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1. (WO2004016782) 複数の蛋白質の間の相互作用を測定する方法
国際事務局に記録されている最新の書誌情報   

Translation翻訳: 原文 > 日本語
国際公開番号:    WO/2004/016782    国際出願番号:    PCT/JP2003/010386
国際公開日: 26.02.2004 国際出願日: 15.08.2003
IPC:
C12N 15/10 (2006.01), C12N 15/70 (2006.01)
出願人: THE UNIVERSITY OF TOKYO [JP/JP]; 3-1, Hongo 7-chome, Bunkyo-ku, Tokyo 113-8654 (JP) (米国を除く全ての指定国).
UEDA, Hiroshi [JP/JP]; (JP) (米国のみ).
NAGAMUNE, Teruyuki [JP/JP]; (JP) (米国のみ)
発明者: UEDA, Hiroshi; (JP).
NAGAMUNE, Teruyuki; (JP)
代理人: SUGIMURA, Kosaku; Kazan Building, 2-4, Kasumigaseki 3-chome, Chiyoda-ku, Tokyo 100-0013 (JP)
優先権情報:
2002-237411 16.08.2002 JP
発明の名称: (EN) METHOD OF ASSAYING INTERACTION BETWEEN PROTEINS
(FR) PROCEDE D'ANALYSE D'UNE INTERACTION ENTRE DES PROTEINES
(JA) 複数の蛋白質の間の相互作用を測定する方法
要約: front page image
(EN)It is intended to provide a novel method for assaying an interaction between the VH and VL domains of the variable region of an antibody. This method is widely usable to detect an interaction between proteins. According to this method, an amber suppressor strain of Escherichia coli is transformed by a phagemid vector having an amber codon to thereby prepare a phage. Thus, both of the VH and VL domains are presented on phage particles. In the case of preparing a phage by transforming a non-amber suppressor strain of E. coli, on the other hand, the VH domain alone is presented on phage particles and the VL domain is secreted into the culture supernatant due to the presence of the amber codon, i.e., change-over presentation. The VL domain secreted into the culture supernatant is immobilized on a solid phase and the interaction thereof with the VH domain presented on the phage is quantified. Thus, the interaction between the VH domain and the VL domain can be assayed.
(FR)Cette invention concerne un nouveau procédé d'analyse d'une interaction entre les domaines VH et VL de la région variable d'un anticorps. Ce procédé peut être largement utilisé pour détecter une interaction entre des protéines. Selon ce procédé, une souche suppressive de codon ambre d'Escherichia coli est modifiée à l'aide d'un vecteur phagémide comportant un codon ambre, ce qui permet de préparer un phage. Ainsi, les domaines VH et VL sont tous deux présentés sur des particules phagiques. Par contre, lorsqu'un phage est préparé par la modification d'une souche suppressive de codon non ambre d'E. coli, seul le domaine VH est présenté sur des particules phagiques alors que le domaine VL est sécrété dans le surnageant de culture du fait de la présence du codon ambre, à savoir de la présentation de modification. Le domaine VL sécrété dans le surnageant de culture est immobilisé sur une phase solide et son interaction avec le domaine VH présenté sur le phage est quantifiée. L'interaction entre le domaine VH et le domaine VL peut ainsi être analysée.
(JA) 本発明により、抗体可変領域のVH断片とVL断片の間の相互作用を測定するための新規な方法が与えられた。本発明の方法は蛋白質の間の相互作用を検出する目的で、広く使用することが可能である。本発明の方法に従って、アンバーコドンを有するファージミドベクターによってアンバーサプレッサー株大腸菌を形質転換してファージを調製すると、VH・VL断片の両者がファージ粒子上に提示される。一方非アンバーサプレッサー株大腸菌を形質転換してファージを調製した際には、アンバーコドンが存在するために、VH断片のみがファージ粒子上に提示されてVL断片は培養上清中に分泌されるという提示切り替えが起こる。培養上清中に分泌されたVL断片を固相に固定化し、ファージ上に提示されたVH断片との相互作用を定量化することにより、VH断片とVL断片の間の相互作用を測定することが可能である。
指定国: AU, JP, US.
欧州特許庁(EPO) (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HU, IE, IT, LU, MC, NL, PT, RO, SE, SI, SK, TR).
国際公開言語: Japanese (JA)
国際出願言語: Japanese (JA)