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1. WO1910000591 - FLUORESCENT CYCLIC PEPTIDES, METHODS FOR THE PREPARATION THEREOF, AND USE OF SAID PEPTIDES FOR MEASURING THE ENZYMATIC ACTIVITY OF A PROTEASE ENZYME

注:相关文本通过自动光符识别流程生成。凡涉及法律问题,请以 PDF 版本为准

REVENDICATIONS

1. Peptide cyclique comprenant la séquence suivante :

-Si-Xi-S2-X2- dans laquelle Si est une première séquence peptidique cible d'une enzyme protéase Ei, S2 est une seconde séquence peptidique cible d'une enzyme protéase E2, Si et S2 pouvant être identiques ou différents, ladite première séquence peptidique Si et ladite seconde séquence peptidique S2 comprenant de 4 à 14 acides aminés, Ei et E2 pouvant correspondre à la même enzyme protéase ou à deux enzymes protéases distinctes, Xi est une sonde porteuse d'un groupe donneur fluorescent et X2 est une sonde porteuse d'un groupe accepteur fluorescent ou non fluorescent.

2. Peptide cyclique selon la revendication 1, répondant à la formule suivante :


dans laquelle : - Si, Xi, S2 et X2 répondent à la même définition que celle donnée à la revendication 1 ;

- Ri et R2 correspondent indépendamment à une liaison simple, un reste d'acide aminé ou une séquence peptidique ;

- Y correspond à un groupe -CONH- ou -NHCO-.

3. Peptide cyclique selon la revendication 1 ou 2, dans lequel l'enzyme protéase Ei et l'enzyme protéase E2 sont des enzymes du type MMP, auquel cas la première séquence peptidique Si est cible d'une enzyme MMP et la seconde séquence peptidique S2 est cible d'une enzyme MMP.

4. Peptide cyclique selon la revendication

3, dans lequel l'enzyme protéase MMP est choisie parmi la MMP-I, MMP-2, MMP-3, MMP-5, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-IO, MMP-Il, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-I 6, MMP-17, MMP-I 9, MMP-23, MMP-25 et MMP-26 et les mélanges de celles-ci.

5. Peptide cyclique selon la revendication

4, dans lequel :

- lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-1, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Gly-Pro-Gln-Gly-Leu-Leu-Gly-Ala- SEQ. 1 -Ala-Pro-Gln-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln- SEQ. 2 -Gly-Pro-Gln-Gly-Leu-Ala-Gly-Gln- SEQ.3

-Gly-Pro-Leu-Gly-Ile-AIa-Gly-IIe- SEQ.4

-Gly-Pro-Glu-Gly-Leu-Arg-Val-Gly- SEQ.5

-Tyr-Glu-Ala-Gly-Leu-Gly-Val-Val- SEQ.6 5 -Ala-Gly-Leu-Gly-Val-Val-Glu-Arg- SEQ.7 -Ala-Gly-Leu-Gly-Ile-Ser-Ser-Thr- SEQ.8

-Gly-Ala-Met-Phe-Leu-Glu-Ala-Ile-10 SEQ.9

-Ile-Pro-Glu-Asn-Phe-Phe-Gly-Val- SEQ.10 -Thr-Glu-Gly-Glu-AIa-Arg-Gly-Ser- SEQ.11 15 -Arg-Ala-IIe-His-Ile-Gln-Ala-Glu- SEQ.12 -Leu-Arg-Ala-Tyr-Leu-Leu-Pro-Ala- SEQ.13

-GIy-Pro-Leu-Gly-Met-Arg-Gly-Leu-20 SEQ.14

-Pro-Gln-Gly-Leu-Glu-Ala-Lys- SEQ.15

25

-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg- SEQ. 16

30 -Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg- SEQ. 17

-Pro-Cha-Abu-Cys (Me) -His-Ala-35

SEQ.18

-Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala- SEQ. 19

-Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala-

SEQ. 20

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ.21

-Pro-Leu-Gly- [2-mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gl SEQ. 22

-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg- SEQ. 17

-Pro-Leu-Gly-Cys (Me) -His-Ala-D-Arg- SEQ. 23 -Arg-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Arg- SEQ. 24

-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala- SEQ. 25

-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met- SEQ. 26 ou

-lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP- 2, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Ile-Pro-Glu-Asn-Phe-Phe-Gly-Val- SEQ.10 -Pro-Pro-Gly-Ala-Tyr-His-Gly-Ala- SEQ.27

-Arg-Ala-I Ie-Hi s-I le-Gln-Ala-Glu- SEQ.12 -Gly-Pro-His-Leu-Leu-Val-Glu-Ala- SEQ.28

-Leu-Arg-Ala-Tyr-Leu-Leu-Pro-Ala- SEQ .13

-Pr o -GIn-Gl y-Leu-Glu- Al a-Lys - SEQ.29

-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg- SEQ . 16

-Pro-Leu-Ala-Nva-Dpa-Ala-Arg-

SEQ.30

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-

SEQ.21

-Pro-Leu-Gly-Met-Trp-Ser-Arg-

SEQ. 31

-Pro-Leu-Gly-SCH [CH2CH (CH3) 2] -CO-Leu-Gly- SEQ . 32

-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Ala-Phe- SEQ. 33

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ.21

-Pro-Leu-Gly- [2~mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gly- SEQ.22

-Pro-Leu-Gly-Cys (Me) -His-Ala-D-Arg- SEQ.23

-Arg-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Arg- SEQ.24

-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala- SEQ. 25

-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met- SEQ. 26 ou

-lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-3, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-GIy-Pro-Glu-Gly-Leu-Arg-Val-Gly- SEQ.5

-Arg-Val-GIy-Phe-Tyr-Glu-Ser-Asp- SEQ.34

-Leu-Leu-Ser-Ala-Leu-Val-Glu-Thr- SEQ.35 -Glu-Ala-Ile-Pro-Met-Ser-Ile-Pro- SEQ.36

-Ile-Ala-Gly-Arg-Ser-Leu-Asn-Pro- SEQ.37 -Ile-Pro-Glu-Asn-Phe-Phe-Gly-Val- SEQ.10

-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu- 5

SEQ.38

-Asp-Val-Ala-Gln-Phe-Val-Leu-Thr-10 SEQ.39

-Asp-Thr-Leu-Glu-Val-Met-Arg-Lys- SEQ.40 15

-Asp-Val-GIy-His-Phe-Arg-Thr-Phe- SEQ.41 20 -Asp-Ser-Gly-Gly-Phe-Met-Leu-Thr- SEQ.42 -Arg-Val-Ala-Glu-Met-Arg-Gly-Glu- 25 SEQ.43

-Asp-Leu-Gly-Arg-Phe-Gln-Thr-Phe- SEQ.44 30

-Pro-Phe-Ser-Pro-Leu-Val-Ala-Thr- SEQ.45

35 -Leu-Arg-Ala-Tyr-Leu-Leu-Pro-Ala- SEQ.13

-Ala-Pro-Gly-Asn-Ala-Ser-Glu-Ser-40

SEQ.46

-Phe-Ser-Ser-Glu-Ser-Lys-Arg-Glu-45 SEQ.47

-Arg-Ala-Ile-His-Ile-Gln-Ala-Glu- SEQ.12

-Gly-Pro-His-Leu-Leu-Val-Glu-Ala- SEQ.28

-Pro-Pro-Glu-Glu-Leu-Lys-Phe-Gln- SEQ.48

-Gly-Pro-Leu-Gly-Met-Arg-Gly-Leu- SEQ. 49

-Pro-Gln-Gly-Leu-Glu-Ala-Lys- SEQ. 15 -Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg-Glu-Ala-Lys- SEQ. 50

-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-AIa-D-Arg- SEQ. 16

-Pro-Tyr-Ala-Tyr-Trp-Met-Arg- SEQ. 51

-Arg-Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Nva-Trp- SEQ. 52

-Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala- SEQ. 20 -Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21

-Pro-Leu-Gly- [2~mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gly- SEQ. 22

-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met- SEQ . 26

-Arg-Pro-Lys -Pro-Val -Gl u -Nva - Trp-Arg-

SEQ . 50

ou

-lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-5, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Arg-Pro-Lys-Pro-Va1-Glu-Nva-Trp-Arg-Glu-Ala-Lys- SEQ. 50 ou

-lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-7, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-AIa-D-Arg- SEQ. 16 -Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21

-Arg-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Arg-Ser- SEQ. 24

-Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala- SEQ. 20

-Pro-Leu-Gly- [2~mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gly- SEQ. 22

-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg- SEQ. 17 -Pro-Tyr-Ala-Tyr-Trp-Met-Arg- SEQ . 51

-Arg-Pro -Lys -Pro-Leu -Al a -Nva - Trp -

SEQ . 52 ou

-lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-8, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Ala-Tyr-Trp-Ala-Arg- SEQ. 53

-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg- SEQ. 16 -Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala- SEQ. 20

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21

-Pro-Leu-Gly- [2-mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gly- SEQ. 22

-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg- SEQ. 17

-Pro-Leu-Gly-Cys (Me) -His-Ala-D-Arg- SEQ. 23 -Arg-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Arg- SEQ. 24

-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala- SEQ. 25 ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme

MMP-9, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-GIy-Pro-Pro-Gly-Val-Val-GIy-Pro- SEQ.54

-Gly-Pro-Pro-Gly-Leu-Arg-Gly-Glu- SEQ.55

-GIy-Pro-Gly-Gly-Val-Val-GIy-Pro- SEQ.56 -Ile-Pro-Gln-Asn-Phe-Phe-Gly-Val- SEQ.57

-Pro-Pro-Gly-AIa-Tyr-His-Gly-AIa- SEQ.58

-Arg-Ala-IIe-His-Ile-Gln-Ala-Glu- SEQ.12

-GIy-Pro-Leu-Gly-Met-Arg-Gly-Leu- SEQ. 14 -Pro-Gln-Gly-Leu-Glu-Ala-Lys- SEQ. 15

-Arg-Pro-Lys-Pro-Va1-Glu-Nva-Trp-Arg-Glu-Ala-Lys- SEQ.50

-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-AIa-D-Arg- SEQ . 16

-Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala- SEQ . 19

-Pro-Leu-Gly-SCH [CH2CH (CH3) 2] -CO-Leu-Gly- SEQ . 32

-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Ala-Phe-

SEQ. 33 -Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala- SEQ. 20

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21

-Pro-Leu-Gly- [2-mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gly- SEQ . 22

-Pro-Leu-Gly-Cys (Me) -His-Ala-D-Arg- SEQ. 23

ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme

MMP-IO, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Arg-Ala-Ile-His-Ile-Gln-Ala-Glu- SEQ.12 -GIy-Pro-Hls-Leu-Leu-Val-Glu-Ala- SEQ.28

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21 ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-Il, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala- SEQ. 20

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21 ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-12, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala- SEQ. 20

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21

-Pro-Leu-Gly- [2-mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gly- SEQ . 22

-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg- SEQ . 17 -Pro-Leu-Gly-Cys (Me) -His-Ala-D-Arg- SEQ. 23 -Pr o - Tyr-Al a - Tyr-Trp-Me t -Ar g- SEQ. 51

-Arg-Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Nva-Trp- SEQ. 52

-Arg-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Arg- SEQ. 24

-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala- SEQ. 25

-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met- SEQ. 26 -Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg- SEQ. 50

-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln Phe-Trp- SEQ. 59 ou - lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme

MMP-13, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-GIy-Pro-Leu-Gly-Met-Arg-Gly-Leu- SEQ. 49

-Arg-Pro -Lys -Pro-Va 1 -Gl u -Nva - Trp-Arg-Gl u -Al a -Ly s- SEQ . 50

-Pro-Cha -Gly-Nva -Hi s -Al a -Dpa - SEQ . 25

-Pro-Cha -Gly-Cys (Me) -Hi s -Al a - SEQ . 20

-Pro-Leu -Gly-Leu -Dpa -Al a -Arg- SEQ . 21

-Pro-Leu-Gly- [2~mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gly- SEQ.22

-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg- SEQ. 16

-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Ala-Arg- SEQ. 17 -Pro-Leu-Gly-Cys (Me) -His-Ala-D-Arg- SEQ. 23

-Pro-Leu-Gly-Met-Trp-Ser-Arg- SEQ. 31

-Pro-Tyr-Ala-Tyr-Trp-Met-Arg- SEQ. 51

-Arg-Pro-Lys-Pro-Leu-Ala-Nva-Trp- SEQ. 52

-Arg-Pro-Leu-Ala-Leu-Trp-Arg- SEQ. 24 -Pro-Leu-Ala-Tyr-Trp-Ala-Arg- SEQ. 53

-Pro-Cha-Gly-Nva-His-Ala- SEQ. 25

-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met- SEQ . 26

-Arg-Pro-Lys -Pro-Gln -Gln Phe - Trp- SEQ . 59

ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-14, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Ala-Cys (p-OMeBz) -Trp-Ala-Arg- SEQ. 60

-Pro-Cha-Gly-Cys (Me) -His-Ala- SEQ. 20

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21

-Pro-Leu-Gly- [2~mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gly- SEQ. 22

ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme

MMP-15, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21 ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme

MMP-I 6, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21 ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme

MMP-17, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21

-Pro-Leu-Gly- [2-mercapto-4-methyl-pentanoyl] -Leu-Gly- SEQ. 22 ou

- lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-19, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21

ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-23, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21 ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme MMP-25, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg- SEQ. 21

ou lorsqu'elles sont cibles de l'enzyme

MMP-26, la première séquence Si et/ou la seconde séquence S2, répondent à l'une au moins des séquences suivantes :

-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg- SEQ. 16

6. Peptide cyclique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le groupe donneur porté par la sonde Xi et le groupe accepteur porté par la sonde X2 comprennent un noyau aromatique.

7. Peptide cyclique selon la revendication 6, dans lequel le noyau aromatique est un noyau benzénique, anthracénique ou coumarine.

8. Peptide cyclique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le groupe donneur porté par la sonde Xi et le groupe accepteur porté par la sonde X2 sont choisis parmi les couples suivants :

*Tryptophane/2 , 4-dinitrophényle ;

*Acide o-aminobenzoïque/2, 4-dinitrophényle ;

* (7-méthoxycoumarin-4-yl) -acétyle/2, 4-dinitrophényle ;

* (7-méthoxycoumarin-4-yl) -acétyle/N-3- (2, 4-dinitrophényl) -L-2 , 3-diaminopropyle ;

*Tryptophane/Dansyle ;

*N-méthylanthranoyle/2, 4-dinitrophényle ;

*6, 7-diméthoxycoumarin-4-yl-acétyle/acide 6-N- (7-nitrobenz-2-oxa-l, 3-diazol-4-yl) aminohexanoïque ; *Acide 5- (2' -aminométhyl) naphtalène suifonique/acide 4- (4' -diméthylaminophénylaza) benzoïque

* acide 7-méthoxycoumarin-3-carboxylique/acide 7-diéthylaminocoumarin-3-carboxylique .

9. Peptide cyclique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le groupe donneur porté par la sonde Xi et le groupe accepteur porté par la sonde X2 comprennent un noyau coumarine.

10. Peptide cyclique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le groupe donneur porté par la sonde Xi et le groupe accepteur porté par la sonde X2 répondent respectivement aux formules suivantes :

MC


11. Peptide cyclique selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel les sondes Xi et X2 sont des restes d'acide aminé.

12. Peptide cyclique selon la revendication 11, dans lequel les sondes Xi et X2 répondent respectivement aux formules suivantes :



13. Peptide cyclique selon la revendication 1 ou 2, dans lequel les séquences peptidiques Si et S2 répondent à la formule suivante :

-Gly-Pro-Gln-Gly-Leu-Leu-Gly-Ala-

14. Peptide cyclique selon la revendication 13, répondant à la formule suivante :

Ri, Y et R2 répondant à la même définition que celle donnée à la revendication 2.

15. Peptide cyclique selon la revendication 13 ou 14, répondant à la formule suivante :


16. Procédé de préparation d'un peptide cyclique tel que défini selon la revendication 1 ou 2, comprenant les étapes suivantes : a) une étape de préparation d'un peptide linéaire par synthèse chimique sur une phase solide ; b) une étape de libération du peptide linéaire de la phase solide ; et c) une étape de couplage des extrémités du peptide linéaire pour former le peptide cyclique.

17. Procédé de préparation d'un peptide cyclique tel que défini selon la revendication 1 ou 2, comprenant les étapes suivantes : a) une étape de préparation du peptide linéaire par synthèse chimique sur une phase solide ;

b) une étape de couplage de l'extrémité libre du peptide linéaire avec une fonction terminale d'un résidu linéaire du peptide linéaire ; et c) une étape de libération du peptide cyclique de la phase solide, les étapes b) et c) pouvant être réalisées de façon concomitante.

18. Réactif prêt à l'emploi comprenant au moins un peptide cyclique tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 15.

19. Kit comprenant au moins : un premier compartiment comprenant au moins un peptide cyclique tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 15 ; et un second compartiment comprenant une solution tampon.

20. Utilisation d'au moins un peptide cyclique tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 15 pour déterminer in vitro l'activité d'au moins une enzyme protéase.