En outre, l'activité métabolique d'une CCLC décongelée et rincée est d'au moins environ 50 % de celle de la construction vivante composite (CLC) avant la cryopréservation. L'intégrité structurelle de la CCLC est sensiblement identique à celle de la CLC avant la cryopréservation. Le procédé de préparation de CCLC consiste à fournir un substrat collagénique constitué d'une couche d'éponge collagénique et d'une couche collagénique semi-perméable non poreuse aux cellules; à ensemencer et à cultiver, en présence d'un milieu de croissance cellulaire, des fibroblastes sur la couche d'éponge collagénique et des kératinocytes sur la couche collagénique semi-perméable non poreuse aux cellules, ce qui produit une CLC; à équilibrer ladite CLC, en fonction d'un programme d'équilibration défini à l'aide d'une solution cryoprotectrice contenant au moins un sulfate chondroïtinique et un diméthylsulfoxyde; à abaisser la température jusqu'à un seuil programmé à environ 90 °C; et à stocker ladite CCLC à environ -150 °C ou moins. Le procédé de préparation de la CCLC, qui permet de traiter des blessures chez les humains et chez les animaux, comprend en outre une décongélation programmée ainsi qu'une séquence de rinçage destinée à éliminer sensiblement les cryoprotecteurs.
