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1. WO2020069918 - PROCÉDÉ D'ANALYSE POUR L'ARNM DE CELLULES INDIVIDUELLES IRRADIÉES DE LUMIÈRE

Numéro de publication WO/2020/069918
Date de publication 09.04.2020
N° de la demande internationale PCT/EP2019/075683
Date du dépôt international 24.09.2019
CIB
C12N 15/65 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
63Introduction de matériel génétique étranger utilisant des vecteurs; Vecteurs; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci; Régulation de l'expression
65utilisant des marqueurs
C12Q 1/6809 2018.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
QPROCÉDÉS DE MESURE OU DE TEST FAISANT INTERVENIR DES ENZYMES, DES ACIDES NUCLÉIQUES OU DES MICRO-ORGANISMES; COMPOSITIONS OU PAPIERS RÉACTIFS À CET EFFET; PROCÉDÉS POUR PRÉPARER CES COMPOSITIONS; PROCÉDÉS DE COMMANDE SENSIBLES AUX CONDITIONS DU MILIEU DANS LES PROCÉDÉS MICROBIOLOGIQUES OU ENZYMOLOGIQUES
1Procédés de mesure ou de test faisant intervenir des enzymes, des acides nucléiques ou des micro-organismes; Compositions à cet effet; Procédés pour préparer ces compositions
68faisant intervenir des acides nucléiques
6809Méthodes de détermination ou d’identification des acides nucléiques faisant intervenir la détection différentielle
C12Q 1/6897 2018.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
QPROCÉDÉS DE MESURE OU DE TEST FAISANT INTERVENIR DES ENZYMES, DES ACIDES NUCLÉIQUES OU DES MICRO-ORGANISMES; COMPOSITIONS OU PAPIERS RÉACTIFS À CET EFFET; PROCÉDÉS POUR PRÉPARER CES COMPOSITIONS; PROCÉDÉS DE COMMANDE SENSIBLES AUX CONDITIONS DU MILIEU DANS LES PROCÉDÉS MICROBIOLOGIQUES OU ENZYMOLOGIQUES
1Procédés de mesure ou de test faisant intervenir des enzymes, des acides nucléiques ou des micro-organismes; Compositions à cet effet; Procédés pour préparer ces compositions
68faisant intervenir des acides nucléiques
6897faisant intervenir des gènes rapporteurs liés de façon fonctionnelle à des promoteurs
CPC
C12N 15/65
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
65using markers
C12Q 1/6809
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
68involving nucleic acids
6809Methods for determination or identification of nucleic acids involving differential detection
C12Q 1/6897
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
68involving nucleic acids
6897involving reporter genes operably linked to promoters
Déposants
  • LEIBNIZ UNIVERSITÄT HANNOVER [DE]/[DE]
Inventeurs
  • HEISTERKAMP, Alexander
  • KALIES, Stefan
  • MÜLLER, Dominik
Mandataires
  • TARUTTIS, Stefan
Données relatives à la priorité
10 2018 216 872.501.10.2018DE
Langue de publication allemand (DE)
Langue de dépôt allemand (DE)
États désignés
Titre
(DE) ANALYSEVERFAHREN FÜR mRNA EINZELN LICHTBESTRAHLTER ZELLEN
(EN) ANALYSIS METHOD FOR MRNA OF INDIVIDUALLY LIGHT-IRRADIATED CELLS
(FR) PROCÉDÉ D'ANALYSE POUR L'ARNM DE CELLULES INDIVIDUELLES IRRADIÉES DE LUMIÈRE
Abrégé
(DE)
Verfahren zur Analyse der Nukleinsäuren, insbesondere der mRNA von Zellen, die einzeln mit Licht bestrahlt wurden. In dem Verfahren werden Nukleinsäurekonstrukte in Zellen eingebracht, um genetisch manipulierte Zellen zu erzeugen, die ein durch Einstrahlung von Licht aktivierbares Protein mit der Aktivität einer DNA-Rekombinase kodieren und durch die Wirkung der Rekombinase aus einem weiteren Nukleinsäurekonstrukt verschiedene Markerproteine exprimieren, die optisch detektierbar sind. Mittels der Markerproteine können Zellen optisch, insbesondere lichtmikroskopisch, identifiziert und lokalisiert werden, die die Markerproteine exprimieren, z.B. mittels FACS, und die Nukleinsäuren vereinzelter Zellen, insbesondere deren mRNA, kann analysiert werden, z.B. durch Sequenzieren oder Hybridisieren. Bevorzugt wird das Verfahren ohne Isolierung bzw. Vereinzelung und Abtrennung mit Licht bestrahlter Zellen vor der Analyse ihrer Nukleinsäuren durchgeführt.
(EN)
A method of analysis of the nucleic acids, especially the mRNA, of cells that have been irradiated individually with light. In the method, nucleic acid constructs are introduced into cells in order to produce genetically manipulated cells that encode a protein activatable by incidence of light and having the activity of a DNA recombinase, and, through the effect of the recombinase, express various marker proteins from a further nucleic acid construct that are optically detectable. By means of the marker proteins, it is possible by optical means, especially by light microscopy, to identify and localize cells that express the marker proteins, for example by means of FACS, and to analyse the nucleic acids of isolated cells, especially the mRNA thereof, for example by sequencing or hybridizing. The method is preferably conducted without isolation or individualization and separation of light-irradiated cells prior to the analysis of their nucleic acids.
(FR)
Procédé d'analyse des acides nucléiques, en particulier de l'ARNm de cellules qui ont été irradiées de lumière individuellement. Dans le procédé, des constructions d'acide nucléique sont introduites dans des cellules, pour générer des cellules manipulées génétiquement, qui codent une protéine pouvant être activée par irradiation, ayant l'activité d'une recombinase d'ADN et qui exprime à partir d'une autre construction d'acide nucléique par l'effet de la recombinase différentes protéines marqueurs qui peuvent être détectées optiquement. Les protéines marqueurs permettent d'identifier et de localiser optiquement, en particulier par microscope optique, des cellules qui expriment les protéines marqueurs, p. ex. par FACS, et les acides nucléiques des cellules individuelles, en particulier leur ARNm, peuvent être analysés, p. ex. par séquençage ou hybridation. Le procédé est exécuté de préférence sans l'isolement ni la séparation de cellules irradiées de lumière avant l'analyse de leurs acides nucléiques.
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