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1. (WO2015128894) Gタンパク質共役型受容体のシグナル伝達の検出方法
国際事務局に記録されている最新の書誌情報

国際公開番号: WO/2015/128894 国際出願番号: PCT/JP2014/000992
国際公開日: 03.09.2015 国際出願日: 25.02.2014
予備審査請求日: 06.10.2015
IPC:
G01N 33/50 (2006.01) ,C12N 15/09 (2006.01) ,G01N 33/15 (2006.01)
G 物理学
01
測定;試験
N
材料の化学的または物理的性質の決定による材料の調査または分析
33
グループ1/00から31/00に包含されない,特有な方法による材料の調査または分析
48
生物学的材料,例.血液,尿;血球計
50
生物学的材料,例.血液,尿,の化学分析;生物学的特異性を有する配位子結合方法を含む試験;免疫学的試験
C 化学;冶金
12
生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学
N
微生物または酵素;その組成物;微生物の増殖,保存,維持;突然変異または遺伝子工学;培地
15
突然変異または遺伝子工学;遺伝子工学に関するDNAまたはRNA,ベクター,例.プラスミド,またはその分離,製造または精製;そのための宿主の使用
09
組換えDNA技術
G 物理学
01
測定;試験
N
材料の化学的または物理的性質の決定による材料の調査または分析
33
グループ1/00から31/00に包含されない,特有な方法による材料の調査または分析
15
医薬
出願人:
国立大学法人東北大学 TOHOKU UNIVERSITY [JP/JP]; 宮城県仙台市青葉区片平二丁目1番1号 1-1, Katahira 2-chome, Aoba-ku, Sendai-shi, Miyagi 9808577, JP
発明者:
青木 淳賢 AOKI, Junken; JP
井上 飛鳥 INOUE, Asuka; JP
代理人:
廣田 雅紀 HIROTA, Masanori; 東京都港区赤坂二丁目2番19号アドレスビル6階 6th Fl. Address Bldg., 2-2-19, Akasaka, Minato-ku, Tokyo 1070052, JP
優先権情報:
発明の名称: (EN) METHOD FOR DETECTING SIGNAL TRANSDUCTION OF G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR
(FR) PROCÉDÉ DE DÉTECTION DE TRANSDUCTION DE SIGNAL D'UN RÉCEPTEUR COUPLÉ À UNE PROTÉINE G
(JA) Gタンパク質共役型受容体のシグナル伝達の検出方法
要約:
(EN)  The present invention addresses the problem of [1] providing a method whereby activation of endogenous Gq or G12 family signal transduction induced by binding of a test substance (ligand) and a G protein-coupled receptor can be specifically detected with high sensitivity in a mammalian cell, or [2] providing a method whereby activation of four types (Gs, Gi, Gq, and G12) of Gα family signal transduction induced by binding of a ligand and a GPCR can be specifically detected with high sensitivity in a mammalian cell. In the present invention, activation of Gq family signal transduction induced by binding of a ligand and the GPCR thereof is specifically detected by TGFα shedding assay using knockout cell (∆GNAQ/11) lines for two types of genes (GNAQ and GNA11 genes) for the Gq family. Activation of G12 family signal transduction induced by binding of a ligand and the GPCR thereof is also specifically detected by TGFα shedding assay using knockout cell (∆GNA12/13) lines for two types of genes (GNA12 and GNA13 genes) for the G12 family. A Gα chimera protein based on a Gq- or G12-family structure is also caused to be expressed in knockout cell (∆GNAQ/11/12/13) lines for the abovementioned two types of genes for the Gq family and the abovementioned two types of genes for the G12 family, and activation of four types (Gs, Gi, Gq, and G12) of Gα family signal transduction induced by binding of a ligand and the GPCR thereof is also specifically detected by TGFα shedding assay.
(FR)  La présente invention aborde le problème consistant à [1] la fourniture d'un procédé par lequel l'activation de la transduction de signal endogène de la famille Gq ou G12 induite par la liaison d'une substance d'essai (ligand) et d'un récepteur couplé à une protéine G peut être spécifiquement détecté avec une sensibilité élevée dans une cellule de mammifère, ou [2] la fourniture d'un procédé par lequel l'activation de quatre types (Gs, Gi, Gq, et G12) de la transduction de signal de la famille Gα induite par la liaison d'un ligand et d'un GPCR peut être spécifiquement détecté avec une sensibilité élevée dans une cellule de mammifère. Dans la présente invention, l'activation de la transduction de signal de la famille Gq induite par la liaison d'un ligand et le GPCR de ce dernier est spécifiquement détectée par dosage de l'élimination de TGFα à l'aide de lignées de cellules inactivées (∆ GNAQ /11) pour deux types de gènes et gènes (gènes GNAQ et GNA11) de la famille Gq. L'activation de la transduction de signal de la famille G12 induite par la liaison d'un ligand et le GPCR de ce dernier est également détectée spécifiquement par dosage d'élimination de TGFα à l'aide de lignées de cellules inactivées (∆ GNA12 /13) pour deux types de gènes (gènes GNA12 et GNA13) de la famille G12. Une protéine Gα chimère sur la base d'une structure de la famille Gq ou G12 est également amené à être exprimée dans les lignées de cellules inactivées (∆ GNAQ/11/12/13) pour la deux types de gènes mentionnés ci-dessus de la famille Gq et la deux types de gènes mentionnés ci-dessus de la famille G12, et l'activation de quatre types (Gs, Gi, Gq, et G12) de la transduction de signal de la famille Gα induite par la liaison d'un ligand et le GPCR de ce dernier est également détectée spécifiquement par dosage d'élimination de TGFα.
(JA)  本発明は、[1]哺乳動物細胞において、被検物質(リガンド)とGタンパク質共役型受容体(GPCR)との結合により誘導される、内在性Gq又はG12ファミリーのシグナル伝達活性化を高感度かつ特異的に検出できる方法を提供することや、[2]哺乳動物細胞において、リガンドとGPCRとの結合により誘導される、Gαのファミリー4種類(Gs、Gi、Gq、及びG12)のシグナル伝達活性化を高感度かつ特異的に検出できる方法を提供することを課題とする。 Gqファミリー遺伝子2種(GNAQ及びGNA11遺伝子)のノックアウト細胞(ΔGNAQ/11)株を用いたTGFα切断アッセイにより、リガンドとそのGPCRとの結合により誘導される、Gqファミリーのシグナル伝達活性化を特異的に検出する。また、G12ファミリー遺伝子2種(GNA12及びGNA13遺伝子)のノックアウト細胞(ΔGNA12/13)株を用いたTGFα切断アッセイにより、リガンドとそのGPCRとの結合により誘導される、G12ファミリーのシグナル伝達活性化を特異的に検出する。さらに、上記Gqファミリー遺伝子2種と上記G12ファミリー遺伝子2種のノックアウト細胞(ΔGNAQ/11/12/13)株にGqやG12ファミリーを骨格としたGαキメラタンパク質を発現させ、TGFα切断アッセイにより、リガンドとそのGPCRとの結合により誘導される、Gαのファミリー4種類(Gs、Gi、Gq、及びG12)のシグナル伝達活性化を特異的に検出する。
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アフリカ知的所有権機関(OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
国際公開言語: 日本語 (JA)
国際出願言語: 日本語 (JA)