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1. (WO2013047677) 微量DNA断片の線形的増幅法

Translation翻訳: 原文 > 日本語
国際公開番号:    WO/2013/047677    国際出願番号:    PCT/JP2012/074927
国際公開日: 04.04.2013 国際出願日: 27.09.2012
予備審査請求日:    24.07.2013    
C12N 15/09 (2006.01), C12N 9/10 (2006.01), C12N 9/96 (2006.01), C12P 19/34 (2006.01), C12Q 1/68 (2006.01)
出願人: PUBLIC UNIVERSITY CORPORATION YOKOHAMA CITY UNIVERSITY [JP/JP]; 22-2, Seto, Kanazawa-ku, Yokohama-shi, Kanagawa 2360027 (JP)
発明者: TANIGUCHI, Hideki; (JP).
UENO, Yasuharu; (JP)
代理人: MAYAMA, Setsuko; Nohki-kaikan Fourth Floor, 30-1, Tsuruyacho 3-chome, Kanagawa-ku, Yokohama-shi, Kanagawa 2210835 (JP)
2011-215318 29.09.2011 JP
(JA) 微量DNA断片の線形的増幅法
要約: front page image
(EN)The amplification by an LM-PCR method has such a problem that amplification accuracy is not satisfactory although amplification sensitivity is high, and the amplification by a T7-IVT method has such a problem that amplification sensitivity is not satisfactory although amplification accuracy is high. The present invention provides a nucleic acid amplification method whereby it becomes possible to solve the problems of these conventional methods. A nucleic acid amplification method comprising the following step (a) and/or step (b): (a) a step of carrying out an enzymatic reaction of a terminal nucleotide transferase in the presence of DNA which cannot be added with a base at the 3'-terminal thereof with the terminal nucleotide transferase; and (b) a step of carrying out the enzymatic reaction of a Klenow enzyme in the co-presence of a poly(A-T7) oligo-DNA primer and the Klenow enzyme and in the presence of DNA that cannot undergo the formation of any double strand in a T7 region of the poly(A-T7) oligo-DNA primer.
(FR)Selon l'invention, l'amplification par un procédé LM-PCR présente un problème tel que la fiabilité d'amplification n'est pas satisfaisante bien que la sensibilité d'amplification soit élevée, et l'amplification par un procédé T7-IVT présente un problème tel que la sensibilité d'amplification n'est pas satisfaisante bien que la fiabilité d'amplification soit élevée. La présente invention concerne un procédé d'amplification d'acide nucléique grâce auquel il devient possible de résoudre les problèmes de ces procédés classiques. L'invention concerne un procédé d'amplification d'acide nucléique comportant l'étape suivante (a) et/ou (b) : (a) une étape d'exécution d'une réaction enzymatique d'une transférase de nucléotide terminal en présence d'ADN qui ne peut pas être ajouté avec une base à l'extrémité 3'-terminale de celui-ci avec la transférase de nucléotide terminal; (b) une étape d'exécution de la réaction enzymatique d'une enzyme de Klenow en co-présence d'une amorce poly(A-T7) oligo-ADN et l'enzyme de Klenow et en présence d'un ADN qui ne peut pas subir la formation de n'importe quel double brin dans une région T7 de l'amorce poly(A-T7) oligo-ADN.
(JA) LM-PCR法による増幅では増幅の感度は高いものの増幅の精度が不足する問題があり、T7-IVT法による増幅では増幅の精度は高いものの増幅の感度が不足する問題がある。本発明は、これらの従来技術が抱える問題を解決する核酸増幅法を提供する。 下記(a)及び/又は(b)の工程を含む、核酸の増幅方法。 (a) ターミナルヌクレオチドトランスフェラーゼにより3'末端に塩基が付加されないDNAの存在下で、ターミナルヌクレオチドトランスフェラーゼの酵素反応を行う工程 (b) ポリA-T7オリゴDNAプライマーとクレノウ酵素の共存在下で、ポリA-T7オリゴDNAプライマーのT7領域で二本鎖形成を受けないDNAの存在下で、クレノウ酵素の酵素反応を行う工程
指定国: AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
アフリカ広域知的所有権機関(ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
ユーラシア特許庁(EAPO) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
欧州特許庁(EPO) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
アフリカ知的所有権機関(OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
国際公開言語: Japanese (JA)
国際出願言語: Japanese (JA)