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1. WO2020114307 - DÉRIVÉ D'ISOXAZOLE, SON PROCÉDÉ DE PRÉPARATION ET SON UTILISATION

Document

说明书

发明名称 0001   0002   0003   0004   0005   0006   0007   0008   0009   0010   0011   0012   0013   0014   0015   0016   0017   0018   0019   0020   0021   0022   0023   0024   0025   0026   0027   0028   0029   0030   0031   0032   0033   0034   0035   0036   0037   0038   0039   0040   0041   0042   0043   0044   0045   0046   0047   0048   0049   0050   0051   0052   0053   0054   0055   0056   0057   0058   0059   0060   0061   0062   0063   0064   0065   0066   0067   0068   0069   0070   0071   0072   0073   0074   0075   0076   0077   0078   0079   0080   0081   0082   0083   0084   0085   0086   0087   0088   0089   0090   0091   0092   0093   0094   0095   0096   0097   0098   0099   0100   0101   0102   0103   0104   0105   0106   0107   0108   0109   0110   0111   0112   0113   0114   0115   0116   0117   0118   0119   0120   0121   0122   0123   0124   0125   0126   0127   0128   0129   0130   0131   0132   0133   0134   0135   0136   0137   0138   0139   0140   0141   0142   0143   0144   0145   0146   0147   0148   0149   0150   0151   0152   0153   0154   0155   0156   0157   0158   0159   0160   0161   0162   0163   0164   0165   0166   0167   0168   0169   0170   0171   0172   0173   0174   0175   0176   0177   0178   0179   0180   0181   0182   0183   0184   0185   0186   0187   0188   0189   0190   0191   0192   0193   0194   0195   0196   0197   0198   0199   0200   0201   0202   0203   0204   0205   0206   0207   0208   0209   0210   0211   0212   0213   0214   0215   0216   0217   0218   0219   0220   0221   0222   0223   0224   0225   0226   0227   0228   0229   0230   0231   0232   0233   0234   0235   0236   0237   0238   0239   0240   0241   0242   0243   0244   0245   0246   0247   0248   0249   0250   0251   0252   0253   0254   0255   0256   0257   0258   0259   0260   0261   0262   0263   0264   0265   0266   0267   0268   0269   0270   0271   0272   0273   0274   0275   0276   0277   0278   0279   0280   0281   0282   0283   0284   0285   0286  

权利要求书

1   2   3   4   5   6   7   8   9  

附图

1  

说明书

发明名称 : 异噁唑衍生物及其制备方法和用途

发明领域

[0001]
本发明一般涉及用于治疗由类法尼醇X受体(FXR)介导的疾病或病症的化合物,更具体地涉及FXR激动剂化合物,以及其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物以及其化学保护的形式和前药。本发明还涉及所述化合物的制备方法、中间体、包含所述化合物的药物组合物和药盒以及它们的治疗用途。
[0002]
发明背景
[0003]
类法尼醇X受体(FXR,NR1H4)在肝、包括食道、胃、十二指肠、小肠、结肠在内的整个胃肠道、肾和肾上腺中表达(Kuipers,F.等,The Farnesoid X Receptor(FXR)as Modulator of Bile Acid Metabolism,Rev.Endocrine Metab.Disorders,2004,5:319-326)。FXR是已知作为核受体的配体活化的转录因子的一员。胆汁酸如鹅脱氧胆酸(CDCA)或者其牛磺酸或甘氨酸酰胺偶联物是FXR的内源性配体。胆汁酸与FXR结合后激活FXR,通过与视黄醇类X受体(RXR)的异二聚体复合物来控制多种基因的表达,包括在肝脏和循环系统中参与胆汁酸、胆固醇、三酸甘油酯、脂蛋白动态平衡的基因表达(Kalaany,N.Y.;Mangelsdorf,D.J.;LXRS and FXR:the yin and yang of cholesterol and fat metabolism,Annu.Rev.Physiol.,2006,68,159-191;Calkin,A.C.;Tontonoz,P.;Transcriptional integration of metabolism by the nuclear sterol-activated receptors LXR and FXR,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,2012,13,213-224)。FXR似乎还通过上调成纤维细胞生长因子15(啮齿动物)或成纤维细胞生长因子19(猴、人)参与旁分泌和内分泌信号传导(T.Inagaki等,Fibroblast growth factor 15 functions as an enterohepatic signal to regulate bile acid homeostasis.Cell Metab.,2005,2(4),217-225)。
[0004]
胆汁酸是两亲性分子,它们形成胶束并将膳食中的脂质乳化。如果胆汁酸浓度过高也会产生细胞毒性,因此生理上有严格控制胆汁酸浓度的机制。FXR在控制胆汁酸在体内保持稳定状态中起着关键作用(Makishima,M.;Nuclear Receptors as Targets for Drug Development:Regulation of Cholesterol and Bile Acid Metabolism by Nuclear Receptors,J.Pharmacol.Sci.,2005,97:177-183)。
[0005]
此外,FXR还被证明调节超出代谢的复杂生物流程,如肝再生或肠屏障的完整性。FXR还对肠和肝脏的免疫系统有控制,有一定的抗炎作用(Modica,S.;Gadaleta,R.M.;Moschetta,A.;Deciphering the nuclear bile acid receptor FXR paradigm,Nucl.Recept.Signal.,2010,8,e005)。
[0006]
奥贝胆酸(Obeticholic Acid,6-Et CDCA)是一种比内源性配体CDCA活性更高的FXR受体激动剂,在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的IIa期临床研究中显示出对胰岛素敏感性有显著改善以及其他代谢方面的有益作用(Mudaliar,S.;Henry,R.R.;Sanyal,A.J.等,Efficacy and safety of the farnesoid X receptor agonist obeticholic acid in patients with type 2 diabetes and nonalcoholic fatty liver disease,Gastroenterology,2013,145,574-582)。奥贝胆酸的IIb期研究显示72周的治疗对非酒精性肝炎(NASH)的组织病理学的改进也有益。在原发性胆汁性肝硬化(PBC)的III期研究中,患者的肝功能损害得到改善(Nevens,F.,Andreone,P.,Mazzella,G.等,The first primary biliary cirrhosis(PBC)phase 3 trial in two decades-an international study of the FXR agonist obeticholic acid in PBC patients,J.Hepatol.,2014,60,S525-S526)。
[0007]
WO2012087519中公开了一种FXR的激动剂或部分激动剂用于治疗由FXR介导的病症的方法。然而,现有技术中公开的FXR激动剂化合物在药效动力学或药代动力学性质方面仍存在缺陷。
[0008]
发明概述
[0009]
本发明概括地涉及通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,
[0010]
[0011]
[0012]
其中:
[0013]
X为CH或N;并且
[0014]
R选自氢、卤素、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基。
[0015]
本发明的另一方面是药物组合物,其包含所述通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,以及一种或多种药学可接受的载体。所述药物组合物还可包含适于预防或治疗由FXR介导的疾病或病症的一种或多种其他治疗剂。
[0016]
本发明还包括预防或治疗由FXR介导的疾病或病症的方法,所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的所述通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药或者所述药物组合物。
[0017]
本发明还包括用于预防或治疗由FXR介导的疾病或病症的药盒,其包括:
[0018]
a)第一容器,其包含作为第一治疗剂的至少一种所述通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药或者作为第一药物组合物的所述药物组合物;
[0019]
b)任选存在的第二容器,其包含作为第二治疗剂的至少一种其他治疗剂,或者作为第二药物组合物的包含所述其他治疗剂的药物组合物;和
[0020]
c)任选存在的包装说明书。
[0021]
本发明还包括所述通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药或者所述药物组合物,其用于预防或治疗由FXR介导的疾病或病症。
[0022]
本发明还包括所述通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药或者所述药物组合物在制备用于预防或治疗由FXR介导的疾病或病症的药物中的用途。
[0023]
本发明还包括制备本发明的化合物的方法和相应中间体。
[0024]
本发明的通式(I)的化合物具有优良的体内或体外药效动力学或药代动力学性质,显示出良好的FXR激活活性和激活作用以及优良的肝微粒体稳定性,因而具有良好的药物活性和代谢优势。
[0025]
附图简要说明
[0026]
图1显示在小鼠脂肪肝模型中给药化合物C3的效果,其中a表示与对照组相比p≤0.05;b表示与模型组相比p≤0.05。
[0027]
发明详细描述
[0028]
现详细描述本发明的某些实施方案,其实例在随附结构和分子式中说明。虽然结合列举的实施方案来描述本发明,但是应理解本发明并不限于那些实施方案。相反,本发明意在涵盖可包括在本发明的由权利要求书限定的范围内的所有替代方案、修改和等同。本领域技术人员会认识到,与本文中所述的那些相似或等同的许多方法和材料可用于实施本发明。本发明绝不限于所述的方法和材料。在所引的文献、专利及相似的材料中的一者或多者与本申请(包括但不限于定义的术语、术语用法、所述的技术等)不同或矛盾的情况下,以本申请为准。
[0029]
定义
[0030]
除非在下文中另有定义,本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。
[0031]
术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其他变体形式是包含性的或开放式的,且不排除其他未列举的元素或方法步骤。
[0032]
术语“烷基”用于本文中是指具有1至6个碳原子(C 1-6)的饱和直链或支链烃基,其中所述烷基可任选地被一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)适合的取代基取代。在一些实施方案中,烷基具有1至6个碳原子(C 1-6)。在另一些实施方案中,烷基具有1至4个碳原子(C 1-4),特别是1至3个碳原子(C 1-3)或者1至2个碳原子(C 1-2)。烷基的实例包括但不限于:甲基(Me)、乙基(Et)、1-丙基(n-Pr)、2-丙基(i-Pr或异丙基)、1-丁基(n-Bu或正丁基)、2-甲基-1-丙基(i-Bu或异丁基)、2-丁基(s-Bu或仲丁基)、2-甲基-2-丙基(t-Bu或叔丁基)、1-戊基(正戊基)、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基(-C(CH 3) 2CH 2CH 2CH 3)、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2- 丁基、1-庚基、1-辛基等。
[0033]
本文中使用的术语“卤代”或“卤素”包括F、Cl、Br或I。“卤代”包括但不限于单取代、二取代或三取代,而且,用于取代的卤原子可以相同或不同。本文中使用的术语“卤代烷基”包括氟代烷基、氯代烷基、溴代烷基或碘代烷基。
[0034]
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时,则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。
[0035]
术语“手性”是指具有镜像对的不可重叠性的分子,而术语“非手性”是指可在它们的镜像对上重叠的分子。
[0036]
术语“立体异构体”是指具有相同的化学组成但原子或基团的空间排列不同的化合物。
[0037]
“非对映异构体”是指具有两个或多个手性中心并且其分子彼此不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质,例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可通过高分辨率的分析方法例如电泳法和色谱法进行分离。
[0038]
“对映异构体”是指化合物的彼此呈不可重叠的镜像的两种立体异构体。
[0039]
本文中所用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York;和Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley & Sons,Inc.,New York,1994。本发明的化合物可包含非对称的或手性的中心,因此以不同的立体异构体形式存在。本发明的化合物的所有立体异构体形式,包括但不限于其非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物例如外消旋混合物,意在构成本发明的一部分。许多有机化合物以旋光形式存在,即,它们具有使平面偏振光的平面旋转的能力。在表述旋光化合物时,前缀D和L,或者R和S,用来表示分子的手性中心的绝对构型。前缀d和l或者(+)和(-)用来指示化合物使平面偏振光旋转的符号,其中(-)或l是指化合物是左旋的。具有前缀(+)或d的化合物是右旋的。对于特定的化学结构,这些立体异构体是相同的,只是它们彼此互为镜像。特定的立体异构体还可称为对映异构体,并且这样的异构体的混合物常称为对映异构体混合物。对映异构体的50∶50混合物称为外消旋混合物或外消旋物,其可在化学反应或过程没有立体选择性或立体专一性的情况下出现。术语“外消旋混合物”和“外消旋物”是指两种对映异构体的等摩尔混合物,不具有旋光性。在一方面,本发明的立体异构体可以占主导的形式存在,例如,大于50%ee(对映体过量),大于80%ee,大于90%ee,大于95%ee,或者大于99%ee。
[0040]
在用于制备本发明的化合物的方法产生立体异构体的混合物的情况中,通过常规技术例如制备色谱可以分离这些异构体。所述化合物可以制备成外消旋的形式,或者,通过对映体选择性合成或者通过拆分可以制备单一的对映异构体。例如,通过标准技术,例如通过与旋光性的酸如(-)-二对甲苯酰基-d-酒石酸和/或(+)-二对甲苯酰基-l-酒石酸形成盐来形成非对映异构体对,然后进行分步结晶和游离碱再生,可以将所述化合物拆分成它们的对映异构体成分。通过形成非对映的酯或酰胺,然后进行色谱纯化和除去手性助剂,也可以拆分所述化合物。或者,使用手性HPLC柱可以拆分所述化合物。
[0041]
术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可通过低能垒互相转化的能量不同的结构异构体。例如,质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括通过质子迁移互相转化,例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组互相转化。
[0042]
本发明涵盖通式(I)的化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物,其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。
[0043]
应当理解,本发明的某些化合物可以游离形式存在用于治疗,或适当时,以其药学可接受的衍生物形式存在。根据在本发明中,药学可接受的衍生物包括但不限于:药学可接受的盐、酯、溶剂合物、代谢物、N-氧化物以及化学保护的形式和前药,在将它们向有此需要的个体给药后,能够直接或间接提供本发明的化合物或者其代谢物或残余物。
[0044]
因此,当在本文中提及“通式(I)的化合物”、“本发明的化合物”或“本发明的通式(I)的化合物”时,也意在涵盖所述通式(I)的化合物的溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物以及其化学保护的形式和前药。
[0045]
术语“药学可接受的盐”用于本文中是指本发明的化合物的药学可接受的有机或无机盐。示例性的盐包括但不限于异烟酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖质酸盐和扑酸盐(即1,1’-亚甲基-双(2-羟基-3-萘甲酸盐))等。药学可接受的盐可包括反荷离子的另一种分子的包合。所述反荷离子可以是使母体化合物上的电荷稳定的任何有机或无机离子。此外,药学可接受的盐在其结构中可具有多于一个带电荷的原子。多个带电荷的原子为药学可接受的盐的部分的情况可具有多个反荷离子。因此,药学可接受的盐可具有一个或多个带电荷的原 子和/或一个或多个反荷离子。
[0046]
若本发明的化合物是碱,期望的药学可接受的盐可通过本领域中可利用的任何适合的方法制备,例如,用无机酸或者用有机酸例如水杨酸、吡喃糖苷基酸例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸氨基酸、芳香酸等处理游离的碱。
[0047]
若本发明的化合物是酸,期望的药学可接受的盐可通过任何适合的方法制备,例如,用无机碱或有机碱例如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等处理游离的酸。适合的盐的示例性实例包括但不限于,得自氨基酸以及环胺的有机盐,以及无机盐。
[0048]
术语“药学可接受的”是指物质或组合物必须与构成制剂的其他组分和/或用其治疗的哺乳动物在化学和/或毒理学上相容。
[0049]
本文所使用的术语“酯”意指衍生自通式(I)化合物的酯,包括生理上可水解的酯,其可在生理条件下水解以释放游离酸或醇形式的本发明的通式(I)化合物。本发明的通式(I)化合物本身也可以是酯。
[0050]
本发明的化合物可以溶剂合物(如水合物)的形式存在,其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂,特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
[0051]
“代谢物”是特定的化合物或其盐通过体内代谢产生的产物。化合物的代谢物可利用本领域已知的常规技术进行鉴定并且可利用诸如本文中所述的那些试验测定它们的活性。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此,本发明包括本发明的化合物的代谢物,包括通过包括使本发明的通式(I)的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢物的时间段的方法产生的化合物。
[0052]
本领域技术人员会理解,由于氮需要可用的孤对电子来氧化成氧化物,因此并非所有的含氮杂环都能够形成N-氧化物;本领域技术人员会识别能够形成N-氧化物的含氮杂环。本领域技术人员还会认识到叔胺能够形成N-氧化物。用于制备杂环和叔胺的N-氧化物的合成方法是本领域技术人员熟知的,包括用过氧酸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸(m-CPBA)、过氧化氢、烷基过氧化氢如叔丁基过氧化氢、过硼酸钠和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷来氧化杂环和叔胺。这些用于制备N-氧化物的方法已在文献中得到广泛描述和综述,参见例如:T.L.Gilchrist,Comprehensive Organic Synthesis,vol.7,pp 748-750;S.V.Ley,Ed.,Pergamon Press;M.Tisler和B.Stanovnik,Comprehensive Heterocyclic Chemistry,vol.3,pp 18-20。
[0053]
在制备本发明的化合物的任何过程中,保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的,由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现,例如,在Protective Groups in Organic Chemistry,ed.J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973;和T.W.Greene & P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,1991中所述的那些保护基,这些参考文献通过援引加入本文。使用本领域已知的方法,在适当的后续阶段可以除去保护基。
[0054]
本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物,其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。因此,在这些情况中,用于本发明的治疗方法的术语“给药”应包括用所要求保护的化合物中的一种或多种的前药形式来治疗各种疾病或病症,但是在向个体给药后所述前药形式在体内转化成上述化合物。例如,在“Design of Prodrug”,ed.H.Bundgaard,Elsevier,1985中,描述了选择和制备适合的前药衍生物的常规方法。
[0055]
本文中所示的任何通式或结构,包括通式(I)的化合物在内,还意在表示所述化合物的未标记形式和同位素标记的形式。同位素标记的化合物具有本文给出的分子式所示的结构,除了一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子替代。本发明的化合物中可包含的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素,例如,但不限于 2H(氘,D)、 3H(氚)、 11C、 13C、 14C、 15N、 18F、 31P、 32P、 35S、 36Cl和 125I。各种同位素标记的本发明的化合物,例如,其中包含诸如 3H、 13C和 14C的放射性同位素的那些。这样的同位素标记的化合物可用于代谢研究、反应动力学研究、检测或显像技术,例如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射断层摄影术(SPECT),包括药物或底物组织分布测定,或者用于患者的放射性治疗。本发明的氘标记的或取代的治疗性化合物可具有改进的有关分布、代谢和排泄(ADME)的DMPK(药物代谢和药物动力学)性质。用较重的同位素例如氘取代可能由于较大的代谢稳定性而提供某些治疗优点,例如,体内半衰期增长,或者剂量要求减小。 18F标记的化合物可用于PET或SPECT研究。本发明的同位素标记的化合物及其前药一般可通过实施路线或实施例中公开的方法和下述制备方法,以易得的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂进行制备。此外,用较重的同位素特别是氘(即 2H或D)取代可由于较大的代谢稳定性而提供某些治疗优点,例如,体内半衰期增长或者剂量要求减小或者治疗指数改进。应理解,在此情况中氘被视为式(I)的化合物中的取代基。可通过同位素富集系数定义这样的较重的同位素特别是氘的浓度。在本 发明的化合物中,未明确指明为特定同位素的任何原子意在表示该原子的任何稳定的同位素。除非另外说明,当明确以“H”或“氢”标明某位置时,应理解为该位置具有其天然丰度同位素组成的氢。因此,在本发明的化合物中,明确标明氘(D)的任何原子意在表示氘。
[0056]
本文使用的术语“药物组合物”包括包含治疗有效量的本发明的通式(I)的化合物的产品,以及直接地或间接地由本发明的通式(I)化合物的组合产生的任何产品。
[0057]
化合物
[0058]
在一些实施方案中,本发明提供通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,
[0059]
[0060]
其中:
[0061]
X为CH或N;并且
[0062]
R选自氢、卤素、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基。
[0063]
在一些实施方案中,本发明提供化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,其中R选自氢、氟、甲基和三氟甲基。
[0064]
在一些实施方案中,本发明提供化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,其中X为CH;并且R选自氢、氟、甲基和三氟甲基。
[0065]
在一些实施方案中,本发明提供化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,其中X为N;并且R为氢。
[0066]
在一些实施方案中,本发明提供化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,其中所述化合物选自:
[0067]
[0068]
本发明的通式(I)的化合物可包含不对称中心或手性中心,因而可以不同的立体异构体形式存在。本发明化合物的所有立体异构体形式,包括但不限于其非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物例如外消旋混合物,意在构成本发明的一部分。
[0069]
此外,本发明涵盖所有的非对映异构体,包括顺-反(几何)异构体和构象异构体。例如,若通式(I)的化合物包含双键或稠合环,则顺式和反式形式以及其混合物被涵盖在本发明的范围内。在本文 所示的结构中,若未指明任何具体手性原子的立体化学,则所有的立体异构体被视为并被包含为本发明的化合物。若以表示具体构型的楔形实线或虚线指明立体化学,则如此指明和定义该立体异构体。
[0070]
本发明的化合物可以非溶剂化的形式、以及用药学可接受的溶剂例如水、乙醇等溶剂化的形式存在,并且本发明意在涵盖溶剂化的和非溶剂化的形式。
[0071]
本发明的化合物还可以不同的互变异构体形式存在,并且所有这样的形式都被涵盖在本发明的范围内。
[0072]
还应理解,实施方案中的任意两个或更多个实施方案的组合也包括在本发明的范围内。
[0073]
药物组合物
[0074]
本发明另一方面提供药物组合物,其包含至少一种如上所述的本发明的通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,以及一种或多种药学可接受的载体。在一些实施方案中,所述药物组合物还可包含一种或多种其他治疗剂,例如适于预防或治疗由FXR介导的疾病或病症的其他治疗剂。
[0075]
本发明中“药学可接受的载体”是指与活性成分一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物,并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其他动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其他问题或并发症。
[0076]
在本发明的药物组合物中可使用的药学可接受的载体包括但不限于无菌液体,例如水和油,包括那些石油、动物、植物或合成来源的油,例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当所述药物组合物通过静脉内给药时,水是示例性载体。还可以使用生理盐水和葡萄糖及甘油水溶液作为液体载体,特别是用于注射液。适合的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽糖、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。所述组合物还可以视需要包含少量的湿润剂、乳化剂或pH缓冲剂。口服制剂可以包含标准载体,如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适合的药学可接受的载体的实例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(1990)中所述。
[0077]
本发明的药物组合物可以系统地作用和/或局部地作用。为此目的,它们可以适合的途径给药,例如通过注射、静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内或经皮给药;或通过口服、含服、经鼻、透粘膜、局部、以眼用制剂的形式或通过吸入给药。
[0078]
对于这些给药途径,可以适合的剂型给药本发明的药物组合物。
[0079]
所述剂型包括但不限于片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂、糖浆剂。
[0080]
治疗用途
[0081]
本发明的另一方面提供所述化合物和药物组合物的治疗用途。
[0082]
因此,在一些实施方案中,本发明涉及预防或治疗由FXR介导的疾病或病症的方法,所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的至少一种本发明的通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,或者给药本发明的药物组合物。
[0083]
在另一些实施方案中,本发明涉及至少一种本发明的通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药、或者本发明的药物组合物在制备用于预防或治疗由FXR介导的疾病或病症的药物中的用途。
[0084]
所述由FXR介导的疾病或病症包括但不限于:
[0085]
慢性肝内或某些形式的肝外胆汁淤积性病症;肝纤维化;肝的梗阻性或慢性炎性病症;肝硬化;脂肪肝及并发症;与酒精引发的肝硬化或与病毒传染性形式的肝炎相关的胆汁淤积性和纤维变性效果;在部分肝切除术后的肝衰竭或肝缺血;化疗相关的脂肪性肝炎(CASH);急性肝衰竭;
[0086]
炎性肠道疾病、血脂异常、动脉粥样硬化、糖尿病和相关疾病;脂质和脂蛋白病症;II型糖尿病以及I型和II型糖尿病的临床并发症,包括糖尿病性肾病、糖尿病性神经病变、糖尿病性视网膜病、及临床上明显的长期糖尿病的其他观察到的效果;由于强迫的脂质、特别是甘油三酯蓄积以及随后的促纤维化途径激活而导致的慢性脂肪性和纤维性变性引起的病症和疾病,例如非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH);肥胖或代谢综合征(血脂障碍、糖尿病和体重指数异 常高的合并病症);
[0087]
急性心肌梗塞、急性中风或作为慢性梗阻性动脉粥样硬化终点发生的血栓形成;非恶性过度增殖性病症和恶性过度增殖性病症,特别是肝细胞癌、结肠腺瘤和息肉病、结肠腺癌、乳腺癌、胰腺癌、巴特氏食管癌和胃肠道和肝脏的其他形式的肿瘤性疾病。
[0088]
除非另外说明,本文中所使用的术语“治疗”意指逆转、减轻、抑制所指示的疾病或病症或者这样的疾病或病症的一或多种症状的进展。
[0089]
如本文所使用的“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物,例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物,例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
[0090]
如本文中所使用的术语“治疗有效量”指被给药后会实现上述治疗效力的化合物的量。
[0091]
可调整给药方案以提供最期望的应答。例如,可给药单次推注,可随时间给药数个分剂量,或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意,剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化,且可包括单次或多次剂量。要进一步理解,对于任何特定个体,具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。
[0092]
所给药的本发明的化合物的量会取决于所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率、化合物的处置及处方医师的判断。一般而言,有效剂量在每日每kg体重约0.0001至约50mg,例如约0.01至约10mg/kg/日(单次或分次给药)。对70kg的人而言,这会合计为约0.007mg/日至约3500mg/日,例如约0.7mg/日至约700mg/日。在一些情况下,不高于前述范围的下限的剂量水平可以是足够的,而在其他情况下,仍可在不引起任何有害副作用的情况下采用较大剂量,条件是首先将所述较大剂量分成数个较小剂量以在一整天中给药。
[0093]
本发明的化合物在所述药物组合物中的含量或用量可以是约0.01mg至约1000mg,适合地是0.1-500mg,优选0.5-300mg等。
[0094]
组合治疗
[0095]
通式(I)的化合物可单独使用,或者与适于预防或治疗由FXR介导的疾病或病症的一种或多种其他治疗剂组合使用。在一些实施方案中,在所述药物组合物或者作为组合治疗的给药方案中,将通式(I)的化合物与例如具有抗过度增殖效力的其他治疗剂组合。所述其他治疗剂可以是例如化疗剂。所述药物组合物或给药方案的其他治疗剂优选地具有与通式(I)的化合物互补的活性,从而它们不会不利地相互影响。这样的化合物适合地以对预期目的有效的量组合存在。
[0096]
组合治疗可以同时或依次给药的方案施用。当依次施用时,该组合可以在两次或多次给药中施用。组合给药包括使用分开的药物组合物或者包含通式(I)的化合物和其他治疗剂的单一药物组合物同时给药,以及以任意顺序相继地给药,其中优选存在两种(或所有)活性剂同时发挥它们的生物活性的时间段。
[0097]
上述同时给药的药剂中的任一种的适合的剂量是当前使用的那些,并且由于新鉴定的药物与其他治疗剂或治疗的组合(协同)作用,可以降低。
[0098]
组合治疗可提供“协同作用”并证明是“协同的”,即,活性成分在一起使用时所达到的效果大于分开使用所述化合物时所产生的效果之和。当所述活性成分:(1)在组合的单位剂量制剂中共同配制并同时给药或者递送时;(2)作为分开的制剂交替或平行地递送时;或者(3)通过一些其他方案时,可达到协同效果。当在交替疗法中递送时,当所述化合物例如通过在分开的注射器中分别注射、通过分开的丸剂或胶囊剂、或通过分开的输注依次给药或递送时,可达到协同效果。通常在交替疗法中,相继地,即连续地,给药有效剂量的各活性成分,而在组合治疗中,一起给药有效剂量的两种或多种活性成分。
[0099]
在治疗的一个具体的实施方案中,通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药可以与例如本文所述的那些其他治疗剂组合,还可与外科治疗和放疗组合。因此,本发明的组合治疗包括给药至少一种通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,以及使用至少一种其他治疗方法。为了达到期望的组合治疗效果,选择通式(I)的化合物和其他治疗剂的量以及给药的相对时机。
[0100]
通式(I)的化合物的代谢物
[0101]
本文所述的通式(I)的化合物的体内代谢物也在本发明的范围内。这样的产物可由例如被给药的 化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此,本发明包括通式(I)的化合物的代谢物,包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢物的时间的方法制得的化合物。
[0102]
代谢物通常通过制备本发明的放射性同位素(例如 14C或 3H)标记的化合物,将其以可检测的剂量(例如大于约0.5mg/kg)向动物例如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴或人肠胃外给药,代谢足够的时间(通常约30秒至30小时),然后从尿、血液或其他生物样品分离其转化产物进行鉴定。这些产物易于分离,因为它们是标记的(其他的通过使用能够结合代谢物中存余的表位的抗体进行分离)。代谢物结构以常规方法测定,例如通过MS、LC/MS或NMR分析。通过以与本领域技术人员公知的常规药物代谢研究相同的方式进行代谢物的分析。代谢物,只要未在体内发现它们,可用于诊断测定中,以治疗性给药本发明的化合物。
[0103]
药盒
[0104]
在本发明的另一些实施方案中,提供包含用于治疗上述疾病或病症的材料的“药盒”。所述药盒包括容器,所述容器包含作为第一治疗剂的通式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、或者其化学保护的形式或前药,或者包含作为第一药物组合物的本发明的药物组合物。在一些实施方案中,所述药盒还可包括在所述容器上或伴随所述容器的标签或包装说明书。术语“包装说明书”是指治疗产品的商业包装中通常包含的说明书,其包含使用该治疗产品相关的适应征、用法、剂量、给药、禁忌和/或警示的信息。适合的容器包括,例如,瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。所述容器可以由各种材料例如玻璃和塑料制成。所述容器可容纳对治疗病症有效的通式(I)的化合物或其制剂,并且可具有无菌入口(例如,所述容器可以是静脉内溶液剂袋或者具有可被皮下注射针刺穿的瓶塞的小瓶)。标签或包装说明书指明所述组合物用于治疗所选的病症例如癌症。此外,标签或包装说明书可指明要治疗的患者是患有诸如肝硬化、过度增殖性病症、动脉粥样硬化、I型糖尿病之类疾病或病症的患者标签或包装说明书还可指明所述组合物可用来治疗其他病症。在另一些实施方案中,所述药盒还包括第二容器,其包含作为第二治疗剂的适于预防或治疗由FXR介导的疾病或病症的至少一种其他治疗剂,或者作为第二药物组合物的包含所述其他治疗剂的药物组合物。因此,在一些实施方案中,所述药盒可包括给药所述第一治疗剂或第一药物组合物和所述第二治疗剂或第二药物组合物(若存在)的说明书。例如,若所述药盒包括含有通式(I)的化合物的第一组合物和包含其他治疗剂的第二药物组合物,则该药盒还可包括向有此需要的个体同时、相继或分开地给药所述第一药物组合物和第二药物组合物的说明书。替代地或者额外的,所述药盒还可包括第三容器,其包含药学可接受的缓冲剂例如抑菌的注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏液和葡萄糖溶液。所述药盒还可包括就商业和用户而言令人期望的其他材料,包括其他缓冲剂、稀释剂、填料、注射针和注射器。
[0105]
在另一些实施方案中,所述药盒适合于递送通式(I)的化合物的固体口服形式例如片剂或胶囊剂。这样的药盒优选地包括多个单位剂量。这样的药盒可包括具有以它们的预期用途定位的剂量的卡片。这样的药盒的一个实例是“泡罩包装”。泡罩包装在包装工业中是公知的并且广泛用于包装药学单位剂量形式。若期望,可以例如指定在治疗时间表中可给药之日的数字、字母或其他标记或者日历插页的形式提供记忆辅助工具。
[0106]
化合物的制备方法
[0107]
在一些实施方案中,本发明提供制备本发明的通式(I)的化合物的方法,所述方法包括以下步骤:
[0108]
[0109]
其中:
[0110]
Hal 1、Hal 2和Hal 3各自独立地为相同或不同的卤素,例如F、Cl、Br或I,优选为Cl或Br;
[0111]
PG 1为氨基保护基,优选为叔丁氧羰基(Boc);
[0112]
PG 2为羧基保护基,优选为C 1-6烷基,更优选为甲基;
[0113]
Y为硼酸或硼酸酯基团,优选为-B(OH) 2或者
[0114]
其余基团如上文所定义;
[0115]
各步骤的反应条件如下:
[0116]
步骤A:使化合物IN-1与化合物IN-2反应以得到化合物IN-3;
[0117]
所述反应优选在适合的有机溶剂中进行。所述有机溶剂可选自直链或环状醚类(例如四氢呋喃或乙醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合,优选四氢呋喃或N,N-二甲基甲酰胺。所述反应优选在适合的碱(例如碱金属的醇盐或碳酸盐)和/或催化剂的存在下进行。所述催化剂可以是包括冠醚的催化剂系统,所述冠醚可选自15-冠醚-5和18-冠醚-6;所述碱金属的碳酸盐为例如碳酸钾或碳酸铯;所述碱金属的醇盐可选自叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾。优选地,所述碱金属的醇盐和催化剂是叔丁醇钠和/或叔丁醇钾与15-冠醚-5和/或18-冠醚-6的组合,优选叔丁醇钠与15-冠醚-5的组合或叔丁醇钾与18-冠醚-6的组合。所述反应优选在适合的温度下进行。所述温度优选为室温(20-30℃)或50-100℃(例如50-80℃)。所述反应优选进行合适的时间,例如1-24小时,例如5-15小时。
[0118]
步骤B:移除化合物IN-3中的PG 1基团,以得到化合物IN-4;
[0119]
所述反应优选在适合的有机溶剂中进行。所述有机溶剂可选自卤代烃类(例如,二氯甲烷、氯仿、氯乙烷、二氯乙烷、三氯乙烷)、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺及其任意组合,优选二氯甲烷。所述反应可在酸性条件下进行,例如在1,4-二氧六环的氯化氢溶液中;或者合适的有机酸(例如羧酸或卤代酸,包括但不限于甲酸、氟乙酸、二氟乙酸、三氟乙酸、氯乙酸、二氯乙酸、三氯乙酸及其组合,优选三氟乙酸)的存在下进行。所述反应优选在适合的温度下进行。所述温度优选为室温(20-30℃)。所述反应优选进行合适的时间,例如1-5小时或6-15小时,例如2小时、4小时或过夜反应。
[0120]
步骤C:使化合物IN-4与化合物IN-a反应以得到化合物IN-5;
[0121]
在一些实施方案中,使化合物IN-4与化合物IN-a发生取代反应以得到化合物IN-5。所述取代反应优选在适合的有机溶剂中进行。所述有机溶剂可选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜及其任意组合,优选N,N-二甲基甲酰胺或N,N-二甲基乙酰胺。所述取代反应优选在适合的碱的存在下进行。优选地,所述碱是有机碱(例如有机胺类如三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉或吡啶,优选三乙胺或N,N-二异丙基乙胺)或无机碱(例如碱金属盐,优选碳酸钾)。所述取代反应优选在适合的温度下进行。所述温度可以是20-150℃,例如30-140℃,优选25℃、50℃、100℃或130℃,优选80℃。所述取代反应优选进行合适的时间,例如2-24小时、2-18小时或2-12小时,例如5、8或10小时。
[0122]
在另一些实施方案中,使化合物IN-4与化合物IN-a发生偶联反应以得到化合物IN-5。所述偶联反应优选在金属催化剂和碱的存在下进行。优选地,所述金属催化剂是钯金属催化剂,例如三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、三苯基膦钯、醋酸钯,优选三(二亚苄基丙酮)二钯。所述碱是无机碱,例如碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾,优选碳酸铯。优选地,所述偶联反应在衍生自联苯的有机磷化合物的存在下进行,所述有机磷化合物选自BINAP、RuPhos和XPhos,优选BINAP。优选地,所述偶联反应在适合的有机溶剂中进行,所述有机溶剂可选自苯、甲苯和二甲苯,例如是甲苯。优选地,所述偶联反应在适合的保护气氛(例如氮气环境)下进行。优选地,所述偶联反应在适合的温度下进行,所述温度可以是70-100℃,优选80℃。优选地,所述偶联反应进行合适的时间,例如1-3小时,例如2小时。
[0123]
步骤D:使化合物IN-5与化合物IN-b反应以得到化合物IN-6;
[0124]
优选地,使化合物IN-5与化合物IN-b发生金属催化偶联反应得到化合物IN-6。所述金属催化偶联反应采用常规的方法进行。例如:化合物IN-5与化合物IN-b在溶剂(例如水、有机溶剂、或者有机溶剂与水的混合溶剂)中溶解,加入钯催化剂和碱,任选地在氮气保护下,在50℃到120℃的温度(优选80℃或90℃)下反应8到24小时(优选8小时或12小时)。所述有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、1,4-二氧六环、甲苯或DME等。所述钯催化剂为三(二亚苄基丙酮)二钯、[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、三苯基膦钯、醋酸钯,优选[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯或三(二亚苄基丙酮)二钯等。所述碱优选是无机碱,例如碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠或碳酸氢钾等。
[0125]
步骤E:移除化合物IN-6中的PG 2基团,以得到通式(I)的化合物;
[0126]
所述反应优选在适合的有机溶剂(所述有机溶剂可选自直链或环状醚类(例如四氢呋喃或乙醚等)、N-甲基吡咯烷酮、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜及其任意组合,优选四氢呋喃)中进行。所述反应优选在醇或水以及碱的存在下进行。所述醇可以是例如甲醇或乙醇。所述碱可以选自碱金属氢氧化物,所述碱金属氢氧化物可以选自氢氧化锂、氢氧化钠和氢氧化钾。所述反应优选在适合的温度下进行。所述温度可以是室温至80℃,例如25℃或40-60℃。所述反应优选进行合适的时间,例如2-5小时或6-15小时,例如2、3或4小时或过夜。
[0127]
在另一些实施方案中,本发明提供通式(IN-6)的化合物或其药学上可接受的盐,
[0128]
[0129]
其中各基团如上述所定义;
[0130]
所述化合物优选自:
[0131]
[0132]
本文所用的术语“适合的”意指对具体化合物或条件的选择会取决于所要进行的特定合成操作以及所要转化的一个或多个分子的特性,但该选择在本领域技术人员的能力范围内。本文所述的所有工艺/方法的步骤均在足以提供所示产物的条件下进行。本领域技术人员会理解,可以改变所有反应条件(包括例如反应溶剂、反应时间、反应温度以及反应是否应在无水或惰性气氛下进行,等等)以优化期望的产物的收率,且这些变化在本领域技术人员的能力范围内。
[0133]
实施例提供制备通式(I)的化合物的示例性方法。本领域技术人员会理解,其他合成路线可用来合成通式(I)的化合物。虽然在实施例中描述和讨论了具体的原料和试剂,但是可替换成其他原料和试剂以提供各种衍生物和/或反应条件。此外,还可参考本公开,利用本领域技术人员公知的常规化学对通过所述方法制得的许多实施例化合物进一步进行修饰。
[0134]
在制备通式(I)的化合物时,可能需要保护中间体的远端官能团(例如羧基或氨基)。对这种保护的需要可随着远端官能团的性质以及制备方法的条件而改变。本领域技术人员容易地确定这样保护的必要性。关于保护基的概述及它们的用途,参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,New York,1991。

实施例

[0135]
以下结合实施例进一步描述本发明,但提供这些实施例并非意在限制本发明的范围。
[0136]
化合物的结构是通过核磁共振( 1H-NMR)或质谱(MS)来确定的。 1H-NMR位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。化学位移是以10 -6(ppm)作为单位给出。
[0137]
MS的测定是使用Agilent(ESI)质谱仪。
[0138]
制备高效液相使用岛津制备高效液相色谱仪。
[0139]
薄层色谱硅胶板(TLC)使用Merck产的铝板(20×20cm),薄层色谱法分离纯化采用的是GF 254(0.4~0.5mm)。
[0140]
反应的监测采用薄层色谱法(TLC)或LC-MS,使用的展开剂体系有:二氯甲烷和甲醇体系、正己烷和乙酸乙酯体系或者石油醚和乙酸乙酯体系。根据化合物的极性不同,需要调节溶剂的体积比,或者需要进一步加入三乙胺等,以实现产物的分离纯化。
[0141]
微波反应使用 Initiator+(400W,RT~300℃)微波反应器。
[0142]
柱色谱法一般使用200~300目硅胶为载体。洗脱剂的体系包括:二氯甲烷和甲醇体系,正己烷和乙酸乙酯体系,溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节,也可以加入少量的三乙胺进行调节。
[0143]
除非特别指出,实施例的反应温度为室温(20℃~30℃)。
[0144]
本发明所使用的试剂购自Acros Organics、Aldrich Chemical Company、上海特伯化学科技有限公司等。
[0145]
在常规的合成法以及实施例和中间体制备例中,各缩写具有以下含义。
[0146]
[表0001]
缩写 含义 缩写 含义
TLC 薄层色谱法 LC-MS 液相色谱-质谱联用仪
DMF N,N-二甲基甲酰胺 DME 乙二醇二甲醚

[0147]
中间体制备例:
[0148]
中间体制备例1:4-((((1R,3r,5S)-8-(4-溴噻唑-2-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑(T1)的制备
[0149]
[0150]
第一步:(E)-2-(三氟甲氧基)苯甲醛肟(T1-b)的制备
[0151]
将2-(三氟甲氧基)苯甲醛(T1-a)(150g,788.98mmol)溶于乙醇(1000mL)和水(1000mL)的混合溶剂中,机械搅拌下加入盐酸羟胺(65.79g,946.77mmol),有白色固体析出,继续加入1M的氢氧化钠水溶液(789mL,788.98mmol)。将反应物在25℃下反应2小时,向混合物加入1M的盐酸(2000mL)调节体系pH为5左右,直接进行抽滤,50℃下烘干过夜,得到化合物(T1-b)(150g,收率:92%)。
[0152]
第二步:(Z)-N-羟基-2-(三氟甲氧基)亚胺苄基氯(T1-c)的制备
[0153]
将化合物(T1-b)(150g,731.23mmol)溶于DMF(1000mL),在0℃机械搅拌下加入N-氯代丁二酰亚胺(117.17g,877.48mmol),0℃反应1小时。向反应物中加入水(2000mL),随后用乙酸乙酯(1000mL×3)萃取。将有机层用无水硫酸钠(500g)干燥,过滤浓缩后得到化合物(T1-c)(160g,收率:91%)。
[0154]
第三步:5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-甲酸甲酯(T1-d)的制备
[0155]
将3-环丙基-3-氧代丙酸甲酯(189.87g,1.34mol)加入化合物(T1-c)(160g,667.84mmol)中,反应物在-5℃搅拌,滴加三乙胺(500mL),-5℃反应过夜。将反应液倒入水(20L)中,机械搅拌30分钟,有固体出现,抽滤得到黄色固体,50℃下烘干过夜,得到化合物(T1-d)(120g,收率:55%)。
[0156]
第四步:(5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲醇(T1-e)的制备
[0157]
将化合物(T1-d)(120g,366.69mmol)溶于甲苯中,反应物在-10℃搅拌,滴加2M的二异丁基氢化铝(550mL,1.10mol),室温反应过夜。将反应液倒入加有冰块的甲醇(1000mL)中,机械搅拌下,加入水(3000mL),进行抽滤,得到黄色固体,滤液用乙酸乙酯(2000mL×3)萃取,无水硫酸钠(500g)干燥,过滤,旋干有机相得到化合物(T1-e)(100g,收率:91%)。
[0158]
第五步:4-(氯甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑(T1-f)的制备
[0159]
将苯并三氮唑(59.65g,500.74mmol)溶于二氯甲烷中,反应物在-5℃搅拌,滴加二氯亚砜(59.65g,501.39mmol),室温搅拌半小时后,加入化合物(T1-e)(100g,334.17mmol)的二氯甲烷溶液(500mL),室温反应6小时。将反应液进行抽滤,滤液旋干得到化合物(T1-f)(106g,收率:94%)。
[0160]
第六步:(1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(T1-g)的制备
[0161]
将化合物(T1-f)(74.77g,328.94mmol)溶于四氢呋喃(500mL)中,随后加入18-冠醚-6(118.56g,448.55mmol)。反应物在0℃搅拌,加入叔丁醇钾(50.33g,448.55mmol),随后移至室温搅拌,加入(1R,3r,5S)-3-羟基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(95g,299.03mmol),室温反应过夜。将反应液旋干,残余物加入乙酸乙酯(1500mL)和水(1500mL),有机相用饱和食盐水(1500mL)洗两次,有机相浓缩后,经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-5/1)得到化合物(T1-g)(85g,收率:56%)。
[0162]
第七步:4-(((1R,3r,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑(T1-h)的制备
[0163]
将化合物(T1-g)(85g,167.15mmol)溶于二氯甲烷(500mL)中,随后加入盐酸二氧六环溶液(4M,500mL)。室温反应过夜。将反应液旋干得到化合物(T1-h)(60g,收率:81%)。
[0164]
第八步:4-((((1R,3r,5S)-8-(4-溴噻唑-2-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氧基)甲基)-5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑(T1)的制备
[0165]
将化合物(T1-h)(7g,15.73mmol)溶于DMF(50mL)中,随后加入N,N-二异丙基乙胺(10.17g,78.67mmol)和2,4-二溴噻唑(4.59g,18.88mmol),100℃反应12小时。反应液加水(300mL),用乙酸乙酯(1000mL),无水硫酸钠(20g)干燥,过滤,有机相浓缩后,经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-6/1)得到化合物(T1)(2.8g,收率:31%)。
[0166]
实施例1:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)苯甲酸(C1)的制备
[0167]
[0168]
第一步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)苯甲酸甲酯(C1-a)的制备
[0169]
室温下,将化合物(T1)(1g,1.75mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中,随后加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(532.50mg,1.93mmol)、[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(143.16mg,195.66μmol)和碳酸钾(483.85mg,3.50mmol),氮气置换2-3遍。80℃反应8小时。反应液用硅藻土抽滤,滤液用乙酸乙酯(100mL×3)洗涤,所得有机相用无水硫酸钠(20g)干燥后过滤浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-6/1)得到本步的标题化合物(1.12g)。
[0170]
MS m/z(ESI):626.1[M+H] +
[0171]
第二步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)苯甲酸(C1)的制备
[0172]
将化合物(C1-a)(390mg,625.31μmol)溶于四氢呋喃(5mL)中,加入氢氧化钠(25.01mg,625.31μmol)的水溶液(2mL),25℃反应4小时。反应液用1M的稀盐酸调至pH为4,用乙酸乙酯(100mL×3)萃取,有机相用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-6/1)得到标题化合物(150mg)。
[0173]
MS m/z(ESI):612.1[M+H] +
[0174]
1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:7.96(s,1H),7.68(dd,J=18.6,7.7Hz,1H),7.58(dd,J=13.9,6.8Hz,1H),7.45(s,1H),4.36(s,1H),4.15(s,1H),2.36(s,1H),2.04(d,J=15.2Hz,1H),1.82(s,1H),1.70(d,J=14.9Hz,1H),1.39-1.26(m,1H),1.13(d,J=22.2Hz,1H)。
[0175]
实施例2:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-3-甲基苯甲酸(C2)的制备
[0176]
[0177]
第一步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-3-甲基苯甲酸甲酯(C2-a)的制备
[0178]
室温下,将化合物(T1)(500mg,876.55mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中,随后加入3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(266.25mg,964.20μmol)、[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(71.58mg,97.83μmol)和碳酸钾(241.93mg,1.75mmol),氮气置换2-3遍。80℃反应8小时。反应液用硅藻土抽滤,滤液用乙酸乙酯(100mL×3)洗涤,所得有机相用无水硫酸钠(20g)干燥后浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-6/1)得到本步的标题化合物(400mg)。
[0179]
MS m/z(ESI):640.2[M+H] +
[0180]
第二步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-3-甲基苯甲酸(C2)的制备
[0181]
将化合物(C2-a)(300mg,468.98μmol)溶于四氢呋喃(5mL)中,加入氢氧化钠(18.76mg,468.98μmol)的水溶液(2mL),25℃下反应4小时。反应液用1M的稀盐酸调至pH为4,用乙酸乙酯(100mL×3)萃取,有机相用无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚∶乙酸乙酯=10∶1-6∶1)得到标题化合物(280mg)。
[0182]
MS m/z(ESI):612.1[M+H] +
[0183]
1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:7.84(s,1H),7.80(d,J=8.1Hz,1H),7.74-7.68(m,1H),7.66(d,J=6.2Hz,1H),7.58(dd,J=13.7,6.4Hz,1H),7.06(s,1H),4.35(s,1H),4.11(s,1H),2.51(d,J=15.3Hz,4H),2.41-2.32(m,1H),2.04(d,J=14.7Hz,1H),1.94(s,1H),1.82(s,2H),1.69(d,J=14.6Hz,1H),1.19-1.14(m,2H),1.10(m,2H).
[0184]
实施例3:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]噻唑-4-基)-3-氟苯甲酸(C3)的制备
[0185]
[0186]
第一步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-3-氟苯甲酸甲酯(C3-a)的制备
[0187]
室温下,将化合物(T1)(650mg,1.14mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中,随后加入3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(248.13mg,1.25mmol)、[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(93.06mg,127.18μmol)和碳酸钾(314.50mg,2.28mmol),氮气置换2-3遍。80℃反应8小时。反应液用硅藻土抽滤,滤液用乙酸乙酯(100mL×3)洗涤,所得有机相用无水硫酸钠(20g)干燥后过滤浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1)得到本步的标题化合物(350mg)。
[0188]
MS m/z(ESI):644.1[M+H] +
[0189]
第二步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]噻唑-4-基)-3-氟苯甲酸(C3)的制备
[0190]
将化合物(C3-a)(390mg,625.31μmol)溶于四氢呋喃(5mL)中,加入氢氧化钠(25.01mg,625.31μmol)的水溶液(2mL),25℃下反应4小时。反应液用1M的稀盐酸调至pH为4,用乙酸乙酯(100mL×3)萃取,有机相用无水硫酸钠干燥浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-6/1)得到标题化合物(1.01g)。
[0191]
MS m/z(ESI):620.1[M+H] +
[0192]
1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:7.71(t,J=7.8Hz,1H),7.66(d,J=7.4Hz,1H),7.63-7.54(m,2H),7.50(d,J=11.7Hz,1H),7.33(s,1H),4.35(s,1H),4.12(s,1H),2.39-2.33(m,1H),2.03(d,J=14.5Hz,1H),1.80(s,2H),1.69(d,J=14.7Hz,1H),1.33-1.24(m,1H),1.16(m,1H),1.10(m,1H)。
[0193]
实施例4:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环 [3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-2-氟苯甲酸(C4)的制备
[0194]
[0195]
第一步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-2-氟苯甲酸甲酯(C4-a)的制备
[0196]
室温下,将化合物(T1)(400mg,701.24μmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中,随后加入2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(152.70mg,771.36μmol)、[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(57.27mg,78.26μmol)和碳酸钾(193.54mg,1.40mmol),氮气置换2-3遍。80℃反应8小时。反应液用硅藻土抽滤,滤液用乙酸乙酯(100mL×3)洗涤,所得有机相用无水硫酸钠(20g)干燥后过滤浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1)得到本步的标题化合物(200mg)。
[0197]
MS m/z(ESI):630.1[M+H] +
[0198]
第二步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-2-氟苯甲酸(C4)的制备
[0199]
将化合物(C4-a)(200.00mg,310.73μmol)溶于四氢呋喃(5mL)中,加入氢氧化钠(12.43mg,310.73μmol)的水溶液(2mL),25℃下反应4小时。反应液用1M的稀盐酸调至pH为4,用乙酸乙酯(100mL×3)萃取,有机相用无水硫酸钠干燥浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-6/1)得到标题化合物(170mg)。
[0200]
MS m/z(ESI):620.1[M+H] +
[0201]
1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:7.85(d,J=8.1Hz,1H),7.72(dd,J=17.5,10.3Hz,1H),7.66(d,J=7.3Hz,1H),7.58(dd,J=13.5,6.3Hz,1H),7.37(d,J=1.9Hz,1H),4.36(s,1H),4.15(s,1H),2.37(d,J=4.9Hz,1H),2.03(d,J=14.7Hz,1H),1.82(s,2H),1.70(d,J=14.6Hz,1H),1.33-1.24(m,1H),1.15(dd,J=11.0,6.1Hz,1H),1.10(d,J=3.0Hz,1H)。
[0202]
实施例5:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-2-(三氟甲基)苯甲酸(C5)的制备
[0203]
[0204]
第一步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(C5-a)的制备
[0205]
室温下,将化合物(T1)(0.4g,701.24μmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中,随后加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(277.78mg,841.48μmol)、[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(57.27mg,70.12μmol)和碳酸钾(193.83mg,1.40mmol),氮气置换2-3遍。80℃反应8小时。反应液用硅藻土抽滤,滤液用乙酸乙酯(100mL×3)洗涤,所得有机相用无水硫酸钠(20g)干燥后过滤浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=15/1-8/1)得到本步的标题化合物(0.36g)。
[0206]
MS m/z(ESI):694.1[M+H] +
[0207]
第二步:4-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)-2-(三氟甲基)苯甲酸(C5)的制备
[0208]
将化合物(C5-a)(360.00mg,518.99μmol)溶于四氢呋喃(5mL)中,加入氢氧化钠(20.71mg,518.99μmol)的水溶液(2mL),25℃下反应4小时。反应液用1M的稀盐酸调至pH为4,用乙酸乙酯(100mL×3)萃取,有机相用无水硫酸钠干燥浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-6/1)得到标题化合物(45mg)。
[0209]
MS m/z(ESI):680.1[M+H] +
[0210]
1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:8.21(s,1H),8.16(d,J=7.3Hz,1H),7.83(d,J=7.2Hz,1H),7.64(dd,J=18.9,11.7Hz,1H),7.57(d,J=12.8Hz,1H),4.33(s,1H),4.12(s,1H),2.33(s,1H),2.01(d,J=12.4Hz,1H),1.79(s,1H),1.68(m,1H),1.19-1.01(m,1H)。
[0211]
实施例6:5-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)吡啶甲酸(C6)的制备
[0212]
[0213]
第一步:5-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)吡啶甲酸甲酯(C6-a)的制备
[0214]
室温下,将化合物(T1)(50mg,87.65μmol溶于1,4-二氧六环(20mL)中,随后加入5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶甲酸甲酯(27.67mg,105.19μmol)、[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(7.16mg,8.77μmol)和碳酸钾(12.11mg,87.65μmol),氮气置换2-3遍。80℃反应8小时。反应液用硅藻土抽滤,滤液用乙酸乙酯(100mL×3)洗涤,所得有机相用无水硫酸钠(20g)干燥后过滤浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-6/1)得到本步的标题化合物(20mg)。
[0215]
MS m/z(ESI):626.1[M+H] +
[0216]
第二步:5-(2-((1R,3r,5S)-3-((5-环丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)异噁唑-4-基)甲氧基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)噻唑-4-基)吡啶甲酸(C6)的制备
[0217]
将化合物(C6-a)(200mg,316.61μmol)溶于四氢呋喃(5mL)中,加入氢氧化钠(12.66mg,316.61μmol)的水溶液(2mL),25℃下反应4小时。反应液用1M的稀盐酸调至pH为4,用乙酸乙酯(100mL×3)萃取,有机相用无水硫酸钠干燥后过滤浓缩,所得剩余物经硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂:石油醚/乙酸乙酯=10/1-6/1)得到标题化合物(25mg)。
[0218]
MS m/z(ESI):618.1[M+H] +
[0219]
1H-NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ:8.88(s,1H),8.20(dd,J=8.1,2.1Hz,1H),7.93(d,J=8.2Hz,1H),7.71-7.61(m,1H),7.55(t,J=7.5Hz,1H),7.44(s,1H),4.32(s,1H),4.11(s,1H),3.52(s,1H),2.33(dd,J=10.8,5.9Hz,1H),2.01(d,J=13.7Hz,1H),1.79(s,2H),1.67(d,J=14.5Hz,1H),1.13(m,1H),1.09-1.03(m,1H)。
[0220]
生物学测定
[0221]
实验例1:胆汁酸受体FXR辅激活因子结合实验
[0222]
1.试验方法
[0223]
采用Invitrogen·LanthaScreen TM TR-FRET Farnesoid X Receptor Coactivator Assay试剂盒测定化合物对FXR的激活作用。
[0224]
将受体与不同浓度的待测化合物在室温下孵育后,加入荧光标记的辅激活因子短肽及铽标记的抗体,在室温下反应后检测FRET信号。以无受体蛋白组为空白,使用四参数拟合方程计算待测化合物对FXR的激活活性EC 50及最大激活效应值E max
[0225]
y=Emin+(Emax-Emin)/(1+(x/EC 50)^(-Hillslope))
[0226]
其中y为FRET结合信号,Emax和Emin分别为拟合曲线的上渐近线估值和下渐近线估值,x为化合物的对数浓度,Hillslope为曲线斜率。
[0227]
另外,以鹅去氧胆酸(即CDCA)为阳性对照,通过以下公式计算本发明所测试化合物的相对激活效应:
[0228]
相对激活效应(%)=(Emax/Emax’)×100%
[0229]
其中,Emax代表本发明所测试化合物的最大激活效应值,Emax’代表CDCA的最大激活效应值,二者均通过上文所示的公式计算得到。
[0230]
2.试验结果
[0231]
表1.本发明所测试的化合物对FXR的EC 50
[0232]
[表0002]
化合物编号 EC 50(μM)
CDCA 4.43
C3 0.133
C4 0.022
C5 0.002
C6 0.031

[0233]
表1的数据显示,相对于鹅去氧胆酸(CDCA)的值为4.43μM的EC 50,所测试的化合物具有更低的EC 50(0.002-0.133μM),表明本发明化合物对FXR具有更好的激活活性。
[0234]
表2.本发明所测试的化合物对FXR的相对激活效应
[0235]
[表0003]
化合物编号 相对激活效应
CDCA 100%
C3 154%
C4 137%
C5 196%
C6 177%

[0236]
表2的数据显示,本发明所测试的化合物的最大激活效应值较鹅去氧胆酸(CDCA)的最大激活效应值更高,说明本发明化合物对FXR具有很好的最大激活效应。
[0237]
综合表1和表2的EC 50值和相对激活效应数据显示,本发明的化合物对FXR具有较好的激活作用。
[0238]
实验例2.荧光素酶报告基因检测实验
[0239]
1.试验方法
[0240]
人胚胎肾细胞HEK293培养于含有10%FBS的DMEM培养基中。共转染质粒,使其高表达FXR和人源BSEP荧光素酶报告基因。将转染细胞消化、重悬,计数,然后接种于多孔板中。加入10μL不同浓度待测化合物于多孔板中,使其终浓度分别为64μM、16μM、4μM、1μM、0.25μM、0.0625μM、0.0156μM、0.0039μM、0.000975μM、0.000244μM、0μM,DMSO终浓度为0.5%。待测化合物与细胞孵育18h后,加入Brigh-GloTM检测试剂,用多功能全自动酶标仪检测化学发光单位值(RLU),以空白孔(不含待测化合物)信号值为100%,计算各待测化合物浓度下的相对信号百分比(%)。用SigmaPlot 10软件采用四参数模型拟合所测试的化合物EC 50和最大激动效应Emax(相对信号百分比)。
[0241]
2.试验结果
[0242]
测定结果列于下表3。
[0243]
表3
[0244]
[表0004]
化合物编号 EC 50(μM) Emax
C1 0.058±0.023 252%
C2 0.033±0.018 320%
C3 0.037±0.019 343%
C4 0.021±0.006 322%
C5 0.014±0.005 301%

[0245]
表3的数据显示,所测试的的化合物在体外细胞测定中的EC 50值在0.014μM~0.058μM之间,Emax值大于250%。表明本发明的化合物在体外细胞测定中具有良好的FXR激活活性。
[0246]
实验例3:肝微粒体稳定性实验
[0247]
1.实验方法:
[0248]
待测化合物(50μL)与各种属肝微粒体(100μL)混合,37℃预孵5分钟后,加入NADPH(50μL),孵育0、30、60分钟,待测化合物、NADPH和肝微粒体酶的孵育浓度分别为1μM、1mM和0.5mg/mL。加入冰乙腈(200μL)终止反应后加入适当体积内标(利伐沙班),涡旋、离心取上清,检测。
[0249]
检测方法:
[0250]
LC-MS/MS,质谱为API 5500,液相为Shimadzu LC-30AD系统。色谱柱为Hypersil GOLD C18,1.9μm粒径,50×2.1mm;流动相A相为水+0.1%甲酸,B相为乙腈;流速为0.55mL/min,柱温为40℃。采用离子源为ESI源正离子模式,扫描方式为多重反应监测(MRM)。
[0251]
通过测定不同孵育时间的样品浓度,以“Ln(药物残留量%)”对“孵育时间”作图获得速率常数,从而计算出药物的半衰期与肝清除率,以药物半衰期与肝清除率值来评价药物在肝微粒体中的代谢稳定性。
[0252]
2.实验结果:
[0253]
表4
[0254]
[0255]
[0256]
表5
[0257]
[0258]
结论:从表4和表5的实验数据可以看出,本发明的化合物在肝微粒体中清除较慢,稳定性较好,具有良好的药物代谢动力学性质。
[0259]
实验例4.大鼠药代动力学(PK)研究
[0260]
分别通过静脉(IV)和灌胃(PO)给予雄性SD大鼠本发明的化合物,考察药代动力学特点。IV和PO的给药剂量分别是1mg/kg和5mg/kg,IV给药溶媒系统为5%DMSO:5%Solutol:90%生理盐水,PO给药溶媒系统为0.5%MC(甲基纤维素)。IV和PO给药后在不同时间点收集血液,血液采用K2-EDTA抗凝,离心后得到血浆样品,保存于-80℃。血浆样品经沉淀蛋白处理后进行LC-MS/MS分析。
[0261]
应用WinNonlin 6.3软件,采用非房室模型计算药代动力学参数,结果见表6和7。
[0262]
表6.IV给药的化合物在大鼠体内的药代动力学参数
[0263]
[0264]
表6的数据显示,通过以1mg/kg的剂量IV给药的本发明化合物C3、C5在大鼠体内具有优良的药物暴露量。
[0265]
表7.PO给药的化合物在大鼠体内的药代动力学参数
[0266]
[0267]
表7的数据显示,通过以5mg/kg的剂量PO给药的本发明化合物C3、C5在大鼠体内具有优良的药物暴露量和生物利用度。
[0268]
综合表6和表7,本发明的化合物C3、C5通过IV和PO给药在大鼠体内具有优良的血浆药物暴露量和口服生物利用度。
[0269]
本发明的其它化合物也具有较好的AUC last值、C max值以及生物利用度,在大鼠体内具有较好的药代动力学性质。
[0270]
实验例5.小鼠脂肪肝模型药效试验
[0271]
试验方法
[0272]
采用8-10周龄的雄性C57小鼠(购自维通利华),动物造模前按体重随机分为5组,分别是正常组(组1)、模型组(组2)、C3化合物给药组(30mg/kg)。正常组给予正常饲料,模型组和C3化合物给药组喂食MCD饲料(蛋氨酸胆碱缺乏饲料,Research Diets)。造模的同时,C3化合物组每天单次灌胃给药,连续给药28天。正常组和模型组给予0.5%MC(甲基纤维素)。详见表8。
[0273]
表8 分组及给药表
[0274]
[0275]
检测指标
[0276]
药效指标:第28天给药后解剖动物,取肝脏HE染色,进行病理评分(评分标准参考《中国非酒精性脂肪性肝病诊疗指南》)。
[0277]
药代动力学指标:第28天给药后0.5h、1h、4h,向动物取血、肝脏和小肠组织样品,使用LC-MS/MS检测药物浓度。
[0278]
试验结果
[0279]
药效结果:由图1可见,模型组脂肪变评分显著高于正常组,说明成功获得小鼠脂肪肝模型。此外,C3化合物30mg/kg剂量组脂肪变评分与模型组相比有显著差异。
[0280]
药代动力学结果:实验中获得的药代动力学数据如表9中所示。
[0281]
表9 由C3体内药效试验获得的PK数据(30mg/kg)
[0282]
[表0005]
样本 血浆 小肠
时间点/浓度 ng/ml ng/g ng/g
0.25h 373±242 3263±1429 1115±488
1h 1353±204 12700±4260 4940±57
4h 2212±462 13040±4218 6105±2471

[0283]
由上表数据可见,化合物C3在肝肠均有分布,且肝肠暴露量均高于血浆,肝脏暴露量更高。
[0284]
试验结论
[0285]
化合物C3能够抑制MCD饲料诱导的肝脏脂肪病变,且相对于模型组有显著改善。化合物C3在肝脏分布高于血浆,表明其有效地在靶点部位富集。
[0286]
除本文中描述的那些实施方案外,根据前述描述,本发明的多种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。

权利要求书

[权利要求 1]
通式(I)的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药, 其中: X为CH或N;并且 R选自氢、卤素、C 1-6烷基和C 1-6卤代烷基。
[权利要求 2]
权利要求1的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,其中R选自氢、氟、甲基和三氟甲基。
[权利要求 3]
权利要求1或2中的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,其中所述化合物选自:
[权利要求 4]
药物组合物,其包含至少一种权利要求1-3中任一项的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,以及一种或多种药学可接受的载体。
[权利要求 5]
权利要求4的药物组合物,其为选自以下的形式:片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂和糖浆剂。
[权利要求 6]
药盒,其包括: a)第一容器,其包含作为第一治疗剂的至少一种权利要求1-3中任一项的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药,或作为第一药物组合物的权利要求4或5的药物组合物; b)任选存在的第二容器,其包含作为第二治疗剂的至少一种其他治疗剂,或者作为第二药物组合物的包含所述其他治疗剂的药物组合物;和 c)任选存在的包装说明书。
[权利要求 7]
权利要求1-3中任一项的化合物或者其立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(如水合物)、药学可接受的盐、酯、代谢物、N-氧化物、其化学保护的形式或前药、或者权利要求4或5的药物组合物在制备用于预防或治疗由类法尼醇X受体介导的疾病或病症的药物中的用途。
[权利要求 8]
制备权利要求1-3中任一项的通式(I)的化合物的方法,所述方法包括以下步骤: 其中: Hal 1、Hal 2和Hal 3各自独立地为相同或不同的卤素,例如F、Cl、Br或I,优选为Cl或Br; PG 1为氨基保护基,优选为叔丁氧羰基(Boc); PG 2为羧基保护基,优选为C 1-6烷基,更优选为甲基; Y为硼酸或硼酸酯基团,优选为-B(OH) 2或者 其余基团如权利要求1或2中所定义; 各步骤的反应条件如下: 步骤A:使化合物IN-1与化合物IN-2反应以得到化合物IN-3; 步骤B:移除化合物IN-3中的PG 1基团,以得到化合物IN-4; 步骤C:使化合物IN-4与化合物IN-a反应以得到化合物IN-5; 步骤D:使化合物IN-5与化合物IN-b反应以得到化合物IN-6;以及 步骤E:移除化合物IN-6中的PG 2基团,以得到通式(I)的化合物。
[权利要求 9]
通式(IN-6)的化合物或其药学上可接受的盐, 其中各基团如权利要求1、2或8中所定义; 所述化合物优选自:

附图

[ 图 1]