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1. WO2020155242 - NANOPORE NFPAB MUTANT, SYSTÈME DE TEST, PROCÉDÉ DE FABRICATION ASSOCIÉ ET UTILISATION ASSOCIÉE

Numéro de publication WO/2020/155242
Date de publication 06.08.2020
N° de la demande internationale PCT/CN2019/076037
Date du dépôt international 25.02.2019
CIB
G01N 27/447 2006.1
GPHYSIQUE
01MÉTROLOGIE; TESTS
NRECHERCHE OU ANALYSE DES MATÉRIAUX PAR DÉTERMINATION DE LEURS PROPRIÉTÉS CHIMIQUES OU PHYSIQUES
27Recherche ou analyse des matériaux par l'emploi de moyens électriques, électrochimiques ou magnétiques
26en recherchant des variables électrochimiques; en utilisant l'électrolyse ou l'électrophorèse
416Systèmes
447utilisant l'électrophorèse
C07K 14/355 2006.1
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
07CHIMIE ORGANIQUE
KPEPTIDES
14Peptides ayant plus de 20 amino-acides; Gastrines; Somatostatines; Mélanotropines; Leurs dérivés
195provenant de bactéries
355provenant de Nocardia (G)
CPC
C07K 14/355
CCHEMISTRY; METALLURGY
07ORGANIC CHEMISTRY
KPEPTIDES
14Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
195from bacteria
355from Nocardia (G)
C12Q 1/6869
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
68involving nucleic acids
6869Methods for sequencing
G01N 27/447
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
27Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
26by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
416Systems
447using electrophoresis
G01N 33/68
GPHYSICS
01MEASURING; TESTING
NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
33Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
48Biological material, e.g. blood, urine
50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
68involving proteins, peptides or amino acids
Déposants
  • 深圳市梅丽纳米孔科技有限公司 SHENZHEN MERRIME NANOPORE TECHNOLOGY CO., LTD. [CN]/[CN]
Inventeurs
  • 李伟 LI, Wei
  • 周智 ZHOU, Zhi
  • 文豪 WEN, Hao
Mandataires
  • 深圳市精英专利事务所 SHENZHEN TALENT PATENT SERVICE
Données relatives à la priorité
201910091059.930.01.2019CN
Langue de publication chinois (ZH)
Langue de dépôt chinois (ZH)
États désignés
Titre
(EN) MUTANT NFPAB NANOPORE, TEST SYSTEM, MANUFACTURING METHOD THEREFOR AND USE THEREOF
(FR) NANOPORE NFPAB MUTANT, SYSTÈME DE TEST, PROCÉDÉ DE FABRICATION ASSOCIÉ ET UTILISATION ASSOCIÉE
(ZH) 一种突变NfpAB纳米孔、测试系统及制作方法与应用
Abrégé
(EN)
Disclosed is a mutant NfpAB nanopore, which is a protein complex composed of at least one NfpA protein mutant monomer and one NfpB protein mutant monomer, or is a protein complex composed of at least two mutant monomers expressed by a fusion mutant gene of NfpA and NfpB. The mutant NfpAB nanopore has a different structure and recognition site from known nanopores, and can be used for the identification, concentration detection and sequencing of polymers such as nucleic acids, polypeptides and proteins. The mutant NfpAB nanopore allows for the capturing and transferring of single-stranded DNA and the distinguishing of adenine (A), thymine (T), cytosine (C) and guanine (G). The NfpAB mutant is formed by combining two different monomers, which enriches the transformation space inside a pore channel. The pore channel has a conical channel structure similar to MspA, and is an ideal channel for nucleic acid sequencing. Also disclosed are a test system containing the nanopore, a manufacturing method therefor and the use thereof. Accurate base recognition is realized by means of subjecting the inside of the nanopores to engineered site-directed mutation, thereby adjusting the charge distribution inside the pore channel and reducing the speed of nucleic acids passing through the pore channel.
(FR)
L'invention concerne un nanopore NfpAB mutant, qui est un complexe protéique composé d'au moins un monomère mutant de protéine NfpA et un monomère mutant de protéine NfpB, ou est un complexe protéique composé d'au moins deux monomères mutants exprimés par un gène mutant de fusion de NfpA et NfpB. Le nanopore NfpAB mutant a une structure et un site de reconnaissance différents de ceux des nanopores connus, et peut être utilisé pour l'identification, la détection de concentration et le séquençage de polymères tels que des acides nucléiques, des polypeptides et des protéines. Le nanopore NfpAB mutant permet la capture et le transfert d'ADN simple brin et la différenciation de l'adénine (A), de la thymine (T), de la cytosine (C) et de la guanine (G). Le mutant NfpAB est formé par combinaison de deux monomères différents, ce qui enrichit l'espace de transformation à l'intérieur d'un canal de pore. Le canal de pore a une structure de canal conique similaire à celle de la MspA, et est un canal idéal pour le séquençage d'acide nucléique. La présente invention concerne également un système de test contenant le nanopore, un procédé de fabrication associé et l'utilisation associée. Une reconnaissance de bases précise est réalisée au moyen de la soumission de l'intérieur des nanopores à une mutation site-dirigée modifiée, ce qui permet d'ajuster la distribution de charge à l'intérieur du canal de pore et de réduire la vitesse de passage des acides nucléiques à travers le canal de pore.
(ZH)
一种突变NfpAB纳米孔,其为由至少一个NfpA蛋白突变单体和NfpB蛋白突变单体组成的蛋白复合体,或为由至少两个NfpA与NfpB融合突变基因表达的突变单体组成的蛋白复合体。其具有与已知纳米孔不同的结构和识别位点,能用于核酸、多肽、蛋白质等多聚物的鉴定、浓度检测及测序其允许捕捉及转移单链DNA并区分腺嘌呤(A),胸腺嘧啶(T),胞嘧啶(C)及鸟嘌呤(G)。NfpAB突变体由两个不同单体组合而成,丰富了孔道内部的改造空间,孔道具有类似MspA的锥形孔道结构,是核酸测序的理想孔道。还公开了含有该纳米孔的测试系统、制作方法及应用,通过对纳米孔内部的工程化定点突变,调整孔道内部的电荷分布,降低核酸穿过孔道时的速度,实现了碱基精准识别。
Également publié en tant que
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