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1. (WO2019038461) ATTENUATED INFLUENZA VIRUS AND USE THEREOF AS A VACCINE
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REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende:

(i) un polinucleotido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de polimerasa 2 básica (PB2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 2, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición A221T correspondiente a la posición 221 de la SEQ ID NO: 2 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias, y/o

(ii) una célula hospedadora que comprende el polinucleotido descrito en (i), preferiblemente, la célula hospedadora es una célula eucariótica, más preferiblemente, una célula MDCK, y/o

(iii) un virus que comprende el polinucleotido descrito en (i),

en donde la composición comprende, además, un adyuvante y/o excipiente y/o vehículo farmacéuticamente aceptable.

2. Composición según la reivindicación 1 , en donde el polinucleotido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 1 (M1) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 3, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición S30N correspondiente a la posición 30 de la SEQ ID NO: 3 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias.

3. Composición según la reivindicación 1 o 2, en donde el polinucleotido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 2 (M2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 4, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición V86S correspondiente a la posición 86 de la SEQ ID NO: 4 determinada por el alineamiento óptimo de ambas

secuencias.

4. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde el polinucleótido es ADN o ARN.

5. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el virus es un virus de la gripe, preferiblemente, un virus de la gripe A.

6. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la composición es una vacuna.

7. Uso de:

(i) un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de polimerasa 2 básica (PB2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 2, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición A221T correspondiente a la posición 221 de la SEQ ID NO: 2 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias, y/o

(ii) una célula hospedadora que comprende el polinucleótido descrito en (i), preferiblemente, la célula hospedadora es una célula eucariótica, más preferiblemente, una célula MDCK,

para producir in vitro un virus atenuado, preferiblemente, un virus de la gripe atenuado, más preferiblemente un virus de la gripe A atenuado.

8. Uso según la reivindicación 7, en donde el polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 1 (M1) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 3, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición S30N correspondiente a la posición 30 de la SEQ ID NO: 3 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias.

9. Uso según la reivindicación 7 u 8, en donde el polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 2 (M2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 4, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición V86S correspondiente a la posición 86 de la SEQ ID NO: 4 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias.

10. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, donde el polinucleótido es ADN o ARN.

11. Uso de:

(i) un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de polimerasa 2 básica (PB2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 2, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición A221T correspondiente a la posición 221 de la SEQ ID NO: 2 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias, y/o

(ii) una célula hospedadora que comprende el polinucleótido descrito en (i), preferiblemente, la célula hospedadora es una célula eucariótica, más preferiblemente, una célula MDCK, y/o

(iii) un virus que comprende el polinucleótido descrito en (i),

en la fabricación de un medicamento.

12. Uso según la reivindicación 11 , en donde el polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 1 (M1) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 3, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición S30N correspondiente a la posición 30 de la SEQ ID NO: 3 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias.

13. Uso según la reivindicación 11 o 12, en donde el polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 2 (M2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 4, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición V86S correspondiente a la posición 86 de la SEQ ID NO: 4 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias.

14. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en donde el polinucleótido es ADN o ARN.

15. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, en donde el virus es un virus de la gripe, preferiblemente, un virus de la gripe A.

16. Uso de:

(i) un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de polimerasa 2 básica (PB2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 2, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición A221T correspondiente a la posición 221 de la SEQ ID NO: 2 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias, y/o

(ii) una célula hospedadora que comprende el polinucleótido descrito en (i), preferiblemente, la célula hospedadora es una célula eucariótica, más preferiblemente, una célula MDCK, y/o

(iii) un virus que comprende el polinucleótido descrito en (i),

en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección por el virus de la gripe A.

17. Uso según la reivindicación 16, en donde el polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 1 (M1) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 3, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición S30N correspondiente a la posición 30 de la SEQ ID NO: 3 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias.

18. Uso según la reivindicación 16 o 17, en donde el polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 2 (M2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 4, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición V86S correspondiente a la posición 86 de la SEQ ID NO: 4 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias.

19. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 18, en donde el polinucleótido es ADN o ARN.

20. Un método in vitro para evaluar en un sujeto la gravedad de una infección por virus de la gripe que comprende detectar en una muestra biológica aislada de dicho sujeto:

(i) un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de polimerasa 2 básica (PB2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 2, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición A221T correspondiente a la posición 221 de la SEQ ID NO: 2 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias, o

(ii) un virus que comprende el polinucleótido descrito en (i),

donde si se detecta dicho polinucleótido, la infección padecida por el sujeto es menos grave que un sujeto que no muestra dicho polinucleótido descrito en (i) o dicho virus descrito en (ii).

21. Método según la reivindicación 20, en donde el polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 1 (M1) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 3, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición S30N correspondiente a la posición 30 de la SEQ ID NO: 3 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias.

22. Método según la reivindicación 20 o 21 , en donde el polinucleótido comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de matriz 2 (M2) del virus de la gripe A que comprende

(a) una secuencia de aminoácidos que comprende una identidad de secuencia de, al menos, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % con la SEQ ID NO: 4, y

(b) una sustitución de aminoácidos en la posición V86S correspondiente a la posición 86 de la SEQ ID NO: 4 determinada por el alineamiento óptimo de ambas secuencias.

23. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 22, donde el polinucleótido es ADN o ARN.

24. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, en donde el virus es un virus de la gripe, preferiblemente, un virus de la gripe A.