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1. CN101874042 - Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr

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[ ZH ]

权利要求书

1.改善包含抗体可变区的多肽的血浆中药物动力学的同时保持所述可变区的抗原结合活性的方法,通过改变能够暴露于该多肽的互补性决定区CDR表面的至少1个氨基酸残基的电荷为负电荷来降低包含抗体可变区的该多肽的等电点,其中能够暴露于CDR区表面的氨基酸残基为选自重链可变区中Kabat编号第31位、第61位、第62位、第64位和第65位的氨基酸残基或轻链可变区中Kabat编号第24位、第27位、第53位、第54位和第55位的氨基酸残基的至少1个氨基酸残基。

2.权利要求1所述的方法,其中氨基酸残基的电荷的改变通过氨基酸取代来进行,并且其中被修饰的氨基酸残基选自下述(a)或(b)中任一组所含的氨基酸残基:
(a) 谷氨酸E、天冬氨酸D;
(b) 赖氨酸K、精氨酸R、组氨酸H。

3.权利要求1所述的方法,其中上述包含抗体可变区的多肽进一步包含FcRn结合区。

4.权利要求1所述的方法,其中上述包含抗体可变区的多肽为IgG抗体。

5.权利要求1所述的方法,其中上述包含抗体可变区的多肽为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

6.权利要求1所述的方法,其中上述包含抗体可变区的多肽是与至少两种抗原结合的多特异性多肽。

7.权利要求1所述的方法,其中上述氨基酸残基的电荷的改变是指使理论等电点变化1.0以上的改变。

8.权利要求1所述的方法,其中上述药物动力学的控制是指血浆中清除率CL、浓度曲线下面积AUC、平均血浆中滞留时间、血浆中半衰期t1/2中任一个参数的增大或减小。

9.多特异性多肽的纯化方法,所述多特异性多肽包含具有抗体可变区的第1多肽和第2多肽,该方法包括:
(a) 修饰编码包含氨基酸残基的多肽的核酸,以改变能够暴露于该多肽的CDR区表面的至少1个该氨基酸残基的电荷;该核酸的修饰是指修饰编码第1多肽的氨基酸残基的核酸和/或编码第2多肽的氨基酸残基的核酸,使与修饰前相比第1多肽与第2多肽的等电点之差增大;
(b) 培养宿主细胞,以表达该核酸;
(c) 通过标准层析法从宿主细胞培养物中纯化多特异性多肽,其中与修饰之前相比,第1多肽和第2多肽的多特异性多肽与第1多肽的同源多聚体和第2多肽的同源多聚体更分离,
其中能够暴露于CDR区表面的氨基酸残基为选自重链可变区中Kabat编号第31位、第61位、第62位、第64位和第65位的氨基酸残基或轻链可变区中Kabat编号第24位、第27位、第53位、第54位和第55位的氨基酸残基的至少1个氨基酸残基。

10.权利要求9所述的方法,其中氨基酸残基的电荷的改变通过氨基酸取代来进行,并且其中被修饰的氨基酸残基选自下述(a)或(b)中任一组所含的氨基酸残基:
(a) 谷氨酸E、天冬氨酸D;
(b) 赖氨酸K、精氨酸R、组氨酸H。

11.权利要求10所述的方法,其中上述多特异性多肽为多特异性抗体。