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1. (CN107849052) Pyrrolo[2,3-d]pyrimidine compound or salt thereof
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吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物或其盐


技术领域
本发明涉及具有选择性JAK3抑制作用的新型吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物或其盐、以及含有其作为有效成分的医药组合物。
背景技术
JAK3与JAK1、JAK2、TYK2同为属于JAK家族的非受体型的酪氨酸激酶,已知其参与各种细胞因子的信号转导。
JAK1、JAK2和TYK2广泛地进行表达,而JAK3的表达主要局限于T细胞、B细胞、自然杀伤细胞等淋巴细胞。JAK1和JAK2的缺陷小鼠胚胎致死或刚出生不久就死亡,而在JAK3的缺陷小鼠和人中,出现由淋巴细胞功能不全所导致的重症复合型免疫缺陷。
推测JAK3抑制剂通过抑制6种细胞因子(IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、IL-21)的信号而特异性地抑制在免疫系统中担负重要作用的T细胞、B细胞等淋巴细胞的功能,因此,对于与这些细胞的活化有关的疾病,期待成为能够将副作用的表现抑制在最小限度的有效的治疗药(非专利文献1~2)。
作为能够利用JAK3抑制剂治疗的疾病,报道了自身免疫疾病(类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、硬皮病、多发性肌炎-皮肌炎、斯耶格伦综合征、白塞氏病等)、过敏疾病(支气管哮喘、过敏性鼻炎-花粉症、特应性皮炎、食物过敏、过敏反应、药物过敏、荨麻疹、结膜炎等)、神经系统的疾病(多发性硬化症、阿尔茨海默病等)、炎症性肠疾病(溃疡性大肠炎、克隆病)、银屑病、接触性皮肤炎、糖尿病、乳糜泻、病毒感染症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、血液的恶性肿瘤(淋巴瘤、白血病)及其它恶性肿瘤等(非专利文献3~6)。
在临床上,报告了作为JAK3抑制剂的托法替尼(Tofacitinib,Pfizer公司)被用作类风湿性关节炎治疗剂,但对JAK3的选择性低,对于JAK1和JAK2也会抑制,从而产生副作用(脂质上升、贫血、中性粒细胞减少、免疫抑制等)(非专利文献7)。
另外,目前报告了在4位上具有环状的取代基的吡咯并嘧啶化合物(专利文献1)、在4位上具有环己烯的吡咯并嘧啶化合物(专利文献2)、在4位上具有被丙烯酰胺取代的芳香族的吡咯并嘧啶化合物(专利文献3)具有JAK抑制活性。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:米国公开US20040058922
专利文献2:国际公开第2006/096270号
专利文献3:国际公开第2013/085802号
专利文献4:国际公开第2015/054572号
非专利文献
非专利文献1:Immunol Rev.,2009年,第228卷第1号,p.273-287
非专利文献2:Int J Biochem Cell Biol.,2009年,第41卷第12号,p.2376-2379
非专利文献3:Trends Pharmacol Sci.,2004年,第25卷第11号,p.558-562
非专利文献4:J Clin Immunol.,2013年,第33卷第3号,p.586-594
非专利文献5:PLoS One.,2012年,第7卷第2号,e31721
非专利文献6:Cancer Discov.,2012年,第2卷第7号,p.591-597
非专利文献7:J Med Chem.,2010年,第53卷第24号,p.8468-8484
发明内容
发明要解决的技术问题
但是,在专利文献1所记载的化合物中,氮原子直接与吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物的4位结合,没有记载在该位置中利用丙烯酰胺取代的环烯基。另外,在专利文献2所记载的化合物中,没有记载吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物的4位被丙烯酰胺取代的环烯基,并且该专利文献所记载的化合物对于JAK3的选择性低,其抑制活性也不充分。此外,专利文献3没有记载4位上结合有利用丙烯酰胺取代的环烯基的吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物。
另一方面,作为具有G12C突变的KRAS抑制剂,报告了4位具有哌嗪的吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物(专利文献4),但该文献没有记载对于JAK3的抑制活性。
因此,本发明要解决的技术问题在于提供一种选择性且强烈抑制JAK3、并且具有优异的人末梢血单核细胞(以下记作PBMC)的增殖抑制作用和优异的口服吸收性、在体内表现出对IL-2诱导产生IFN-γ的抑制活性的新型化合物或其盐、以及含有该新型化合物或其盐的医药组合物。
用于解决技术问题的手段
本发明的发明人为了解决上述技术问题反复进行了深入研究,结果发现:将吡咯并[2,3-d]嘧啶作为基本结构、其4位上具有利用丙烯酰胺取代的环烯基、并且5位上具有限定的环状取代基的化合物组具有对于JAK3的选择性抑制活性。并且发现,本发明化合物发挥优异的人PBMC的增殖抑制作用,作为用于治疗JAK3参与的各种疾病、特别是自身免疫疾病的医药有用。并且确认,本发明化合物具有优异的口服吸收性,作为口服用医药品有用。进一步发现,本发明化合物在体内显示出对IL-2诱导产生IFN-γ的抑制活性,从而完成了本发明。
本发明提供如下的〔1〕~〔19〕。
〔1〕一种下述式(I)所示的化合物或其盐。
[式中,X表示-CH=CH-、-NH-、硫原子或氧原子;n表示0~2的整数。]
〔2〕如〔1〕所述的化合物或其盐,其中,X为-CH=CH-、硫原子或氧原子,n为0或1。
〔3〕如〔1〕或〔2〕所述的化合物或其盐,其中,
式(I)中,上述结构为以下的任意结构:
并且,
式(I)中,上述结构为以下的任意结构:
〔4〕如〔1〕~〔3〕中任一项所述的化合物或其盐,化合物为N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺或(S)-N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺。
〔5〕一种以〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐为有效成分的JAK3抑制剂。
〔6〕一种含有〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐的医药组合物。
〔7〕如〔6〕所述的医药组合物,医药组合物是用于治疗JAK3参与的疾病的医药组合物。
〔8〕一种以〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐为有效成分的类风湿性关节炎或多发性硬化症的治疗剂。
〔9〕〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐在制造JAK3抑制剂中的用途。
〔10〕〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐在制造医药组合物中的用途。
〔11〕如〔10〕所述的用途,医药组合物是用于治疗JAK3参与的疾病的医药组合物。
〔12〕〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐在制造类风湿性关节炎或多发性硬化症的治疗药中的用途。
〔13〕如〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐,其用于抑制JAK3。
〔14〕如〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐,其作为医药使用。
〔15〕如〔14〕所述的化合物或其盐,医药是用于治疗JAK3参与的疾病的医药。
〔16〕如〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐,其用于类风湿性关节炎或多发性硬化症的治疗。
〔17〕一种JAK3抑制方法,包括对需要JAK3抑制的对象给予有效量的〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐的步骤。
〔18〕一种JAK3参与的疾病的治疗方法,包括对需要治疗JAK3参与的疾病的对象给予有效量的〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐的步骤。
〔19〕一种类风湿性关节炎或多发性硬化症的治疗方法,包括对需要治疗类风湿性关节炎或多发性硬化症的对象给予有效量的〔1〕~〔4〕中任一项所述的化合物或其盐。
发明的效果
根据本发明,可以提供一种作为选择性JAK3抑制剂有用的上述式(I)所示的新型吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物或其盐。
可知本发明化合物或其盐具有优异的选择性JAK3抑制活性,抑制基于JAK3信号的人PBMC的增殖。另外,可知本发明化合物具有优异的口服吸收性,作为口服给药用的医药特别有用。因此,本发明化合物或其盐能够进行JAK3参与的疾病、例如自身免疫疾病的治疗,而不产生由JAK1和JAK2引起的严重副作用(脂质上升、贫血、中性粒细胞减少、免疫抑制等)。
附图说明
图1表示对小鼠口服给予化合物7和比较例12的化合物时的IFN-γ产生抑制效果。
图2表示对类风湿性关节炎模型小鼠口服给予化合物7、托法替尼和泼尼松龙时的临床症状评分。
具体实施方式
本发明的上述式(I)所示的化合物是以吡咯并[2,3-d]嘧啶为基本结构、其4位上具有环烯基、并且5位上具有环状的取代基的化合物,是上述的任意现有技术文献等中都没有记载的新型的化合物。
在本说明书中,“C 1 ~C 6 烷基”是碳原子数1~6的直链状或支链状的饱和烃基,具体可以列举甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
在本发明的式(I)所示的化合物中,X表示-CH=CH-、-NH-、硫原子或氧原子。X优选为-CH=CH-、硫原子或氧原子,更优选为-CH=CH-或氧原子,特别优选为氧原子。
在本发明的式(I)所示的化合物中,n表示0~2的整数。n优选为0或1,特别优选为1。
在本发明的式(I)所示的化合物中,
作为上述结构的具体的结构,优选以下(1)~(5):
上述(1)~(5)中,更优选(1)、(2)、(3),特别优选(2)。
在本发明的式(I)所示的化合物中,
作为上述的环烯基部分的具体的结构,优选以下(1)~(10):
上述(1)~(10)中,更优选(1)、(3)、(5)、(6)、(10),进一步优选(1)、(3)、(5)、(6),更进一步优选(1)、(3),特别优选(3)。
在本发明的式(I)所示的化合物中,作为优选的化合物,是式(I)中的X为-CH=CH-、硫原子或氧原子、且n为0或1的化合物。
本发明的式(I)所示的化合物中,更优选的化合物是如下化合物:
式(I)中,上述结构为以下的任意结构:
并且,
式(I)中,上述结构为以下任意结构:
本发明的式(I)所示的化合物中,更优选的化合物是式(I)中的X为氧原子、n为1的化合物。
本发明的式(I)所示的化合物中,特别优选的化合物是如下化合物:
式(I)中,上述结构为以下结构:
并且,
式(I)中,上述结构为以下结构:
作为优选的本发明化合物,具体可以例示下列物质:
(1)N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物1)
(2)N-(3-(5-(噻吩-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物2)
(3)N-(3-(5-(噻吩-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物3)
(4)N-(3-(5-(呋喃-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物4)
(5)N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物5)
(6)(R)-N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物6)
(7)(S)-N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物7)
(8)N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环戊-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物8)
(9)N-(3-(5-苯基-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)环戊-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物9)
(10)N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环戊-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物10)
(11)N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环庚-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物11)
(12)N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物12)
(13)N-(3-(5-(噻吩-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物13)
(14)N-(3-(5-(噻吩-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物14)
(15)N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物15)
(16)N-(3-(5-(呋喃-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物16)
其中,优选化合物2、5、7、8、9、13、14,更优选化合物5、7,特别优选化合物7。
下面,对本发明的化合物的制造方法进行说明。
本发明的式(I)所示的化合物例如可以利用下述制造方法制造。
<制造方法>
[式中,L1、L2相同或不同,表示脱离基,P1、P2表示保护基,R1、R2、R3、R4、R5相同或不同,表示氢原子或C 1 ~C 6 烷基。在此,R1和R2、R3和R4可以分别与相邻的氧和硼原子一起形成环,其他符号的含义同上。]
式2、式3~式5和式8~式9中所示的NP1表示氮原子被保护基P1保护的状态。例如,在使用叔丁氧基羰基(Boc基)作为保护基的情况下,意指被1个或2个Boc基保护、或者形成苯二甲酰亚胺等酰亚胺而被保护的状态。
(第一工序)
本工序是使式1所示的化合物、与市售品或能够通过公知方法制造的式2所示的化合物进行偶联反应,得到式3所示的化合物的方法。
本工序通常可以按照公知的方法(例如Chemical Reviews,Vol.95,p.2457,1995)进行,例如在过渡金属催化剂和碱的存在下,在不对反应造成不良影响的溶剂中实施。
关于式2所示的硼酸或硼酸酯的使用量,相对于式1所示的化合物(1摩尔),可以使用1~10当量,优选1~3当量。
作为过渡金属催化剂,例如可以使用钯催化剂(例如乙酸钯、氯化钯、四(三苯基)膦钯等)、镍催化剂(例如氯化镍等)等,根据需要,还可以添加配体(例如三苯基膦、三叔丁基膦等),使用金属氧化物(例如氧化铜、氧化银等)等作为共催化剂。
过渡金属催化剂的使用量因催化剂的种类而有所不同,相对于式1所示的化合物(1摩尔),通常约为0.0001~1摩尔、优选约为0.01~0.5摩尔左右。关于配体的使用量,相对于式1所示的化合物(1摩尔),通常约为0.0001~4摩尔、优选约为0.01~2摩尔左右。作为共催化剂的使用量,相对于式1所示的化合物(1摩尔),通常约为0.0001~4摩尔、优选约为0.01~2摩尔左右。
作为碱,例如可以列举有机胺类(例如三甲胺、三乙胺、二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5,4,0]十一碳-7-烯、吡啶、N,N-二甲基苯胺等)、碱金属盐(例如碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠、磷酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾等)、金属氢化物(例如氢化钾、氢化钠等)、碱金属烷醇(例如甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾等)、二硅氮烷碱金属(例如二硅氮烷锂、二硅氮烷钠、二硅氮烷钾等)等。
相对于式1所示的化合物(1摩尔),碱的使用量通常为0.1~10摩尔、优选约为1~5摩尔左右。
作为溶剂,只要是不会对反应造成不良影响的物质即可,例如可以列举烃类(例如苯、甲苯、二甲苯等)、卤代烃类(例如氯仿、1,2-二氯乙烷等)、腈类(例如乙腈等)、醚类(例如1,4-二噁烷、二甲氧基乙烷、四氢呋喃等)、醇类(例如甲醇、乙醇等)、非质子性极性溶剂(例如二甲基甲酰胺、二甲亚砜、六甲基磷酰胺等)、水或它们的混合物等。
反应时间为0.1~100小时,优选为0.5~24小时。反应温度为0℃~溶剂发生沸腾的温度,优选为0℃~150℃。
这样得到的式3所示的化合物可以利用后述的公知的分离精制方法进行分离精制或不进行分离精制而交付于下一工序。
(第二工序)
本工序是将式3所示的化合物卤化,得到式4所示的化合物的方法。卤化例如可以通过使用氟、氯、溴、碘等的方法、使用N-氯琥珀酰亚胺、N-溴琥珀酰亚胺、N-碘琥珀酰亚胺的方法进行。在本反应中,优选使用N-氯琥珀酰亚胺、N-溴琥珀酰亚胺、N-碘琥珀酰亚胺等的方法。
N-氯琥珀酰亚胺、N-溴琥珀酰亚胺、N-碘琥珀酰亚胺等相对于式3所示的化合物(1摩尔)可以使用1~10当量,优选使用1~3当量。
作为溶剂,只要是不会对反应造成不良影响的物质即可,例如可以列举烃类(例如苯、甲苯、二甲苯等)、卤代烃类(例如氯仿、1,2-二氯乙烷等)、腈类(例如乙腈等)、醚类(例如二甲氧基乙烷、四氢呋喃等)、醇类(例如甲醇、乙醇等)、非质子性极性溶剂(例如二甲基甲酰胺、二甲亚砜、六甲基磷酰胺等)、水或它们的混合物等。
反应时间为0.1~100小时,优选为0.5~24小时。反应温度为0℃~溶剂发生沸腾的温度,优选为0℃~100℃。
这样得到的式4所示的化合物可以利用后述的公知的分离精制方法进行分离精制或不进行分离精制而交付于下一工序。
(第三工序)
本工序是由式4所示的化合物导入保护基P2而得到式5所示的化合物的方法。
作为保护的方法,可以通过通常公知的方法进行,例如可以通过ProtectiveGroups in Organic Synthesis,T.W.Greene,John Wiley&Sons(1981年)中记载的方法、或以此为基础的方法进行。在本反应中,保护基P2优选甲苯磺酸基、苯磺酸基、甲磺酸基、甲氧基甲基、三苯甲基等。
本反应的保护基化剂例如可以列举甲苯磺酰氯、苯磺酰氯、甲磺酰氯、氯(甲氧基)甲烷、三苯甲基氯等。
这些保护基化剂的使用量相对于式4所示的化合物(1摩尔)通常约为1~100摩尔,优选约为1~10摩尔左右。
作为碱,例如可以列举有机胺类(例如三甲胺、三乙胺、二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5,4,0]十一碳-7-烯、吡啶、N,N-二甲基苯胺等)、碱金属盐(例如碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠、磷酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾等)、金属氢化物(例如氢化钾、氢化钠等)、碱金属烷醇(例如甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾等)、二硅氮烷碱金属(例如二硅氮烷锂、二硅氮烷钠、二硅氮烷钾等)等。
碱的使用量相对于式4所示的化合物(1摩尔)通常为0.1~100摩尔,优选约为1~10摩尔左右。
作为溶剂,只要是不对反应造成不良影响的物质即可,例如可以列举烃类(例如苯、甲苯、二甲苯等)、卤代烃类(例如氯仿、1,2-二氯乙烷等)、腈类(例如乙腈等)、醚类(例如二甲氧基乙烷、四氢呋喃等)、醇类(例如甲醇、乙醇等)、非质子性极性溶剂(例如二甲基甲酰胺、二甲亚砜、六甲基磷酰胺等)、水或它们的混合物等。
反应时间为0.1~100小时,优选为0.5~24小时。反应温度为0℃~溶剂发生沸腾的温度,优选为0℃~100℃。
这样得到的式5所示的化合物可以利用后述的公知的分离精制方法进行分离精制或不进行分离精制而交付于下一工序。
(第四工序)
本工序是使式5所示的化合物、与市售品或能够通过公知的方法制造的式6的硼酸或硼酸酯发生偶联反应,或者使式5所示的化合物、与市售品或能够通过公知的方法制造的式7的有机锡化合物发生偶联反应,从而得到式8所示的化合物的方法。
本工序能够按照与第一工序同样的方法进行。
(第五工序)
本工序是使式8所示的化合物的保护基P2脱保护,得到式9所示的化合物的方法。作为脱保护的方法,可以通过通常公知的方法、例如按照Protective Groups in OrganicSynthesis,T.W.Greene,John Wiley&Sons(1981年)中记载的方法、或者以此为基准的方法进行。
例如,在使用对甲苯磺酸基作为保护基P2的情况下,优选使用氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、四丁基氟化铵等脱保护剂,脱保护剂的使用量相对于式8所示的化合物(1摩尔)通常为0.5~100摩尔,优选约为1~10摩尔左右。
另外,在使用三苯甲基作为保护基P2的情况下,优选使用氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、四丁基氟化铵、酸(例如盐酸、三氟乙酸、乙酸、硫酸等)等脱保护剂,脱保护剂的使用量相对于式8所示的化合物(1摩尔)通常为0.5~100摩尔,优选约为1~10摩尔左右。
作为反应所使用后的溶剂,只要是不会对反应造成不良影响的物质即可,例如可以使用醇类(例如甲醇等)、烃类(例如苯、甲苯、二甲苯等)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等)、腈类(例如乙腈等)、醚类(例如二甲氧基乙烷、四氢呋喃等)、非质子性极性溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、六甲基磷酰胺等)或它们的混合物。
反应时间为0.1~100小时,优选为0.5~24小时。反应温度为0℃~溶剂发生沸腾的温度,优选为0℃~100℃。
这样得到的式9的化合物可以利用后述的公知的分离精制方法进行分离精制或不进行分离精制而交付于下一工序。
(第六工序)
本工序是使式9所示的化合物的氨基的保护基P1脱保护,得到式10所示的化合物的方法。作为脱保护的方法,可以通过通常公知的方法、例如Protective Groups inOrganic Synthesis,T.W.Greene,John Wiley&Sons(1981年)中记载的方法、或以此为基准的方法进行。
在使用叔丁氧基羰基作为保护基P1的情况下,优选酸性条件下的脱保护,作为酸,可以列举盐酸、乙酸、三氟乙酸、硫酸、甲苯磺酸等。酸的使用量相对于式9所示的化合物(1摩尔)优选约为1~100当量。
关于反应所使用的溶剂,只要是不会对反应造成不良影响的物质即可,例如可以使用醇类(例如甲醇等)、烃类(例如苯、甲苯、二甲苯等)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等)、腈类(例如乙腈等)、醚类(例如二甲氧基乙烷、四氢呋喃等)、非质子性极性溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、六甲基磷酰胺等)或它们的混合物。
反应时间为0.1~100小时,优选为0.5~24小时。反应温度为0~100℃,优选为0~50℃。
这样得到的式10所示的化合物可以利用后述的公知的分离精制方法进行分离精制或不进行分离精制而交付于下一工序。
(第七工序)
本工序是通过式10所示的化合物的氨基与丙烯酸或丙烯酰卤的酰胺化反应,得到本发明的式(I)所示的化合物的方法。
在使用丙烯酸的情况下,在缩合剂的存在下,相对于式10所示的化合物(1摩尔),丙烯酸通常使用0.5~10摩尔,优选约1~5摩尔左右。
作为缩合剂,可以列举N,N′-二环己基碳化二亚胺(DCC)、N,N′-二异丙基碳化二亚胺(DIC)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(WSC)、叠氮磷酸二苯酯(DPPA)、苯并三唑-1-基-氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸盐(PyBOP)、7-氮杂苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基磷鎓磷酸盐(PyAOP)、溴代三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸盐(BroP)、氯代三(吡咯烷-1-基)磷鎓六氟磷酸盐(PyCroP)、3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、4-(5,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)等。作为此时的添加剂,可以列举1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt)、N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)等。
它们的使用量相对于式10所示的化合物(1摩尔)通常为1~100摩尔,优选约1~10摩尔左右。
还可以根据需要添加碱。
作为碱,例如可以列举有机胺类(例如三甲胺、三乙胺、二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5,4,0]十一碳-7-烯、吡啶、N,N-二甲基苯胺等)、碱金属盐(例如碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠、磷酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾等)、金属氢化物(例如氢化钾、氢化钠等)、碱金属醇盐、(例如甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾等)等。
碱的使用量相对于式10所示的化合物(1摩尔)通常为1~100摩尔,优选约为1~10摩尔左右。
关于反应所使用的溶剂,只要是不会对反应造成不良影响的物质即可,例如可以使用醇类(例如甲醇等)、烃类(例如苯、甲苯、二甲苯等)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等)、腈类(例如乙腈等)、醚类(例如二甲氧基乙烷、四氢呋喃等)、非质子性极性溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、六甲基磷酰胺等)或它们的混合物。
反应时间为0.1~100小时,优选为0.5~24小时。反应温度为0℃~溶剂发生沸腾的温度,优选为0℃~100℃。
在使用丙烯酰卤的情况下,相对于式10所示的化合物(1摩尔),酰卤通常使用0.5~10摩尔,优选约1~5摩尔左右。其中,该酰卤可以使用市售品或按照公知的方法制造。
还可以根据需要添加碱。作为碱,例如可以列举有机胺类(例如三甲胺、三乙胺、二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、1,8-二氮杂双环[5,4,0]十一碳-7-烯、吡啶、N,N-二甲基苯胺等)、碱金属盐(例如碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠、磷酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾等)、金属氢化物(例如氢化钾、氢化钠等)、碱金属醇盐、(例如甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾等)等。
碱的使用量相对于式10所示的化合物(1摩尔)通常为1~100摩尔,优选约1~10摩尔左右。
关于反应所使用的溶剂,只要是不会对反应造成不良影响的物质即可,例如可以使用醇类(例如甲醇等)、烃类(例如苯、甲苯、二甲苯等)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等)、腈类(例如乙腈等)、醚类(例如二甲氧基乙烷、四氢呋喃等)、非质子性极性溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、六甲基磷酰胺等)或它们的混合物。
反应时间为0.1~100小时,优选为0.5~24小时。反应温度为0℃~溶剂发生沸腾的温度,优选为0℃~100℃。
在上述制造方法中,依次进行“将吡咯并嘧啶骨架与式2所示的化合物连接”(第一工序)、“在吡咯并嘧啶骨架中导入式6或式7所示的化合物”(第四工序),但该顺序可以更替。
即,还可以按照“在吡咯并嘧啶骨架中导入式6或式7所示的化合物”(第四工序)、“将吡咯并嘧啶骨架与式2所示的化合物连接”(第一工序)的顺序合成。
具体而言,由式1所示的化合物,按照第二工序、第三工序、第四工序、第一工序的顺序经过各工序,能够导向式8所示的化合物。各工序的条件与上述条件相同。
这样得到的本发明的式(I)所示的化合物及其中间体可以通过公知的分离精制方法容易地进行分离精制。作为这样的方法,例如可以例示浓缩、减压浓缩、溶剂萃取、重结晶、再沉淀、分取用反相高效液相色谱、色谱柱、分取薄层色谱等。
在本发明化合物具有光学异构体、立体异构体、互变异构体、旋转异构体的情况下,任一种异构体或混合物均包括在本发明化合物中。并且,本发明化合物中,外消旋体或从外消旋体中分出的光学活性体也包括在本发明化合物中。
另外,本发明化合物还包括如下的互变异构体。
本发明化合物或其盐可以为结晶,晶形无论是单一的还是多形混合物,均包括在本发明化合物或其盐中。结晶可以通过适用自身公知的结晶化法进行结晶化来制造。本发明化合物或其盐无论是溶剂合物(例如水合物等)还是无溶剂合物,均包括在本发明化合物或其盐中。用同位素(例如氘、3H、13C、14C、35S、125I等)等所标记的化合物也包括在本发明化合物或其盐中。
本发明化合物或其盐的前药也包括在本发明中,该前药是指在生物体内的生理条件下通过利用酶或胃酸等的反应而转化为本发明化合物或其盐的化合物,即,由酶引起氧化、还原、水解等而变成本发明化合物或其盐的化合物、由胃酸等引起水解等而变成本发明化合物或其盐的化合物。另外,本发明化合物或其盐的前药可以是在广川书店1990年发行的《医薬品の開発》第7卷分子设计163页至198页中所记载的生理的条件下变成本发明化合物或其盐的物质。
所谓本发明化合物的盐,只要是药学上可接受的的盐就没有特别限制,是指有机化学的领域中所使用的惯用的盐,例如,可以列举:具有羧基时的该羧基中的碱加成盐、或具有氨基或碱性的杂环式基团时的该氨基或碱性杂环式基团中的酸加成盐的盐类。
作为该碱加成盐,可以列举例如钠盐、钾盐等碱金属盐;例如钙盐、镁盐等碱土金属盐;例如铵盐;例如三甲胺盐、三乙胺盐、二环己胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、普鲁卡因盐、N,N′-二苄基乙二胺盐等有机胺盐等。
作为该酸加成盐,可以列举例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、高氯酸盐等无机酸盐;例如乙酸盐、甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、三氟乙酸盐等有机酸盐;例如甲磺酸盐、羟乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等磺酸盐等。
本发明化合物或其盐与JAK1、JAK2相比,对于JAK3具有选择性抑制活性。另外,本发明化合物或其盐具有对人PBMC的优异的增殖抑制作用。并且,本发明化合物或其盐在体内对于IL-2诱导产生IFN-γ具有抑制活性。
本发明化合物或其盐通过其优异的JAK3抑制活性,作为用于JAK3参与的疾病的治疗的医药是有用的。另外,通过对JAK3的优异的选择性,作为轻减了由JAK1和JAK2引起的副作用(脂质上升、贫血、中性粒细胞减少、免疫抑制等)的医药是有用的。
所谓“JAK3参与的疾病”,可以列举通过使JAK3的功能缺陷、抑制和/或阻碍而使得发病率降低、症状缓解、缓和、和/或痊愈的疾病。作为这种疾病,例如可以例示自身免疫疾病(类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、硬皮病、多发性肌炎-皮肌炎、斯耶格伦综合征、白塞氏病等)、过敏疾病(支气管哮喘、过敏性鼻炎-花粉症、特应性皮炎、食物过敏、过敏反应、药物过敏、荨麻疹、结膜炎等)、神经系统的疾病(多发性硬化症、阿尔茨海默病等)、炎症性肠疾病(溃疡性大肠炎、克隆病)、银屑病、接触性皮肤炎、糖尿病、乳糜泻、病毒感染症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、血液的恶性肿瘤(淋巴瘤、白血病)及其它恶性肿瘤。其中,优选银屑病、移植物抗宿主病、多发性硬化症、炎症性肠疾病、系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎,更优选类风湿性关节炎或多发性硬化症。
在本说明书中,“治疗”除了包括上述的JAK3参与的疾病的予防和/或治疗之外,还包括症状的减轻和/或维持防止复发。
在本发明化合物或其盐用作医药时,根据需要可以配合药学的载体,根据治疗目的采用各种给药形态,作为该形态,例如可以为口服剂、注射剂、栓剂、软膏剂、吸入剂、贴剂等任一种,但由于本发明化合物或其盐具有优异的口服吸收性,因此,优选采用口服剂。这些给药形态可以各自通过本领域技术人员所公知惯用的制剂方法来制造。
作为药学的载体,可以使用惯用的各种有机或无机载体物质作为制剂原料,作为固态制剂中的赋形剂、粘结剂、崩解剂、润滑剂、液态制剂中的溶剂、溶解助剂、助悬剂、等张剂、缓冲剂、止痛剂等配合。还可以根据需要使用防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂、稳定剂等制剂添加物。
在制备口服用固态制剂的情况下,可以在本发明化合物中加入赋形剂、根据需要加入赋形剂、粘结剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味-矫臭剂等之后,利用常规方法制造片剂、包衣片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂等。
在制备注射剂的情况下,可以在本发明化合物中添加pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、等张剂、局部麻碎剂等,利用常规方法制造皮下、肌肉内及静脉内用注射剂。
在上述的各给药单位形态中所应该配合的本发明化合物的量根据需要应用其的患者的症状或者根据其剂形等而并不固定,一般而言,优选每给药单位形态在口服剂中设为约0.05~1000mg,在注射剂中设为约0.01~500mg,在栓剂中设为约1~1000mg。
另外,具有上述给药形态的药剂的每1天的给药量因患者的症状、体重、年龄、性別等而异,不能一概而定,作为本发明化合物,通常成人(体重50kg)每1天设为约0.05~5000mg、优选0.1~1000mg即可,优选将其1天1次或分为2~3次左右给药。
实施例
以下,列举实施例,详细地说明本发明,但本发明并不限定于实施例。只要没有特殊说明,实施例中使用的各种试剂使用市售品。硅胶色谱法中使用Biotage公司制BiotageSNAP Cartridge Ultra,或者,碱性硅胶色谱法中使用Biotage公司制Biotage SNAPCartridge KP-NH。
分取用薄层色谱法中使用Merck公司制Kieselgel TM60F254,Art.5744或者和光社制NH2Silica 60F254Plate Wako。
1H-NMR使用JEOL公司制AL400(400MHz)、Varian公司制Mercury(400MHz)或Varian公司制Inova(400MHz),将四甲基硅烷作为标准物质进行测定。另外,质谱使用Waters公司制Micromass ZQ或SQD,用电喷射离子化法(ESI)或大气压化学离子化法(APCI)进行测定。微波反应使用Biotage公司制Initiator进行。
简写符号的含义如下所示。
s:单峰
d:双重峰
t:三重峰
q:四重峰
dd:双二重峰
dt:双三重峰
td:三重双重峰
tt:三重三重峰
ddd:双重双二重峰
ddt:双重双三重峰
dtd:双重三重双重峰
tdd:三重双二重峰
m:多重峰
br:宽峰
Boc:叔丁氧羰基
DMSO-d 6 :氘代二甲基亚砜
CDCl 3 :氘代氯仿
CD 3 OD:氘代甲醇
THF:四氢呋喃
DMF:N,N-二甲基甲酰胺
DMSO:二甲基亚砜
Pd(PPh 3 ) 4 :四(三苯基膦)钯
PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 :[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)二氯甲烷配位化合物
PdCl 2 (PPh 3 ) 2 :二氯双(三苯基膦)钯(II)
参考例1
参考例1(1a)5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
参考例1(1b)3-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
将叔丁基(3-氧代环己基)氨基甲酸酯(5.0g)和N-苯基-双(三氟甲磺酰亚胺)(11.0g)溶解在THF(100mL)中,冷却至-78℃后,加入2.0M二异丙基酰胺锂的THF溶液(26.0mL),升温至0℃,搅拌30分钟。在反应混合物中添加0.5M硫酸氢钾水溶液进行稀释之后,利用乙酸乙酯进行萃取。将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,分别得到参考例1(1a)化合物(4.39g、收率54%)、参考例1(1b)化合物(2.00g、收率25%)。
参考例1(1a):1H NMR(CDCl 3 )δ:5.84-5.74(m,1H),4.74-4.46(m,1H),4.06-3.85(m,1H),2.77-2.63(m,1H),2.38-2.18(m,3H),1.90-1.80(m,1H),1.66-1.53(m,1H),1.45(s,9H)
ESI-MS m/z 346(MH+)
参考例1(1b):1H NMR(CDCl 3 )δ:5.79-5.72(m,1H),4.70-4.50(m,1H),4.47-4.33(m,1H),2.40-2.25(m,2H),1.94-1.67(m,3H),1.56-1.49(m,1H),1.45(s,9H)
ESI-MS m/z 346(MH+)
参考例1(2a)叔丁基(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯
在参考例1(1a)化合物(9.25g)、4,4,4′,4′,5,5,5′,5′-八甲基-2,2′-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(10.2g)、乙酸钾(3.95g)中加入DMF(90mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 (980mg),以80℃搅拌14小时。将反应混合物冷却至室温,加入乙酸乙酯和水之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,得到目的物(6.51g、收率75%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:6.56-6.51(m,1H),4.58-4.41(m,1H),3.80-3.62(m,1H),2.58-2.41(m,1H),2.31-2.13(m,2H),1.98-1.77(m,2H),1.54-1.47(m,1H),1.44(s,9H),1.25(s,12H)
ESI-MS m/z 324(MH+)
参考例1(2b)叔丁基(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 环己-2-烯-1-基)氨基甲酸酯
按照参考例1(2a),使用参考例1(1b)化合物代替参考例1(1a)化合物,得到目的物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:6.40-6.32(m,1H),4.53(d,J=7.3Hz,1H),4.27-4.14(m,1H),2.11-2.02(m,2H),1.97-1.83(m,1H),1.68-1.52(m,2H),1.49-1.44(m,1H),1.44(s,9H),1.26(s,12H)
ESI-MS m/z 324(MH+)
参考例2
参考例2(1a)4-((叔丁氧羰基)氨基)环戊-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
参考例2(1b)3-((叔丁氧羰基)氨基)环戊-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
在氮氛围下,在THF(100mL)中加入1.0M六甲基二硅氮烷锂的THF溶液(114mL),冷却至-78℃,用10分钟添加叔丁基(3-氧代环戊基)氨基甲酸酯(9.0g)的THF(100mL)溶液。加入N-苯基-双(三氟甲磺酰亚胺)(19.4g),升温至0℃,搅拌10分钟。在反应混合物中加入水、甲苯、5M氢氧化钠水溶液,在室温搅拌30分钟后,利用甲苯进行萃取。将合并的有机层依次用0.5M硫酸氢钾水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,分别得到参考例2(1a)化合物(8.61g、收率58%)、参考例2(1b)化合物(4.31g、收率29%)。
参考例2(1a):1H NMR(CDCl 3 )δ:5.62-5.56(m,1H),4.87-4.67(m,1H),4.49-4.23(m,1H),3.07-2.76(m,2H),2.50-2.40(m,1H),2.32-2.20(m,1H),1.45(s,9H)
ESI-MS m/z 332(MH+)
参考例2(1b):1H NMR(CDCl 3 )δ:5.68-5.61(m,1H),4.89-4.70(m,1H),4.69-4.48(m,1H),2.75-2.43(m,3H),1.84-1.66(m,1H),1.45(s,9H)ESI-MS m/z 332(MH+)
参考例2(2a)叔丁基(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸酯
按照参考例1(2a),使用参考例2(1a)化合物代替参考例1(1a)化合物,得到目的物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:6.50-6.45(m,1H),4.76-4.58(m,1H),4.37-4.19(m,1H),2.86-2.70(m,2H),2.37-2.22(m,2H),1.43(s,9H),1.27(s,12H)
ESI-MS m/z 310(MH+)
参考例2(2b)叔丁基(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 环戊-2-烯-1-基)氨基甲酸酯
按照参考例1(2a),使用参考例2(1b)化合物代替参考例1(1a)化合物,得到目的物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:6.42-6.32(m,1H),4.84-4.69(m,1H),4.58-4.39(m,1H),2.58-2.46(m,1H),2.44-2.25(m,2H),1.55-1.47(m,1H),1.44(s,9H),1.27(s,12H)
ESI-MS m/z 310(MH+)
参考例3(S)-叔丁基(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯
参考例3(1)叔丁基((1S,3R)-3-羟基环己基)氨基甲酸酯
将(1R,3S)-3-氨基环己醇(13.7g)溶解在2-甲基四氢呋喃(140mL)中,添加饱和碳酸氢钠水溶液(70mL)后,以0℃添加二碳酸二叔丁酯(27.5g),在室温搅拌16小时。在反应混合物中加水进行稀释之后,利用2-甲基四氢呋喃进行提取。将合并的有机层用饱和氯化铵水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用庚烷对所得到的固体进行清洗,得到目的物(22.7g、收率89%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:4.82-4.58(m,1H),3.82-3.66(m,1H),3.63-3.40(m,1H),2.25-2.11(m,1H),1.93-1.74(m,3H),1.62-1.55(m,1H),1.44(s,9H),1.39-1.04(m,4H)
ESI-MS m/z 216(MH+)
参考例3(2)(S)-叔丁基(3-氧代环己基)氨基甲酸酯
将参考例3(1)化合物(21.5g)用乙酸乙酯(200mL)溶解,依次添加1-甲基-2-氮杂金刚烷N-氧基(166mg)、5M溴化钠水溶液(6mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)之后,以0℃加入10%次氯酸钠水溶液(100mL),搅拌1小时。在反应混合物中以0℃加入10%亚硫酸氢钠水溶液之后,利用10%碳酸钾水溶液进行稀释,利用乙酸乙酯进行萃取。将合并的有机层用1M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、水、饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。用二异丙醚-庚烷对所得到的固体进行清洗,得到目的物(19.4g、收率91%)。1H NMR(CDCl 3 )δ:4.67-4.35(m,1H),4.05-3.77(m,1H),2.76-2.64(m,1H),2.43-2.19(m,3H),2.14-1.92(m,2H),1.79-1.64(m,2H),1.44(s,9H)
ESI-MS m/z 214(MH+)
参考例3(3)(S)-5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
将参考例3(2)化合物(32.3g)的THF(160mL)溶液滴加到冷却至-78℃的双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(60.5g)的THF溶液(780mL)中之后,对反应混合物搅拌30分钟。在反应混合物中以-78℃添加N-苯基-双(三氟甲磺酰亚胺)(64.3g),搅拌30分钟,之后升温至0℃,再搅拌2小时。在反应混合物中加入水、1M氢氧化钠水溶液之后,升温至室温,利用甲苯进行萃取。将合并的有机层用1M硫酸氢钾水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、水、饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。在得到的残渣中加入庚烷,将析出的固体过滤,利用庚烷进行清洗,由此得到目的物(41.6g、收率79%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:5.84-5.74(m,1H),4.74-4.46(m,1H),4.06-3.85(m,1H),2.77-2.63(m,1H),2.38-2.18(m,3H),1.90-1.80(m,1H),1.66-1.53(m,1H),1.45(s,9H)
ESI-MS m/z 346(MH+)
参考例3(4)(S)-叔丁基(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2- 基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯
在参考例3(3)化合物(32.8g)的甲苯(450mL)溶液中依次加入双(频哪醇合)二硼(26.5g)、乙酸钾(28.0g)、三苯膦(2.49g)、PdCl 2 (PPh 3 ) 2 (3.33g),升温至60℃,在氮氛围下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温,添加甲苯,之后,进行硅藻土过滤。将滤液用1M氢氧化钠水溶液、1M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液、水、饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。在得到的残渣中加入乙酸乙酯-庚烷、活性炭,经过1小时后,进行硅藻土过滤。对滤液进行减压浓缩,在得到的残渣中加入环己烷-庚烷,将析出的固体过滤,利用环己烷-庚烷进行清洗,由此得到目的物(21.3g、收率69%)。1H NMR(CDCl 3 )δ:6.56-6.51(m,1H),4.58-4.41(m,1H),3.80-3.62(m,1H),2.58-2.41(m,1H),2.31-2.13(m,2H),1.98-1.77(m,2H),1.54-1.47(m,1H),1.44(s,9H),1.25(s,12H)
ESI-MS m/z 324(MH+)
参考例4(R)-叔丁基(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯
按照参考例3,使用(1S,3R)-3-氨基环己醇代替(1R,3S)-3-氨基环己醇,得到目的物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:6.56-6.51(m,1H),4.58-4.41(m,1H),3.80-3.62(m,1H),2.58-2.41(m,1H),2.3 1-2.13(m,2H),1.98-1.77(m,2H),1.54-1.47(m,1H),1.44(s,9H),1.25(s,12H)
ESI-MS m/z 324(MH+)
参考例5叔丁基(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)环庚-3- 烯-1-基)氨基甲酸酯
按照参考例,使用叔丁基(3-氧代环庚基)氨基甲酸酯代替叔丁基(3-氧代环己基)氨基甲酸酯,得到目的物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:6.91-6.84(m,1H),4.66-4.43(m,1H),3.77-3.58(m,1H),2.52-2.37(m,2H),2.30-2.12(m,2H),2.02-1.90(m,1H),1.61(br s,3H),1.43(s,9H),1.26(s,12H)
ESI-MS m/z 338(MH+)
[表1]
实施例1N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯- 1-基)丙烯酰胺(化合物1)
实施例1(1)叔丁基(3-(5-碘-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶- 4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物1(1))
在4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.97g)、参考例1(2a)化合物(9.39g)、磷酸三钾(10.2g)中加入1,4-二噁烷(66mL)、水(11mL),进行氮取代之后,添加PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 (1.41g),以100℃搅拌14小时。将反应混合物冷却至室温,加入乙酸乙酯和水之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到叔丁基(3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯。所得到的本化合物不进一步进行精制,而用于接下来的反应。
在所得到的本化合物中加入DMF(100mL),冷却至0℃后,加入N-碘琥珀酰亚胺(6.21g),以0℃搅拌30分钟。在反应混合物中添加0.5M亚硫酸氢钠水溶液,利用乙酸乙酯进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到3-(5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯。所得到的本碘体不进一步进行精制,而用于接下来的反应。
在所得到的本碘体中添加DMF(80mL),冷却至0℃后,添加60%氢化钠(1.72g),接着添加对甲苯磺酰氯(4.46g),以0℃搅拌30分钟。在反应混合物中加入冰水后,利用乙酸乙酯对水层进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,得到目的物(7.29g、收率63%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.92(s,1H),8.12(d,J=8.3Hz,2H),7.89(s,1H),7.34(d,J=8.3Hz,2H),6.05-5.92(m,1H),4.76-4.60(m,1H),4.14-3.97(m,1H),2.90-2.75(m,J=15.9Hz,1H),2.41(s,3H),2.49-2.29(m,3H),2.06-1.94(m,1H),1.80-1.64(m,1H),1.44(s,9H)
ESI-MS m/z 595(MH+)
实施例1(2)N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3- 烯-1-基)丙烯酰胺(化合物1)
在化合物1(1)(100mg)、苯基硼酸(41mg)、磷酸三钾(89.2mg)中添加1,4-二噁烷(1.8mL)、水(0.3mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 (12.3mg),以100℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温,加入乙酸乙酯和水之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。
在所得到的残渣中添加THF(1.0mL)和1.0M四丁基氟化铵的THF溶液(1.0mL),以室温搅拌4小时。对反应混合物进行减压浓缩后,利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)进行精制,得到叔丁基(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯。所得到的本化合物不进一步进行精制,而用于接下来的反应。
在所得到的本化合物中添加甲醇(1mL)、4M盐酸的1,4-二噁烷溶液(1mL),以室温搅拌30分钟后,对反应混合物进行减压浓缩。在形成氮氛围下后,加入二氯甲烷(3mL)和二异丙基乙胺(1mL),冷却至0℃。加入丙烯酰氯(0.1mL)并搅拌30分钟后,依次加入氨水溶液、氯仿、甲醇,以室温搅拌1小时。利用氯仿对反应混合物进行萃取,将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到标题化合物(34.2mg、收率59%)。
1H NMR(CDCl 3 -CD 3 OD)δ:8.77(s,1H),7.43-7.27(m,6H),6.29(dd,J=1.7,16.8Hz,1H),6.16(dd,J=10.2,16.8Hz,1H),5.63(dd,J=1.7,10.2Hz,1H),5.50-5.44(m,1H),4.28-4.17(m,1H),2.69-2.46(m,2H),1.94-1.54(m,4H)
ESI-MS m/z 345(MH+)
实施例2N-(3-(5-(噻吩-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己- 3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物2)
按照实施例1(2),使用噻吩-2-基硼酸代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(DMSO-d6)δ:12.48-12.41(m,1H),8.74(s,1H),8.11(d,J=7.7Hz,1H),7.73(d,J=2.2Hz,1H),7.52(dd,J=1.1,5.1Hz,1H),7.10(dd,J=3.3,5.1Hz,1H),6.94(dd,J=1.1,3.3Hz,1H),6.26(dd,J=10.1,17.0Hz,1H),6.10(dd,J=2.2,17.0Hz,1H),5.59(dd,J=2.2,10.1Hz,1H),5.43-5.39(m,1H),4.02-3.87(m,1H),2.95-2.81(m,1H),2.47-2.36(m,1H),1.98-1.74(m,3H),1.53-1.36(m,1H)
ESI-MS m/z 351(MH+)
实施例3N-(3-(5-(噻吩-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己- 3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物3)
按照实施例1(2),使用噻吩-3-基硼酸代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(DMSO-d 6 )δ:12.42-12.14(m,1H),8.72(s,1H),8.10(d,J=7.3Hz,1H),7.67(d,J=2.6Hz,1H),7.55(dd,J=2.9,5.1Hz,1H),7.33(dd,J=1.1,2.9Hz,1H),7.07(dd,J=1.1,5.1Hz,1H),6.27(dd,J=10.3,16.9Hz,1H),6.10(dd,J=2.2,16.9Hz,1H),5.59(dd,J=2.2,10.3Hz,1H),5.36-5.31(m,1H),4.02-3.89(m,1H),2.99-2.88(m,1H),2.47-2.40(m,1H),1.91-1.72(m,3H),1.54-1.41(m,1H)
ESI-MS m/z 351(MH+)
实施例4N-(3-(5-(呋喃-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己- 3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物4)
按照实施例1(2),使用呋喃-3-基硼酸代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.74(s,1H),7.51-7.49(m,1H),7.48-7.46(m,1H),7.35(s,1H),6.43-6.41(m,1H),6.29(dd,J=1.7,17.1Hz,1H),6.19(dd,J=10.0,17.1Hz,1H),5.78-5.72(m,1H),5.65(dd,J=1.7,10.0Hz,1H),4.33-4.22(m,1H),2.71-2.61(m,1H),2.56-2.45(m,1H),2.18-1.96(m,2H),1.91-1.73(m,2H)
ESI-MS m/z 335(MH+)
实施例5N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己- 3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物5)
在化合物1(1)(740mg)和三丁基(呋喃-2-基)锡烷(890mg)中加入DMF(6.2mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (PPh 3 ) 2 (87mg),以100℃加热搅拌2小时。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯进行搅拌之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取后,将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。
将所得到的残渣溶解到THF(5mL)中,加入1.0M四丁基氟化铵的THF溶液(5mL),以室温搅拌1小时。在反应混合物中加入0.067M磷酸缓冲液pH7.4,利用乙酸乙酯进行萃取。将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,叔丁基(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯。
所得到的本化合物不进一步进行精制,而用于接下来的反应。
在所得到的偶联体中添加甲醇(3mL)和4M盐酸的1,4-二噁烷溶液(4mL),以室温搅拌30分钟,对反应混合物进行减压浓缩。在形成氮氛围下后,添加二氯甲烷(6.2mL)和二异丙基乙胺(2.21mL),冷却至0℃。添加丙烯酰氯(0.20mL),搅拌30分钟后,依次加入氨水溶液、氯仿、甲醇,以室温搅拌1小时。利用氯仿对反应混合物进行萃取,将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到标题化合物(348mg、收率84%)。
1H NMR(DMSO-d 6 )δ:8.76(s,1H),7.54-7.44(m,2H),6.51-6.12(m,4H),5.73-5.57(m,2H),4.39-4.27(m,1H),2.80-2.68(m,1H),2.56-2.47(m,1H),2.17-1.60(m,4H)
ESI-MS m/z 335(MH+)
实施例6(R)-N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基) 环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物6)
实施例6(1)(R)-叔丁基(3-(5-碘-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧 啶-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物6(1))
按照实施例1(1),使用参考例4化合物代替参考例1(2a)化合物,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.92(s,1H),8.12(d,J=8.3Hz,2H),8.12(d,J=8.3Hz,2H),7.89(s,1H),7.34(d,J=8.0Hz,1H),6.02-5.96(m,1H),4.76-4.63(m,1H),4.12(s,1H),2.90-2.76(m,1H),2.41(s,3H),2.51-2.27(m,3H),2.06-1.95(m,1H),1.81-1.67(m,1H),1.44(s,9H)
ESI-MS m/z 595(MH+)
实施例6(2)(R)-N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4- 基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物6)
按照实施例5,使用化合物6(1)代替化合物1(1),得到标题化合物。
1H NMR(DMSO-d 6 )δ:12.53-12.38(m,1H),8.74(s,1H),8.13(d,J=7.6Hz,1H),7.79(d,J=2.7Hz,1H),7.69(dd,J=0.7,2.0Hz,1H),6.56(dd,J=2.0,3.2Hz,1H),6.39(dd,J=0.7,3.2Hz,1H),6.27(dd,J=10.0,17.1Hz,1H),6.11(dd,J=2.4,17.1Hz,1H),5.59(dd,J=2.4,10.0Hz,1H),5.52-5.46(m,1H),4.08-3.93(m,1H),2.94-2.83(m,1H),2.47-2.33(m,1H),2.06-1.96(m,J=5.9Hz,2H),1.88-1.79(m,1H),1.59-1.43(m,1H)
ESI-MS m/z 335(MH+)
实施例7(S)-N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基) 环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物7)
实施例7(1)4-氯-5-碘-7-三苯甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物7 (1))
在4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(111g)、三乙胺(84mL)的氯仿(1L)溶液中,在冰冷下加入三苯甲基氯(134g)。以室温搅拌1小时后,对反应混合物进行浓缩。在所得到的残渣中加入甲醇(400mL),过滤分离固体,利用甲醇进行清洗、干燥后,得到标题化合物(204g、收率98%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.27(s,1H),7.39(s,1H),7.31-7.28(m,9H),7.15-7.11(m,6H).
ESI-MS m/z 522(MH+)
实施例7(2)4-氯-5-(呋喃-2-基)-7-三苯甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧 啶(化合物7(2))
在氮氛围下,将化合物7(1)(78.3g)、Pd(PPh 3 ) 4 (8.7g)的1,4-二噁烷(750mL)溶液加热到90℃,用6小时添加2-呋喃基硼酸(21.4g)的1M碳酸钠水溶液(180mL)。对反应混合物进一步以90℃搅拌3小时,之后,在减压下蒸馏除去反应溶剂。加入水(1L),利用乙酸乙酯进行萃取,将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。在所得到的残渣中加入甲醇,过滤分离固体,利用甲醇清洗,在干燥后,得到标题化合物(59.8g、收率86%)。
1H-NMR(CDCl 3 )δ:8.31(s,1H),7.52(s,1H),7.45(d,J=1.8Hz,1H),7.31-7.28(m,9H),7.19-7.15(m,6H),6.72(d,J=3.3Hz,1H),6.48(dd,J=3.3,1.8Hz,1H).
ESI-MS m/z 462(MH+)
实施例7(3)(S)-叔丁基(3-(5-(呋喃-2-基)-7-三苯甲基-7H-吡咯并 [2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物7(3))
在氮氛围下,将化合物7(2)(13.4g)、Pd(PPh 3 ) 4 (1.68g)、参考例3化合物(10.32g)、2M碳酸钠水溶液(32mL)的1,4-二噁烷(150mL)溶液以105℃搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温,加入乙酸乙酯和水后进行分配,利用饱和食盐水对有机层进行清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,得到标题化合物(15.69g、收率87%)。
1H-NMR(CDCl 3 )δ:8.52(s,1H),7.53(s,1H),7.36(s,1H),7.32-7.26(m,9H),7.22-7.17(m,6H),6.43(dd,J=2.9,1.8Hz,1H),6.29(d,J=3.3Hz,1H),5.72-5.69(m,1H),4.85(d,J=8.1Hz,1H),4.04(s,1H),2.98-2.90(m,1H),2.47-2.37(m,1H),2.11-1.94(m,2H),1.86-1.78(m,1H),1.72-1.64(m,1H),1.46(s,9H).
ESI-MS m/z 623(MH+)
实施例7(4)(S)-3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环 己-3-烯胺(化合物7(4))
将化合物7(3)(12.3g)、2-丙醇(120mL)、2M甲磺酸水溶液(50mL)的混合溶液在85℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温,在加水后,在减压下蒸馏除去有机溶剂。利用乙酸乙酯对水层进行清洗,利用5M氢氧化钠使水层形成碱性,利用氯仿-乙醇(4/1)混合溶剂进行萃取。用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。收集所得到的固体,利用乙酸乙酯清洗、干燥后,得到标题化合物(4.32g、收率78%)。
1H-NMR(CD 3 OD)δ:8.69(s,1H),7.62(s,1H),7.56(dd,J=1.8,0.7Hz,1H),6.49(dd,J=3.1,2.0Hz,1H),6.39(d,J=3.3Hz,1H),5.64-5.61(m,1H),3.11-3.03(m,1H),2.85-2.78(m,1H),2.30-2.21(m,1H),2.11-2.05(m,2H),1.90-1.83(m,1H),1.53-1.43(m,1H).
ESI-MS m/z 281(MH+)
实施例7(5)(S)-N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4- 基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物7)
在化合物7(4)(2.76g)、乙醇(100mL)、二异丙基乙胺(2.01mL)的溶液中,在冰冷下,用10分钟添加2M丙烯酰氯的乙腈溶液(5.17mL)。在反应液中加水后,在减压下蒸馏除去有机溶剂,将析出的固体过滤分离,利用水和乙酸乙酯清洗。干燥后,得到标题化合物(3.03g、收率92%)。
1H-NMR(DMSO-d 6 )δ:12.46(s,1H),8.73(s,1H),8.12(d,J=7.3Hz,1H),7.78(d,J=2.6Hz,1H),7.68(dd,J=1.8,0.7Hz,1H),6.55(dd,J=3.3,1.8Hz,1H),6.38(d,J=3.3Hz,1H),6.25(dd,J=17.2,9.9Hz,1H),6.09(dd,J=17.0,2.4Hz,1H),5.58(dd,J=10.1,2.4Hz,1H),5.50-5.47(m,1H),4.04-3.94(m,1H),2.86(dd,J=16.9,5.1Hz,1H),2.46-2.38(m,1H),2.02-1.96(m,2H),1.86-1.79(m,1H),1.55-1.44(m,1H).
ESI-MS m/z 335(MH+)
实施例8N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环戊- 3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物8)
实施例8(1)叔丁基(3-(5-碘-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶- 4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物8(1))
按照实施例1(1),使用参考例2(2a)化合物代替参考例1(2a),由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.94(s,1H),8.12(d,J=8.3Hz,2H),7.34(d,J=8.3Hz,2H),7.27(s,1H),6.19-6.14(m,1H),4.97-4.86(m,1H),4.63-4.46(m,1H),3.29-3.19(m,1H),3.15-3.01(m,1H),2.72(d,J=16.3Hz,1H),2.58-2.48(m,1H),2.41(s,3H),1.45(s,9H)
ESI-MS m/z 581(MH+)
实施例8(2)N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环 戊-3-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物8)
按照实施例5,使用化合物8(1)代替化合物1(1),由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.78(s,1H),7.54(s,1H),7.47-7.44(m,1H),6.47(dd,J=2.0,3.2Hz,1H),6.34-6.26(m,2H),6.15(dd,J=10.2,17.1Hz,1H),5.65(dd,J=1.6,10.1Hz,1H),5.63-5.60(m,1H),4.75-4.65(m,1H),3.22-3.08(m,1H),2.87-2.76(m,2H),2.46-2.36(m,1H)
ESI-MS m/z 321(MH+)
实施例9N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环戊-3-烯- 1-基)丙烯酰胺(化合物9)
实施例9(1)4-氯-5-碘-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合物9 (1))
在4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(10g)中加入DMF(100mL),冷却至0℃后,添加60%氢化钠(2.15g),接着添加对甲苯磺酰氯(8.19g),以0℃搅拌1小时。在反应混合物中加入冰水后,利用乙酸乙酯对水层进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,得到目的物(14.1g、收率91%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.75(s,1H),8.10(d,J=8.5Hz,2H),7.95(s,1H),7.35(d,J=8.5Hz,2H),2.42(s,3H))
ESI-MS m/z 434(MH+)
实施例9(2)4-氯-5-苯基-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(化合 物9(2))
在化合物9(1)(1.71g)、苯基硼酸(530mg)、磷酸三钾(1.67g)中添加1,4-二噁烷(18mL)、水(3mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 (280mg),以60℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温,加入乙酸乙酯和水之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,得到目的物(1.21g、84%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.79(s,1H),8.14(d,J=8.5Hz,2H),7.76(s,1H),7.50-7.41(m,5H),7.36(d,J=8.5Hz,2H),2.43(s,3H)
ESI-MS m/z 384(MH+)
实施例9(3)N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环戊-3- 烯-1-基)丙烯酰胺(化合物9)
在化合物9(2)(125mg)、参考例2(2a)化合物(127mg)、磷酸三钾(181mg)中添加1,4-二噁烷(1.8mL)、水(0.3mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 (25mg),以100℃搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温,加入乙酸乙酯和水之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。
在得到的残渣中添加THF(1mL)和1.0M四丁基氟化铵的THF溶液(1mL),以室温搅拌1小时。对反应混合物进行减压浓缩后,利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)进行精制,得到叔丁基(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸酯。
在得到的本化合物中添加甲醇(2mL)和4M盐酸的1,4-二噁烷溶液(2mL),以室温搅拌30分钟,对反应混合物进行减压浓缩。在形成氮氛围下后,加入二氯甲烷(3.0mL)和二异丙基乙胺(1.0mL),冷却至0℃。加入丙烯酰氯(0.1mL),搅拌30分钟后,依次加入氨水溶液、氯仿、甲醇,以室温搅拌1小时。利用氯仿对反应混合物进行萃取,将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到标题化合物(74.7mg、收率60%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.78(s,1H),7.42-7.23(m,6H),6.30-6.21(m,1H),6.18-6.04(m,1H),5.68-5.59(m,1H),5.41-5.34(m,1H),4.63-4.51(m,1H),3.03-2.92(m,1H),2.81-2.71(m,1H),2.58-2.46(m,1H),2.28-2.17(m,1H)
ESI-MS m/z 331(MH+)
实施例10N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环戊-2-烯- 1-基)丙烯酰胺(化合物10)
按照实施例9(3),使用参考例2(2b)化合物代替参考例2(2a)化合物,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.79(s,1H),7.59-7.18(m,6H),6.23(dd,J=1.5,17.1Hz,1H),6.01(dd,J=10.5,17.1Hz,1H),5.65(dd,J=1.5,10.5Hz,1H),5.41-5.34(m,1H),4.95-4.75(m,1H),2.87-2.65(m,2H),2.47-2.31(m,1H),1.72-1.57(m,1H)
ESI-MS m/z 331(MH+)
实施例11N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环庚-3-烯- 1-基)丙烯酰胺(化合物11)
按照实施例9(3),使用参考例5化合物代替参考例2(2a)化合物,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.75(s,1H),7.44-7.26(m,6H),6.24-6.16(m,2H),5.90-5.82(m,1H),5.65-5.58(m,1H),4.18-4.08(m,1H),2.66-2.59(m,2H),2.14-1.76(m,4H),1.49-1.38(m,2H)
ESI-MS m/z 359(MH+)
实施例12N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2-烯- 1-基)丙烯酰胺(化合物12)
实施例12(1)叔丁基(3-(5-碘-7-甲苯磺酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶- 4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸酯(化合物12(1))
在4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(3.89g)、参考例1(2b)(12.3g)、磷酸三钾(13.4g)中添加1,4-二噁烷(78mL)、水(13mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 (1.85g),以100℃搅拌14小时。将反应混合物冷却至室温,加入乙酸乙酯和水之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到叔丁基(3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸酯。
在得到的本化合物中添加DMF(50mL),冷却至0℃后,加入N-碘琥珀酰亚胺(4.03g),以0℃搅拌30分钟。在反应混合物中加入0.5M亚硫酸氢钠水溶液,利用乙酸乙酯进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到叔丁基(3-(5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸酯。
在得到的上述碘体中添加DMF(50mL),冷却至0℃后,添加60%氢化钠(1.01g),接着添加对甲苯磺酰氯(2.63g),以0℃搅拌30分钟。在反应混合物中加入冰水后,利用水层对乙酸乙酯进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,得到目的物(2.41g、收率16%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.94(s,1H),8.12(d,J=8.3Hz,2H),7.90(s,1H),7.34(d,J=8.3Hz,2H),5.88-5.79(m,1H),4.78-4.64(m,1H),4.54-4.36(m,1H),2.58-2.28(m,5H),2.11-1.97(m,1H),1.89(br.s.,2H),1.77-1.64(m,1H),1.43(s,9H)
ESI-MS m/z 595(MH+)
实施例12(2)N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2- 烯-1-基)丙烯酰胺(化合物12)
在化合物12(1)(30mg)、苯基硼酸(10mg)、磷酸三钾(32mg)中添加1,4-二噁烷(1.8mL)、水(0.3mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 (7.4mg),以100℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温,加入乙酸乙酯和水之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。
在得到的残渣中添加THF(1.0mL)和1.0M四丁基氟化铵的THF溶液(1.0mL),以室温搅拌4小时。对反应混合物进行减压浓缩后,利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)进行精制,得到叔丁基(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸酯。
在得到的本化合物中添加甲醇(1mL)、4M盐酸的1,4-二噁烷溶液(1mL),以室温搅拌30分钟后,对反应混合物进行减压浓缩。在形成氮氛围下后,加入二氯甲烷(1mL)和二异丙基乙胺(0.1mL),冷却至0℃。加入丙烯酰氯(0.012mL)并搅拌30分钟后,依次加入氨水溶液、氯仿、甲醇,以室温搅拌1小时。利用氯仿对反应混合物进行萃取,将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到标题化合物(18mg)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.81(s,1H),7.50-7.28(m,6H),6.22(dd,J=1.2,17.0Hz,1H),5.92(dd,J=10.4,17.0Hz,1H),5.63(dd,J=1.3,10.4Hz,1H),5.36-5.26(m,1H),4.41-4.30(m,1H),2.74-2.56(m,1H),2.46-2.27(m,1H),1.98-1.32(m,4H)
ESI-MS m/z 345(MH+)
实施例13N-(3-(5-(噻吩-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环 己-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物13)
按照实施例12(2),使用噻吩-2-基硼酸代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.83-8.53(m,1H),7.47-6.76(m,4H),6.28-5.84(m,2H),5.68-5.28(m,2H),4.46-4.16(m,1H),2.58-2.11(m,2H),1.93-1.26(m,4H)
ESI-MS m/z 351(MH+)
实施例14N-(3-(5-(噻吩-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环 己-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物14)
按照实施例12(2),使用噻吩-3-基硼酸代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.76(s,1H),7.43(dd,J=2.9,4.9Hz,1H),7.40(d,J=6.6Hz,1H),7.24-7.22(m,1H),7.08(dd,J=1.0,4.9Hz,1H),6.28-6.21(m,1H),6.15-6.06(m,1H),5.68-5.62(m,1H),5.53-5.48(m,1H),4.46-4.34(m,1H),2.52-2.24(m,2H),2.05-1.39(m,4H)
ESI-MS m/z 351(MH+)
实施例15N-(3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环 己-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物15)
按照实施例5,使用化合物12(1)代替化合物1(1),由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.78(s,1H),7.54(dd,J=0.7,1.9Hz,1H),7.52(s,1H),6.55(dd,J=1.9,2.9Hz,1H),6.39(dd,J=0.7,2.9Hz,1H),6.25(dd,J=1.6,17.0Hz,1H),6.09(dd,J=10.5,17.1Hz,1H),5.64(dd,J=1.5,10.2Hz,1H),5.57-5.53(m,1H),4.57-4.46(m,1H),2.54-2.40(m,2H),2.03-1.72(m,3H),1.67-1.52(m,1H)
ESI-MS m/z 335(MH+)
实施例16N-(3-(5-(呋喃-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环 己-2-烯-1-基)丙烯酰胺(化合物16)
按照实施例9,使用呋喃-3-基硼酸代替苯基硼酸,并使用参考例1(2b)代替参考例2(2a),由此得到标题化合物。
ESI-MS m/z 335(MH+)
比较例1N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯- 1-基)甲基丙烯酰胺
按照实施例1(2),使用甲基丙烯酰氯代替丙烯酰氯,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.76(s,1H),7.46-7.21(m,6H),5.73-5.64(m,1H),5.49-5.40(m,1H),5.38-5.32(m,1H),4.29-4.11(m,1H),2.79-2.45(m,2H),2.01-1.93(m,3H),1.92-1.77(m,1H),1.76-1.55(m,3H)
ESI-MS m/z 359(MH+)
比较例2(E)-N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3- 烯-1-基)巴豆-2-酰胺
在实施例1(2)中得到的叔丁基(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸酯(50mg)中添加甲醇(1mL)和4M盐酸的1,4-二噁烷溶液(1mL),以室温搅拌30分钟,对反应混合物进行减压浓缩。在形成氮氛围下后,添加二氯甲烷(2mL)和二异丙基乙胺(0.2mL),冷却至0℃。加入(E)-巴豆-2-酰氯(0.02mL),搅拌30分钟后,依次加入氨水溶液、氯仿、甲醇,以室温搅拌1小时。利用氯仿对反应混合物进行萃取,将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到标题化合物(41.1mg、收率90%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.82-8.70(m,1H),7.50-7.21(m,6H),6.95-6.70(m,1H),5.94-5.79(m,1H),5.53-5.39(m,1H),4.30-4.07(m,1H),2.75-2.41(m,2H),1.97-1.53(m,7H)
ESI-MS m/z 359(MH+)
比较例3N-(3-(5-(3-氰基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己- 3-烯-1-基)丙烯酰胺
按照实施例1(2),使用(3-氰基苯基)硼酸代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.80(s,1H),7.70-7.43(m,5H),6.34-6.09(m,2H),5.65(d,J=10.0Hz,1H),5.51-5.38(m,1H),4.35-4.14(m,1H),2.82-2.66(m,1H),2.62-2.47(m,1H),2.01-1.59(m,4H)
ESI-MS m/z 370(MH+)
比较例4N-(3-(5-(对甲苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己-3- 烯-1-基)丙烯酰胺
按照实施例1(2),使用对甲苯基硼酸代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.75(s,1H),7.36(s,1H),7.25-7.12(m,4H),6.29(dd,J=1.9,17.1Hz,1H),6.17(dd,J=10.2,17.1Hz,1H),5.64(dd,J=1.9,10.2Hz,1H),5.49(br.S.,1H),4.27-4.09(m,1H),2.67-2.43(m,2H),2.40(s,3H),1.99-1.50(m,4H)
ESI-MS m/z 359(MH+)
比较例5N-(3-(5-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己- 3-烯-1-基)丙烯酰胺
按照实施例1(2),使用(3-氟苯基)硼酸代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.77(s,1H),7.44(s,1H),7.44-7.35(m,1H),7.17-6.98(m,3H),6.34-6.15(m,2H),5.70-5.63(m,1H),5.56-5.48(m,1H),4.28-4.16(m,1H),2.77-2.46(m,2H),2.02-1.61(m,4H)
ESI-MS m/z 363(MH+)
比较例6N-(3-(5-(吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己- 3-烯-1-基)丙烯酰胺
按照实施例1(2),使用3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。1H NMR(CDCl 3 )δ:8.81(s,1H),8.54-8.49(m,2H),7.72-7.67(m,1H),7.48(s,1H),7.43-7.39(m,1H),6.31(dd,J=2.2,17.1Hz,1H),6.23(dd,J=9.5,17.1Hz,1H),5.65(dd,J=2.2,9.5Hz,1H),5.42-5.36(m,1H),4.33-4.23(m,1H),2.89-2.78(m,1H),2.57-2.47(m,1H),1.86-1.65(m,4H)ESI-MS m/z 346(MH+)
比较例7N-(3-(5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧 啶-4-基)环己-3-烯-1-基)丙烯酰胺
按照实施例1(2),使用1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(DMSO-d 6 )δ:12.23-12.19(m,1H),8.69(s,1H),8.10(d,J=7.3Hz,1H),7.62(s,1H),7.55(d,J=2.6Hz,1H),7.37(s,1H),6.27(dd,J=9.9,16.9Hz,1H),6.11(dd,J=2.2,16.9Hz,1H),5.59(dd,J=2.2,9.9Hz,1H),5.44-5.36(m,1H),4.04-3.92(m,1H),3.87(s,3H),2.94-2.83(m,1H),2.47-2.38(m,1H),2.05-1.78(m,3H),1.59-1.43(m,1H)
ESI-MS m/z 349(MH+)
比较例8N-(3-(5-(嘧啶-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环己- 3-烯-1-基)丙烯酰胺
按照实施例5,使用2-(三丁基锡烷基)嘧啶代替三丁基(呋喃-2-基)锡烷,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.82(s,1H),8.82(d,J=5.1Hz,2H),8.04(s,1H),7.26(t,J=5.1Hz,1H),6.31(dd,J=2.2,17.1Hz,1H),6.22(dd,J=9.8,17.1Hz,1H),5.66(dd,J=2.2,9.8Hz,1H),5.53-5.47(m,1H),4.41-4.32(m,1H),3.02-2.93(m,1H),2.65-2.55(m,1H),2.09-1.77(m,4H)
ESI-MS m/z 347(MH+)
比较例9N-(3-(5-(苯并呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)环 己-3-烯-1-基)丙烯酰胺
按照实施例1(2),使用苯并呋喃-2-基硼酸代替苯基硼酸,由此得到标题化合物。
1H NMR(CDCl 3 )δ:8.81(s,1H),7.73(s,1H),7.63-7.55(m,1H),7.51(d,J=8.1Hz,1H),7.38-7.22(m,2H),7.19(d,J=7.3Hz,1H),6.74(s,1H),6.31(dd,J=1.6,17.0Hz,1H),6.16(dd,J=10.1,17.0Hz,1H),5.79-5.75(m,1H),5.64(dd,J=1.6,10.1Hz,1H),4.41-4.32(m,1H),2.92-2.82(m,1H),2.66-2.54(m,1H),2.02-1.91(m,1H),1.89-1.61(m,3H)
ESI-MS m/z 385(MH+)
比较例10 4-(环己-1-烯-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
在4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(30mg)、2-(环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(48.8mg)、磷酸三钾(124mg)中添加1,4-二噁烷(2.0mL)、水(0.3mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 (28.5mg),以100℃搅拌14小时。将反应混合物冷却至室温,加入乙酸乙酯和水之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,得到目的物(15mg、收率38%)。
1H NMR(CDCl 3 )δ:9.90-9.64(m,1H),8.83(s,1H),7.31(dd,J=2.4,3.7Hz,1H),6.91-6.85(m,1H),6.74(dd,J=2.0,3.7Hz,1H),2.80-2.64(m,2H),2.43-2.27(m,2H),1.93-1.71(m,4H)
ESI-MS m/z 200(MH+)
比较例11
比较例11(1a)叔丁基((1S,3R)-3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d] 嘧啶-4-基)环己基)氨基甲酸酯
比较例11(1b)叔丁基((1S,3S)-3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d] 嘧啶-4-基)环己基)氨基甲酸酯
在4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.0g)、参考例3化合物(5.1g)、磷酸三钾(6.9g)中添加1,4-二噁烷(72mL)、水(12mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (dppf)CH 2 Cl 2 (1.4g),以100℃搅拌14小时。将反应混合物冷却至室温,加入氯仿和水之后,进行硅藻土过滤。利用氯仿滤液进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰丙酮)对得到的残渣进行精制,得到对应的偶联体。所得到的偶联体不进一步进行精制,而用于接下来的反应。
在得到的偶联体中添加THF(200mL)和10%钯碳催化剂(2.0g),在置换成氢氛围下之后,以室温搅拌14小时。对反应混合物进行硅藻土过滤,利用THF清洗之后,对滤液进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰丙酮)对得到的残渣进行精制,得到对应的偶联体(3.12g、收率76%)。
ESI-MS m/z 317(MH+)
在得到的偶联体(3.04g)中添加DMF(30mL),冷却至0℃后,加入N-碘琥珀酰亚胺(2.59g),以0℃搅拌30分钟。在反应混合物中加入0.5M亚硫酸氢钠水溶液,利用乙酸乙酯进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰丙酮)对得到的残渣进行精制,得到对应的碘体。所得到的碘体不进一步进行精制,而用于接下来的反应。
在所得到的碘体中添加DMF(36mL),冷却至0℃后,加入60%氢化钠(0.72g),接着加入对甲苯磺酰氯(1.86g),以0℃搅拌30分钟。在反应混合物中加入冰水后,利用乙酸乙酯对水层进行萃取,将合并的有机层用水清洗,接着用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,得到对应的甲苯磺酰体(4.22g、收率74%)。
ESI-MS m/z 597(MH+)
在甲苯磺酰体(4.20g)和三丁基(呋喃-2-基)锡烷(5.03g)中添加DMF(42mL),进行氮取代之后,加入PdCl 2 (PPh 3 ) 2 (494mg),以100℃加热搅拌30分钟。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯,在搅拌之后,进行硅藻土过滤。利用乙酸乙酯对滤液进行萃取后,将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰乙酸乙酯)对得到的残渣进行精制,分别得到比较例11(1a)(1.71g、收率45%)、比较例11(1b)(1.99g、收率53%)。
比较例11(1a)1H NMR(CDCl 3 )δ:8.94(s,1H),8.13(d,J=8.3Hz,2H),7.80(s,1H),7.63(s,1H),7.34(d,J=8.3Hz,2H),6.55-6.51(m,2H),4.43(d,J=7.6Hz,1H),3.55-3.37(m,1H),3.09(tt,J=3.2,11.7Hz,1H),2.41(s,3H),2.15-1.94(m,2H),1.88-1.53(m,3H),1.42(s,9H),1.50-1.20(m,2H),1.18-1.02(m,1H)
ESI-MS m/z 537(MH+)
比较例11(1b)1H NMR(CDCl 3 )δ:8.96(s,1H),8.15(d,J=8.3Hz,2H),7.81(s,1H),7.70(s,1H),7.35(d,J=8.3Hz,2H),6.61-6.54(m,2H),4.57(d,J=6.3Hz,1H),4.06-3.90(m,1H),3.25-3.03(m,1H),2.42(s,3H),1.99-1.88(m,1H),1.47(s,9H),1.88-1.39(m,7H)
ESI-MS m/z 537(MH+)
比较例11(a)N-((1S,3R)-3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧 啶-4-基)环己基)丙烯酰胺
将比较例11(1a)(1.70g)溶解到THF(8.5mL)中,添加1.0M四丁基氟化铵的THF溶液(6.3mL),以室温搅拌1小时。在反应混合物中添加0.067M磷酸缓冲液pH7.4,利用乙酸乙酯进行萃取。将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(己烷︰丙酮)对得到的残渣进行精制,得到对应的脱甲苯磺酰体。所得到的脱甲苯磺酰体不进一步进行精制,而用于接下来的反应。
在所得到的脱甲苯磺酰体中添加甲醇(10mL)和4M盐酸的1,4-二噁烷溶液(10mL),以室温搅拌40分钟,对反应混合物进行减压浓缩。在形成氮氛围下后,加入二氯甲烷(20mL)和二异丙基乙胺(5.28mL),冷却至0℃。加入丙烯酰氯(0.49mL)并搅拌30分钟后,依次加入氨水溶液、氯仿、甲醇,以室温搅拌1小时。利用氯仿对反应混合物进行萃取,将合并的有机层用饱和食盐水清洗,用无水硫酸钠干燥后,进行减压浓缩。利用硅胶色谱法(氯仿︰甲醇)对所得到的残渣进行精制,得到标题化合物(657mg、收率62%)。
1H NMR(DMSO-d 6 )δ:12.38(br s,1H),8.71(s,1H),8.07(d,J=7.8Hz,1H),7.84(dd,J=0.7,1.8Hz,1H),7.74(d,J=2.7Hz,1H),6.62(dd,J=1.8,3.3Hz,1H),6.58(dd,J=0.7,3.3Hz,1H),6.18(dd,J=10.0,16.8Hz,1H),6.06(dd,J=2.4,16.8Hz,1H),5.55(dd,J=2.4,10.0Hz,1H),3.75-3.56(m,1H),3.24-3.10(m,1H),2.02-1.62(m,5H),1.47(dt,J=9.4,12.3Hz,1H),1.34-1.06(m,2H)
ESI-MS m/z 337(MH+)
比较例11(b)N-((1S,3S)-3-(5-(呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧 啶-4-基)环己基)丙烯酰胺
按照比较例11(a),使用比较例11(1b)代替比较例11(1a),由此得到标题化合物。
1H NMR(DMSO-d 6 )δ:12.39(br s,1H),8.72(s,1H),7.78(d,J=6.1Hz,1H),7.72(d,J=2.4Hz,1H),7.70(dd,J=0.7,1.8Hz,1H),6.54(dd,J=1.8,3.2Hz,1H),6.52(dd,J=0.7,3.2Hz,1H),6.35(dd,J=10.1,17.1Hz,1H),6.04(dd,J=2.3,17.1Hz,1H),5.56(dd,J=2.3,10.1Hz,1H),4.19-4.03(m,1H),3.76-3.56(m,1H),2.03-1.85(m,2H),1.73-1.46(m,6H)
ESI-MS m/z 337(MH+)
比较例12N-(3-(5-苯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯基)丙烯酰胺
按照国际公开第2013/085802号中记载的方法,得到标题化合物。ESI-MS m/z 341(MH+)
[表2-1]
[表2-2]
[表3-1]
[表3-2]
试验例
使用以下的试验法对本发明的化合物进行评价。
试验例1各种JAK激酶活性抑制作用试验(in vitro)
1)JAK1激酶抑制活性测定
测定本发明化合物对JAK1激酶活性的抑制活性。
该抑制活性测定的材料中的底物肽和激酶蛋白质如下所述获得。就底物肽而言,购入QSS AssistTM JAK1-MSA检测试剂盒用底物肽(Carna Biosciences,Inc.)。就激酶蛋白质而言,购入精制重组人JAK1蛋白质(Carna Biosciences,Inc.)。
抑制活性测定方法如下所述。首先,将本发明化合物分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解之后,用DMSO制备系列稀释。接着,在化合物的系列稀释溶液(激酶反应时的DMSO的终浓度为5.0%)或DMSO(终浓度为5.0%)、和激酶反应用缓冲液(20mM HEPES(pH7.5)、2mM二硫苏糖醇、0.01%TritonX-100)中,将含有底物肽(终浓度为1μM)、氯化镁(终浓度为5mM)、ATP(终浓度为75μM)的溶液进行混合,再加入JAK1蛋白质,在25℃下孵育120分钟,进行激酶反应。向其中以终浓度达到30mM的方式加入EDTA,使反应停止。最后,利用LabChip EZReader II(Perkin Elmer Corp.)将未磷酸化的底物肽(S)和被磷酸化的肽(P)利用微流控毛细管电泳进行分离并检测。由S和P各自的峰的高度求出磷酸化反应量,将能够抑制50%磷酸化反应的化合物浓度定义为IC 50 值(nM),示于以下的表中。
2)JAK2激酶抑制活性测定
测定本发明化合物对JAK2激酶活性的抑制活性。
该抑制活性测定的材料中的底物肽和激酶蛋白质如下所述获得。就底物肽而言,购入FL-Peptide 22(Perkin Elmer Corp.)。就激酶蛋白质而言,购入精制重组人JAK2蛋白质(Carna Biosciences,Inc.)。
抑制活性测定方法如下所述。首先,通过与记载于JAK1的部分的方法同样的方法制备本发明化合物的系列稀释。在该系列稀释溶液(激酶反应时的DMSO的终浓度为5.0%)或DMSO(终浓度为5.0%)、和激酶反应用缓冲液(15mM Tris(pH7.5)、2mM二硫苏糖醇、0.01%Tween20)中,将含有底物肽(终浓度为1μM)、氯化镁(终浓度为10mM)、ATP(终浓度为10μM)的溶液进行混合,再加入JAK2蛋白质,在25℃下孵育80分钟,进行激酶反应。向其中以终浓度达到30mM的方式加入EDTA,使反应停止。反应停止后,通过与记载于JAK1的部分的方法同样的方法进行测定和数据分析。
3)JAK3激酶抑制活性测定
测定本发明化合物对JAK3激酶活性的抑制活性。
该抑制活性测定的材料中的底物肽和激酶蛋白质如下所述获得。就底物肽而言,购入QSS AssistTM JAK3-MSA检测试剂盒用底物肽(Carna Biosciences,Inc.)。就激酶蛋白质而言,购入精制重组人JAK3蛋白质(Carna Biosciences,Inc.)。
抑制活性测定方法如下所述。首先,通过与记载于JAK1的部分的方法同样的方法制备本发明化合物的系列稀释。在该系列稀释溶液(激酶反应时的DMSO的终浓度为5.0%)或DMSO(终浓度为5.0%)、和激酶反应用缓冲液(20mM HEPES(pH7.5)、2mM二硫苏糖醇、0.01%TritonX-100)中,将含有底物肽(终浓度为1μM)、氯化镁(终浓度为5mM)、ATP(终浓度为5μM)的溶液进行混合,再加入JAK3蛋白质,在25℃下孵育80分钟,进行激酶反应。向其中以终浓度达到30mM的方式加入EDTA,使反应停止。反应停止后,通过与记载于JAK1的部分的方法同样的方法进行测定和数据分析。
将结果示于以下的表中。
[表4]
根据以上结果可以确认,本发明化合物的JAK3抑制活性非常强,并且,对于与JAK1或JAK2的选择性而言,IC 50 值为100倍以上。相对于此,比较例化合物1、2和8的JAK3抑制活性与本发明化合物相比减弱20倍以上。同样,比较例化合物10也减弱100倍以上,未能确认与JAK1、JAK2的选择性。
试验例2人末梢血单核细胞(PBMC)增殖试验
测定本发明化合物对于由JAK3引起的人PBMC的IL-2依赖增殖反应的抑制活性(Arthritis Rheum.2010;62(8):2283-93)。
使用加入有10μg/mL的PHA-M(Sigma公司)的培养基(含有10%的人血清AB型(MPBiomedicals公司)的RPMI-1640(Sigma公司)),将制成1×106细胞/mL的密度的人PBMC(C.T.L.公司)在37℃下在含有5%二氧化碳的培养器中培养3天。用RPMI-1640清洗4次后,加入培养基(含有10%的人血清AB型的RPMI-1640),由此制备了细胞悬浮液。在96孔U底微孔板的各孔中添加各1×104个细胞和进行了阶段稀释的本发明化合物,在37℃下在含有5%二氧化碳的培养器中培养30分钟。培养后,以达到2ng/mL的终浓度的方式加入重组人IL-2(Peprotech公司),在37℃下在含有5%二氧化碳的培养器中培养2天(1×104个/100μl/各孔)。培养后,在室温下放置30分钟,添加100μL的CellTiter-Glo Luminescent CellViability Assay(Promega公司)并进行搅拌。放置10分钟后,用酶标仪(TECAN公司)测定来自各孔的活细胞的发光量。算出对于IL-2刺激引起的细胞增殖的抑制率,将能够抑制50%细胞增殖的化合物浓度定义为IC50值(nM),示于以下的表中。
[表5]
根据以上结果,本发明化合物的人PBMC增殖抑制的IC 50 值约为100nM以下,可以确认非常强的增殖抑制。相对于此,比较例化合物的IC 50 值减弱至1000nM以上。
试验例3口服吸收性的评价
将本发明化合物悬浮或溶解于0.1N HCl、0.5%HPMC水溶液中,对BALB/cA小鼠进行口服给药。口服给药后,在0.5、1、2、4和6小时后进行眼底采血,得到血浆。利用LCMS测定得到的血浆中的化合物浓度,求出血中浓度-时间曲线下面积(AUC)的值。结果,本发明化合物表现出良好的口服吸收性。
试验例4小鼠IL-2诱导产生IFN-γ试验
测得本发明化合物和比较例化合物对于由JAK3引起的小鼠IL-2诱导产生IFN-γ的抑制活性(Arthritis Rheum.2010;62(8):2283-93,Inflammation Research 2015;64(1):41-51)。
将7周龄雄性的BALB/c小鼠(日本Charles River)分成5组(每组6只),称作载体(Vehicle)组、化合物7 1mpk组、化合物7 3mpk组、比较例12 1mpk组、比较例12 3mpk组。对1mpk组和3mpk组分别口服给予化合物7或比较例12 1mg/kg、3mg/kg,30分钟后,对载体组、化合物7 1mpk组、化合物7 3mpk组、比较例12 1mpk组、比较例12 3mpk组分别以200μL的容量腹腔内给予IFN-γ捕捉抗体(BD Biosciences公司、10μg/小鼠)和重组人IL-2(Peprotech公司、10μg/小鼠)的混合溶液。在给予IL-2的3小时后,对于全部5组进行采血,利用BD In Vivo Capture Assay for Mouse IFN-γ(BD Biosciences公司)测定血清中的IFN-γ浓度。
通过IFN-γ的相对量(%)=(各组的IFN-γ浓度)×100/(载体组的IFN-γ浓度)的计算式,算出由IL-2刺激产生的IFN-γ的相对量,在图1(平均值±标准误差:对于vs载体组,为Dunnett检验,*:p<0.05、***:p<0.001;对于vs比较例12(3mpk),为Student t检验,##:p<0.01)中表示。
根据以上结果,本发明化合物在体内在统计学上表现出有意义的IFN-γ产生抑制。而比较例12的化合物未表现出本发明化合物可见的有意义的IFN-γ产生抑制作用。
试验例5对于类风湿性关节炎的治疗效果
使用作为类风湿性关节炎的小鼠实验模型的骨胶原诱发关节炎(Collagen-Induced Arthritis)。将关节炎的临床症状评分,以评分为指标确认本发明化合物的口服给药的作用。在7周龄雄性的DBA/1小鼠(日本Charles River)中将牛Ⅱ型胶原蛋白溶液(胶原蛋白技术研修会)4mg/mL和费氏完全佐剂(DIFCO)的等量混合溶液(乳液)10μL/body进行背部皮内注射(初次免疫)。21天后,将牛Ⅱ型胶原蛋白溶液(胶原蛋白技术研修会)4mg/mL和费氏不完全佐剂(DIFCO)的等量混合溶液(乳液)10μL/body在尾根部进行皮内注射(追加免疫),诱导关节炎反应(Arthritis Rheum 2010-62(8):2283-93)。本发明化合物和托法替尼从追加免疫的实施日(设为Day0)的8天后,以50mg/kg(50mpk)1天2次连续进行15天的口服给药。泼尼松龙从追加免疫的实施日的8日后,以0.3mg/kg(3mpk)1天1次连续进行15天的口服给药。在Day8、Day11、Day14、Day17、Day22通过肉眼对关节炎的临床症状进行评分,确认本发明化合物的作用。对一个肢体的临床症状分别评价分数(0:无变化、1:1个手指肿胀、2:2个以上手指肿胀、3:指甲肿胀、4:全部手指肿胀且肿胀扩及到手腕脚踝),将四肢的合计设为个体的分数(最高16分)。
结果,本发明化合物对于类风湿性关节炎显示出优异的治疗效果。
通过临床症状评分的平均值(四肢合计)通过以下的计算式算出,示于图2。
临床症状评分的平均值(四肢合计)=右前肢的临床症状评分的平均值+左前肢的临床症状评分的平均值+右后肢的临床症状评分的平均值+左后肢的临床症状评分的平均值
试验例6对于多发性硬化症的治疗效果
使用作为多发性硬化症的小鼠实验模型的实验性自身免疫性脑脊髄炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis)。对于8周龄雌性的SJL/J小鼠(CharlesRiver Laboratories Japan,Inc.),将相当于蛋白脂质蛋白的139-151残基的肽(东丽研究中心)的生理食盐水溶液(1mg/mL)和含有4mg/mL的结核死菌(H37Ra)的费氏完全佐剂(DIFCO)的等量混合溶液(乳液)在小鼠的背部2处皮下注射各100μL,诱导脑脊髄炎。本发明化合物从免疫实施日(设为Day0)的7天后,1天2次连续进行4周的口服给药。在Day0、Day2、Day5、Day7~35用肉眼观察脑脊髄炎的临床症状,确认本发明化合物的作用。对临床症状评价分数(0:无症状、1:尾软弱、1.5:尾完全下垂、2:运动失调、3:后肢轻度麻痹、3.5:后肢麻痹、4:后肢完全麻痹、4.5:四肢麻痹、濒临死亡、5:死亡)。
结果,本发明的化合物对于多发性硬化症显示出优异的治疗效果。