(EN) Method for producing adenovirus vectors for gene therapy and auxiliary vectors used therefor. The method is based on the multiplication of gutless adenoviruses that lack adenovirus-coding sequences by cotransfecting them with an auxiliary or helper adenovirus that has an attB sequence of the &phis;C31 bacteriophage inserted between the adenovirus packaging signal and the ITR closest to it and/or utilizing the delay arising at the time of packaging the helper adenovirus with respect to that of the gutless adenovirus owing to the presence of the atttB sequence in order to recover the gutless adenovirus from the culture before the helper adenovirus completes its viral cycle. This gives rise to high gutless adenovirus titres that are essentially free from helper adenovirus, thereby allowing them to be used in gene therapy, minimizing the likelihood of the appearance of a cellular immune response on the part of the treated individual against cells transduced by the adenovirus vector produced.
(ES) Método de producción de vectores adenovirus para terapia génica y vectores auxiliares útiles para ello. El método se basa en la multiplicación de adenovirus gutless, que carecen de secuencias codificantes de adenovirus, cotransfectándolos con un adenovirus auxiliar o helper que posee una secuencia attB del bacteriófago &phis;C31 insertada entre la señal de empaquetamiento del adenovirus y la ITR más próxima a ella y en aprovechar el retraso que se produce en el momento del empaquetamiento del adenovirus helper respecto al del adenovirus gutless debido a la presencia de la secuencia attB para recuperar el adenovirus gutless del cultivo antes de que el adenovirus helper finalice su ciclo viral. Así se obtienen títulos altos de adenovirus gutless esencialmente libres de adenovirus helper, lo que posibilita su utilización en terapia génica minimizando el riesgo de aparición de una respuesta inmune celular del individuo tratado contra células transducidas por el vector adenovirus producido.
(FR) L'invention décrit un procédé de production de vecteurs adénovirus destinés à la thérapie génique et des vecteurs auxiliaires utilisés à ces fins. Le procédé consiste à multiplier des adénovirus n'exprimant plus de gènes viraux privés de séquences codantes d'adénovirus et à les co-transférer avec un adénovirus auxilaire ou assistant qui possède une séquence attB du bactériophage &phis;C31, introduite entre le signal d'encapsidation de l'adénovirus et l'ITR la plus proche du signal, et à utiliser le retard qui se produit au moment de l'encapsidation de l'adénovirus assistant par rapport à l'adénovirus n'exprimant plus de gènes viraux en raison de la présence de la séquence attB, pour récupérer l'adénovirus n'exprimant plus de gènes viraux de la culture avant que l'adénovirus assistant ne réalise son cycle viral. De cette manière, on peut obtenir des titres élevés d'adénovirus n'exprimant plus de gènes viraux qui sont essentiellement exempts d'adénovirus assistant, ce qui rend possible sont utlisation en thérapie génique en minimisant le risque d'apparition d'une réponse immune cellulaire de l'individu traité contre des cellules transduites par le vecteur adénovirus produit.
