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1. (WO2018169094) 不死化したヒト由来腫瘍血管内皮細胞の樹立方法及び不死化したヒト由来腫瘍血管内皮細胞
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国際公開番号: WO/2018/169094 国際出願番号: PCT/JP2018/010735
国際公開日: 20.09.2018 国際出願日: 19.03.2018
IPC:
C12N 5/10 (2006.01) ,C12Q 1/02 (2006.01) ,C12N 5/09 (2010.01) ,C12N 15/09 (2006.01)
C 化学;冶金
12
生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学
N
微生物または酵素;その組成物;微生物の増殖,保存,維持;突然変異または遺伝子工学;培地
5
ヒト,動物または植物の未分化細胞,例.セルライン;組織;その培養または維持;そのための培地
10
外来遺伝物質の導入によって修飾された細胞,例.ウイルス形質転換細胞
C 化学;冶金
12
生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学
Q
酵素または微生物を含む測定または試験方法そのための組成物または試験紙;その組成物を調製する方法;微生物学的または酵素学的方法における状態応答制御
1
酵素または微生物を含む測定または試験方法;そのための組成物;そのような組成物の製造方法
02
生きた微生物を含むもの
C 化学;冶金
12
生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学
N
微生物または酵素;その組成物;微生物の増殖,保存,維持;突然変異または遺伝子工学;培地
5
ヒト,動物または植物の未分化細胞,例.セルライン;組織;その培養または維持;そのための培地
09
腫瘍細胞
C 化学;冶金
12
生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学
N
微生物または酵素;その組成物;微生物の増殖,保存,維持;突然変異または遺伝子工学;培地
15
突然変異または遺伝子工学;遺伝子工学に関するDNAまたはRNA,ベクター,例.プラスミド,またはその分離,製造または精製;そのための宿主の使用
09
組換えDNA技術
出願人:
国立大学法人北海道大学 NATIONAL UNIVERSITY CORPORATION HOKKAIDO UNIVERSITY [JP/JP]; 北海道札幌市北区北8条西5丁目 Kita 8-jyo Nishi 5-chome, Kita-ku, Sapporo-shi, Hokkaido 0600808, JP
発明者:
樋田 京子 HIDA Kyoko; JP
樋田 泰浩 HIDA Yasuhiro; JP
間石 奈湖 MAISHI Nako; JP
菊地 央 KIKUCHI Hiroshi; JP
大場 雄介 OHBA Yusuke; JP
代理人:
特許業務法人IPアシスト特許事務所 IP-ASSIST PATENT OFFICE; 北海道札幌市中央区北2条西3丁目1番地 太陽生命札幌ビル7階 7th-Floor, Taiyo Seimei Sapporo Building, 1, Kita 2-jyo Nishi 3-chome, Chuo-ku, Sapporo-shi, Hokkaido 0600002, JP
優先権情報:
2017-05204217.03.2017JP
発明の名称: (EN) METHOD FOR CREATING IMMORTALIZED HUMAN-DERIVED TUMOR VASCULAR ENDOTHELIAL CELLS, AND IMMORTALIZED HUMAN-DERIVED TUMOR VASCULAR ENDOTHELIAL CELLS
(FR) PROCÉDÉ DE CRÉATION DE CELLULES ENDOTHÉLIALES VASCULAIRES TUMORALES IMMORTALISÉES D'ORIGINE HUMAINE ET CELLULES ENDOTHÉLIALES VASCULAIRES TUMORALES IMMORTALISÉES D'ORIGINE HUMAINE
(JA) 不死化したヒト由来腫瘍血管内皮細胞の樹立方法及び不死化したヒト由来腫瘍血管内皮細胞
要約:
(EN) [Problem] An objective of the present invention is to obtain immortalized human-derived tumor vascular endothelial cells which are useful in cell based experiments such as compound screening. [Solution] The present invention pertains to a method for creating a strain of immortalized tumor vascular endothelial cells by: performing cellular separation by cellular separation using magnetic beads and optionally selected flow cytometry on a cell suspension derived from tumor tissue comprising tumor vascular endothelial cells, thereby separating a cell group comprising CD31-positive cells; then combining subculturing of the separated cell group and flow cytometry to re-separate a cell group comprising CD31-positive cells; transforming the cell group by using a viral vector that can express SV40T genes, hTERT genes, and genes capable of coding fluorescent protein; and combining subculturing and flow cytometry to isolate transformed cells. The present invention makes it possible to stably provide large quantities of tumor vascular endothelial cells useful for the screening of drugs and for the development of pharmaceuticals specifically for tumor vascular endothelial cells.
(FR) Le problème décrit par la présente invention est d'obtenir des cellules endothéliales vasculaires tumorales immortalisées d'origine humaine qui sont utiles dans des expériences basées sur des cellules telles que le criblage de composés. La solution selon l'invention porte sur un procédé de création d'une souche de cellules endothéliales vasculaires tumorales immortalisées par : mise en œuvre d'une séparation cellulaire par séparation cellulaire à l'aide de billes magnétiques et éventuellement d'une cytométrie en flux sélectionnée sur une suspension cellulaire dérivée d'un tissu tumoral comprenant des cellules endothéliales vasculaires tumorales, ce qui permet de séparer un groupe de cellules comprenant des cellules positives pour CD31 ; puis combinaison de la sous-culture du groupe de cellules séparées et de la cytométrie en flux pour re-séparer un groupe de cellules comprenant des cellules positives pour CD31 ; transformation du groupe de cellules à l'aide d'un vecteur viral qui peut exprimer des gènes SV40T, des gènes hTERT et des gènes capables de coder pour une protéine fluorescente ; et combinaison de la sous-culture et de la cytométrie en flux pour isoler les cellules transformées. La présente invention permet de fournir de manière stable de grandes quantités de cellules endothéliales vasculaires tumorales utiles pour le criblage de médicaments et pour la mise au point de produits pharmaceutiques spécifiquement pour des cellules endothéliales vasculaires tumorales.
(JA) 【課題】 本発明は、化合物スクリーニングなどの細胞ベースの実験に有用な不死化したヒト由来腫瘍血管内皮細胞を取得することを目的とするものである。 【解決手段】 本発明は、腫瘍血管内皮細胞を含む腫瘍組織由来の細胞懸濁液に対して磁気ビーズを用いた細胞分離、及び任意選択のフローサイトメトリーによる細胞分離を行ってCD31陽性細胞を含む細胞群を分離し、さらに分離した細胞群の継代培養とフローサイトメトリーとを組み合わせてCD31陽性細胞を含む細胞群を再分離し、SV40T遺伝子、hTERT遺伝子及び蛍光タンパク質をコードする遺伝子を発現可能に有するウイルスベクターで形質転換し、継代培養とフローサイトメトリーを組み合わせて形質転換細胞を選抜することを含む、不死化腫瘍血管内皮細胞株を樹立する方法に関する。本発明によれば、腫瘍血管内皮細胞に特異的な薬剤のスクリーニング又は医薬の開発に有用な腫瘍血管内皮細胞を安定的かつ大量に提供することが可能となる。
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指定国: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DJ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JO, JP, KE, KG, KH, KN, KP, KR, KW, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW
アフリカ広域知的所有権機関(ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
ユーラシア特許庁(EAPO) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
欧州特許庁(EPO) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
アフリカ知的所有権機関(OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
国際公開言語: 日本語 (JA)
国際出願言語: 日本語 (JA)