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1. (WO1999035284) A METHOD FOR THE DIAGNOSIS, IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION OF $i(M. TUBERCULOSIS) AND OTHER MYCOBACTERIA BY SHIFT MOBILITY ASSAY
Dados bibliográficos mais recentes no arquivo da Secretaria Internacional   

№ de pub.: WO/1999/035284 № do pedido internacional: PCT/BR1997/000087
Data de publicação: 15.07.1999 Data de depósito internacional: 30.12.1997
Pedido de exame (capítulo 2) depositado: 30.07.1999
CIP:
C12Q 1/68 (2006.01)
Requerentes: PEREGRINO FERREIRA, Paulo, César[BR/BR]; BR (UsOnly)
GEESSIEN KROON, Erna[BR/BR]; BR (UsOnly)
BERNARDES MARGUTTI PINTO, Maria, Elizabeth[BR/BR]; BR (UsOnly)
ALEIXO, Agdemir, Wáleria[BR/BR]; BR (UsOnly)
UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS[BR/BR]; Avenida Antonio Carlos, 6627 Bairro São Francisco CEP-31270-901 Belo Horizonte, MG, BR (AllExceptUS)
Inventores: PEREGRINO FERREIRA, Paulo, César; BR
GEESSIEN KROON, Erna; BR
BERNARDES MARGUTTI PINTO, Maria, Elizabeth; BR
ALEIXO, Agdemir, Wáleria; BR
Mandatário: LINDBERG, AKE; BERGENSTRAHLE & LINDVALL AB PO Box 17704 SE-118 93 STOCKHOLM, SE
Dados da prioridade:
Título (EN) A METHOD FOR THE DIAGNOSIS, IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION OF $i(M. TUBERCULOSIS) AND OTHER MYCOBACTERIA BY SHIFT MOBILITY ASSAY
(FR) DIAGNOSTIC, IDENTIFICATION, ET CARACTERISATION DE $i(M. TUBERCULOSIS) ET AUTRES MYCOBACTERIES PAR ETUDE DE RETARDEMENT SUR GEL
Resumo:
(EN) The present invention relates to a method for diagnosis, identification and characterization of $i(M. tuberculosis) or any other mycobacteria by using PCR and shift mobility assay (SMA). The method is based both on microheterogeneities observed within the 16S rRNA sequences established for mycobacteria and on nucleotide gaps and mismatches which cause a decrease in the electrophoretic mobility of DNA heteroduplex in polyacrylamide gels. The PCR strategy is based on the use of a specific primers for mycobacteria genera and divergence in sequences found in 16S rRNA coding gene. The difference in nucleotide sequence was enough to identify mycobacteria species, since a remarkable shift between single stranded and homoduplex bands in PAGE were observed among mycobacteria tested, when $i(Mycobacterium tuberculosis) was used as standard. The shift of PCR product of bacteria other than mycobacteria was observed above the single stranded band in PAGE, both in standard cultures and clinical specimens. SMA can thus provide a fast and sensitive method for detection and classification of mycobacteria in clinical samples as well as pure culture.
(FR) L'invention concerne un procédé de diagnostic, d'identification et de caractérisation de $i(M. tuberculosis), ou autre mycobactérie, par amplification en chaîne par polymérase (ACP) et étude de retardement sur gel. Le procédé repose sur les micro-hétérogénéités observées dans les séquences 16S ARNr établies pour les mycobactéries et sur les écarts de séquences nucléotidiques et les défauts d'adaptation qui entraînent une diminution de la mobilité électrophorétique d'hétéroduplex d'ADN dans les gels de polyacrylamide. La technique d'ACP repose sur l'utilisation d'amorces spécifiques pour les mycobactéries et sur les écarts de séquences observés dans le gène codant 16S ARNr. L'écart de séquence nucléotidique a suffi à identifier les mycobactéries, puisqu'on a constaté un retardement remarquable entre les bandes simple brin et homoduplex sur PAGE, parmi les mycobactéries testées, lorsque $i(M. tuberculosis) a été utilisée comme standard. On a observé un retardement pour le produit d'ACP des bactéries autres que les mycobactéries au-dessus de la bande simple brin de PAGE, en culture standard et sur spécimens cliniques. Ainsi, l'étude de retardement sur gel constitue un procédé rapide et sensible de détection et de classification des mycobactéries dans des échantillons cliniques et en culture pure.
Estados designados: US
Instituto Europeu de Patentes (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE)
Língua de publicação: inglês (EN)
Língua de depósito: inglês (EN)