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1. (WO2019046540) METHODS AND COMPOSITIONS COMPRISING CRISPR-CPF1 AND PAIRED GUIDE CRISPR RNAS FOR PROGRAMMABLE GENOMIC DELETIONS
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№ de pub.: WO/2019/046540 № do pedido internacional: PCT/US2018/048767
Data de publicação: 07.03.2019 Data de depósito internacional: 30.08.2018
CIP:
C12N 15/11 (2006.01) ,C12N 15/82 (2006.01) ,C12N 15/85 (2006.01)
C QUÍMICA; METALURGIA
12
BIOQUÍMICA; CERVEJA; ÁLCOOL; VINHO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; ENGENHARIA GENÉTICA OU DE MUTAÇÃO
N
MICRO-ORGANISMOS OU ENZIMAS; SUAS COMPOSIÇÔES; PROPAGAÇÃO, CONSERVAÇÃO, OU MANUTENÇÃO DE MICRO-ORGANISMOS; ENGENHARIA GENÉTICA OU DE MUTAÇÕES; MEIOS DE CULTURA
15
Mutação ou engenharia genética; DNA ou RNA concernentes à engenharia genética, vetores, p. ex., plasmídeos ou seu isolamento, preparação ou purificação; Uso de seus hospedeiros
09
Tecnologia do DNA recombinante
11
Fragmentos de DNA ou RNA; Suas formas modificadas
C QUÍMICA; METALURGIA
12
BIOQUÍMICA; CERVEJA; ÁLCOOL; VINHO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; ENGENHARIA GENÉTICA OU DE MUTAÇÃO
N
MICRO-ORGANISMOS OU ENZIMAS; SUAS COMPOSIÇÔES; PROPAGAÇÃO, CONSERVAÇÃO, OU MANUTENÇÃO DE MICRO-ORGANISMOS; ENGENHARIA GENÉTICA OU DE MUTAÇÕES; MEIOS DE CULTURA
15
Mutação ou engenharia genética; DNA ou RNA concernentes à engenharia genética, vetores, p. ex., plasmídeos ou seu isolamento, preparação ou purificação; Uso de seus hospedeiros
09
Tecnologia do DNA recombinante
63
Introdução de material genético exógeno usando vetores; Vetores; Utilização de hospedeiros para os mesmos; Regulação da expressão
79
Vetores ou sistemas de expressão especialmente adaptados a hospedeiros eucariotos
82
para células vegetais
C QUÍMICA; METALURGIA
12
BIOQUÍMICA; CERVEJA; ÁLCOOL; VINHO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; ENGENHARIA GENÉTICA OU DE MUTAÇÃO
N
MICRO-ORGANISMOS OU ENZIMAS; SUAS COMPOSIÇÔES; PROPAGAÇÃO, CONSERVAÇÃO, OU MANUTENÇÃO DE MICRO-ORGANISMOS; ENGENHARIA GENÉTICA OU DE MUTAÇÕES; MEIOS DE CULTURA
15
Mutação ou engenharia genética; DNA ou RNA concernentes à engenharia genética, vetores, p. ex., plasmídeos ou seu isolamento, preparação ou purificação; Uso de seus hospedeiros
09
Tecnologia do DNA recombinante
63
Introdução de material genético exógeno usando vetores; Vetores; Utilização de hospedeiros para os mesmos; Regulação da expressão
79
Vetores ou sistemas de expressão especialmente adaptados a hospedeiros eucariotos
85
para células animais
Requerentes:
NEW YORK GENOME CENTER, INC. [US/US]; 101 Avenue Of The Americas New York, NY 10013, US
NEW YORK UNIVERSITY [US/US]; 70 Washington Square South New York, NY 10012, US
Inventores:
SANJANA, Neville, Espi; US
Mandatário:
BAK, Mary E.; US
KODROFF, Cathy, A.; US
DUMINIAK, Robert, J.; US
BAK, Mary, E.; US
Dados da prioridade:
62/552,81631.08.2017US
Título (EN) METHODS AND COMPOSITIONS COMPRISING CRISPR-CPF1 AND PAIRED GUIDE CRISPR RNAS FOR PROGRAMMABLE GENOMIC DELETIONS
(FR) PROCÉDÉS ET COMPOSITIONS COMPRENANT CRISPR-CPF1 ET DES ARN CRISPR DE GUIDAGE APPARIÉS DESTINÉS À DES DÉLÉTIONS GÉNOMIQUES PROGRAMMABLES
Resumo:
(EN) Described are methods comprises transducing a mammalian cell with one or more virus vectors. Each vector comprises a nucleic acid sequence encoding a Cpfl (also known as Casl2a) protein and an optional selectable marker in operative association with an RNA pol II promoter which controls expression thereof; and a CRISPR RNA (crRNA) array comprising at least two spacers in operative association with an RNA pol III promoter. Each spacer encodes an RNA guide which hybridizes to a unique sequence located 3' from a T-rich protospacer-adjacent motif (PAM) in a genomic region of interest. The method further comprises culturing the transduced cells, thereby providing a plurality of cultured cell cultures, each cell culture comprising said deletion. Additionally, described are compositions used in methods as well as libraries generated by the methods. Such compositions comprise libraries of transduced cell cultures, viral vectors, nucleic acid sequences, CRISPR RNA spacers, and RNA guides, as described herein.
(FR) L'invention concerne des procédés comprenant la transduction d'une cellule de mammifère avec un ou plusieurs vecteurs de virus. Chaque vecteur comprend une séquence d'acide nucléique codant pour une protéine Cpfl (également connue sous le nom de Casl2a) et un marqueur sélectionnable éventuel en association fonctionnelle avec un promoteur pol II d'ARN, qui commande l'expression de cette dernière ; et un réseau d'ARN CRISPR (ARNcr) comprenant au moins deux espaceurs en association fonctionnelle avec un promoteur pol III d'ARN. Chaque espaceur code pour un guide d'ARN qui s'hybride à une séquence unique située à 3' à partir d'un motif adjacent au proto-espaceur (PAM) riche en T dans une région génomique d'intérêt. Le procédé comprend en outre la culture des cellules transduites, ce qui permet d'obtenir une pluralité de cultures de cellules cultivées, chaque culture de cellules comprenant ladite délétion. De plus, l'invention concerne des compositions utilisées dans des procédés ainsi que des bibliothèques générées par les procédés. De telles compositions comprennent des bibliothèques de cultures de cellules transduites, des vecteurs viraux, des séquences d'acides nucléiques, des espaceurs d'ARN CRISPR et des guides d'ARN, tels que décrits ici.
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Organização Africana da Propriedade Intelectual (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Língua de publicação: inglês (EN)
Língua de depósito: inglês (EN)