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1. WO2020158972 - PROCÉDÉ DE PRODUCTION D'UN MODÈLE DE MALADIE DE WILSON IN VITRO À L'AIDE DE CELLULES SOUCHES PLURIPOTENTES HUMAINES, ET MODÈLE DE MALADIE DE WILSON IN VITRO PRODUIT PAR LEDIT PROCÉDÉ

Numéro de publication WO/2020/158972
Date de publication 06.08.2020
N° de la demande internationale PCT/KR2019/001278
Date du dépôt international 30.01.2019
CIB
C12N 15/85 2006.1
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
63Introduction de matériel génétique étranger utilisant des vecteurs; Vecteurs; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci; Régulation de l'expression
79Vecteurs ou systèmes d'expression spécialement adaptés aux hôtes eucaryotes
85pour cellules animales
C12N 5/071 2010.1
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
5Cellules non différenciées humaines, animales ou végétales, p.ex. lignées cellulaires; Tissus; Leur culture ou conservation; Milieux de culture à cet effet
07Cellules animales ou tissus animaux
071Cellules ou tissus de vertébrés, p.ex. cellules humaines ou tissus humains
C12N 9/22 2006.1
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
9Enzymes, p.ex. ligases (6.); Proenzymes; Compositions les contenant; Procédés pour préparer, activer, inhiber, séparer ou purifier des enzymes
14Hydrolases (3.)
16agissant sur les liaisons esters (3.1)
22Ribonucléases
C12N 15/10 2006.1
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
10Procédés pour l'isolement, la préparation ou la purification d'ADN ou d'ARN
C12N 15/113 2010.1
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
11Fragments d'ADN ou d'ARN; Leurs formes modifiées
113Acides nucléiques non codants modulant l'expression des gènes, p.ex. oligonucléotides anti-sens
C12N 15/65 2006.1
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
63Introduction de matériel génétique étranger utilisant des vecteurs; Vecteurs; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci; Régulation de l'expression
65utilisant des marqueurs
CPC
C12N 15/10
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
10Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
C12N 15/113
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
11DNA or RNA fragments; Modified forms thereof
113Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
C12N 15/65
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
65using markers
C12N 15/85
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
85for animal cells
C12N 9/22
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
9Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof
14Hydrolases (3)
16acting on ester bonds (3.1)
22Ribonucleases ; RNAses, DNAses
G01N 33/50
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
33Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
48Biological material, e.g. blood, urine
50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Déposants
  • (주)넥셀 NEXEL CO.,LTD. [KR]/[KR]
Inventeurs
  • 김동규 KIM, Dongkyu
  • 우동훈 WOO, Donghun
  • 한충성 HAN, Choongseong
Mandataires
  • 이재만 LEE, Jaeman
Données relatives à la priorité
10-2019-001147229.01.2019KR
Langue de publication coréen (KO)
Langue de dépôt coréen (KO)
États désignés
Titre
(EN) METHOD FOR PRODUCING IN VITRO WILSON'S DISEASE MODEL USING HUMAN PLURIPOTENT STEM CELLS, AND IN VITRO WILSON'S DISEASE MODEL PRODUCED THROUGH SAME
(FR) PROCÉDÉ DE PRODUCTION D'UN MODÈLE DE MALADIE DE WILSON IN VITRO À L'AIDE DE CELLULES SOUCHES PLURIPOTENTES HUMAINES, ET MODÈLE DE MALADIE DE WILSON IN VITRO PRODUIT PAR LEDIT PROCÉDÉ
(KO) 인간 전분화능 줄기세포를 이용한 생체 외 윌슨병 모델 제조방법 및 이를 통해 제조된 생체 외 윌슨병 모델
Abrégé
(EN)
The present invention relates to a method for generating in vitro cultured hepatocytes using an endoplasmic reticulum stress reliever, the method comprising: step A for preparing a guide RNA having a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1; step B for inserting the guide RNA prepared through step A into a Cas9 nuclease expression vector, and thereby preparing a vector for CRISPR/Cas9 cloned so as to include the guide RNA prepared through step A; step C for preparing ssODNs (Single Stranded Oligodeoxynucleotides) having a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2; step D for injecting the vector for CRISPR/Cas9 prepared through step B and the ssODNs prepared through step C into human pluripotent stem cells; step E for obtaining a plurality of single colonies by culturing the human pluripotent stem cells into which the vector for CRISPR/Cas9 and ssODNs have been injected through step D; and step F for sequencing each of the plurality of single colonies obtained through step E, and selecting a single colony having human pluripotent stem cells which have been made able to develop Wilson's disease by being made to include the Wilson's disease-causing gene ATP7B which has mutated into the R778L mutant form through specific gene mutation.
(FR)
La présente invention concerne un procédé pour produire in vitro des hépatocytes cultivés à l'aide d'un réducteur du stress du réticulum endoplasmique, le procédé comprenant : l'étape A, pour préparer un ARN guide ayant une séquence nucléotidique de SEQ ID NO : 1; l'étape B, pour insérer l'ARN guide préparé à l'étape A dans un vecteur d'expression de nucléase Cas9, et préparer ainsi un vecteur pour CRISPR/Cas9 cloné de façon à inclure l'ARN guide préparé à l'étape A; l'étape C, pour préparer des ssODN (oligodésoxynucléotides monocaténaires) ayant une séquence nucléotidique de SEQ ID NO : 2; l'étape D, pour injecter le vecteur pour CRISPR/Cas9 préparé à l'étape B et les ssODN préparés à l'étape C dans des cellules souches pluripotentes humaines; l'étape E, pour obtenir une pluralité de colonies individuelles par culture des cellules souches pluripotentes humaines dans lesquelles le vecteur pour CRISPR/Cas9 et les ssODN a été injecté à l'étape D; et l'étape F, pour séquencer chacune de la pluralité de colonies individuelles obtenues à l'étape E, et sélectionner une seule colonie ayant des cellules souches pluripotentes humaines ayant été rendues capables de développer la maladie de Wilson du fait de leur vocation à inclure le gène ATP7B provoquant la maladie de Wilson qui a muté dans la forme mutante R778L par l'intermédiaire d'une mutation génétique spécifique.
(KO)
본 발명은 소포체 스트레스 완화제를 이용한 생체 외 배양 간세포 생성방법에 관한 것으로, 서열번호1의 염기서열을 가진 가이드 RNA(Guide RNA)를 마련하는 A단계; 상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 Cas9 Nuclease 발현 가능 벡터에 삽입하여 상기 A단계를 통해 마련된 가이드 RNA를 포함하도록 클로닝(Cloning)된 CRISPR/Cas9용 벡터(Vector)를 마련하는 B단계; 서열번호2의 염기서열을 가진 ssODNs(Single Stranded Oligodeoxynucleotides)를 마련하는 C단계; 상기 B단계를 통해 마련된 CRISPR/Cas9용 벡터 및 상기 C단계를 통해 마련된 ssODNs를 인간 전분화능 줄기세포에 주입시키는 D단계; 상기 D단계를 통해 상기 CRISPR/Cas9용 벡터 및 ssODNs가 주입된 인간 전분화능 줄기세포를 배양하여 단일 콜로니(Colony) 다수 개를 수득하는 E단계; 및 상기 E단계를 통해 수득된 단일 콜로니 다수 개 각각에 대해 시퀀싱(Sequencing)을 수행하여, 특이적 유전자 변이를 통해 R778L 돌연변이형으로 변형된 윌슨병 원인유전자 ATP7B를 포함함에 따라 윌슨병 발병이 가능하도록 유도된 인간 전분화능 줄기세포를 가진 단일 콜로니를 선별하는 F단계;를 포함한다.
Également publié en tant que
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