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1. WO2020022476 - SYSTÈME DE MODIFICATION HAUTEMENT EFFICACE DE SÉQUENCES CIBLES

Numéro de publication WO/2020/022476
Date de publication 30.01.2020
N° de la demande internationale PCT/JP2019/029381
Date du dépôt international 26.07.2019
CIB
C12N 15/09 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
C12N 15/86 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
63Introduction de matériel génétique étranger utilisant des vecteurs; Vecteurs; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci; Régulation de l'expression
79Vecteurs ou systèmes d'expression spécialement adaptés aux hôtes eucaryotes
85pour cellules animales
86Vecteurs viraux
CPC
C12N 15/09
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
C12N 15/86
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
15Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
09Recombinant DNA-technology
63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
85for animal cells
86Viral vectors
Déposants
  • 株式会社IDファーマ ID PHARMA CO., LTD. [JP]/[JP]
Inventeurs
  • 草野 好司 KUSANO, Kohji
  • 木藤古 孝行 KITOGO, Takayuki
  • 朱 亜峰 SHU, Tsugumine
  • 森 豊隆 MORI, Toyotaka
Mandataires
  • 春名 雅夫 HARUNA, Masao
  • 清水 初志 SHIMIZU, Hatsushi
  • 山口 裕孝 YAMAGUCHI, Hirotaka
  • 刑部 俊 OSAKABE, Suguru
  • 井上 隆一 INOUE, Ryuichi
  • 佐藤 利光 SATO, Toshimitsu
  • 新見 浩一 SHIMMI, Hirokazu
  • 小林 智彦 KOBAYASHI, Tomohiko
  • 小寺 秀紀 KODERA, Hideki
  • 大関 雅人 OHZEKI, Masato
  • 五十嵐 義弘 IGARASHI, Yoshihiro
  • 川本 和弥 KAWAMOTO, Kazuya
Données relatives à la priorité
2018-14179827.07.2018JP
Langue de publication japonais (JA)
Langue de dépôt japonais (JA)
États désignés
Titre
(EN) SYSTEM FOR HIGHLY EFFICIENT MODIFICATION OF TARGET SEQUENCES
(FR) SYSTÈME DE MODIFICATION HAUTEMENT EFFICACE DE SÉQUENCES CIBLES
(JA) 標的配列を高効率で改変するシステム
Abrégé
(EN)
Provided is a technology for more efficient genetic modification, including target gene disruption, using a guide RNA-dependent nuclease. The present invention also addresses the problem of different cleavage efficiencies for each target sequence. Specifically, by the present invention, a new system was developed in which, when developing a target cleavage system that utilizes a guide RNA-dependent nuclease, only the nuclease gene is integrated into a negative-strand RNA viral vector, which has the properties of high infection efficiency and high transgene expression, and, after the viral vector has been introduced into cells in advance and the nuclease has been caused to be expressed, guide RNA is separately supplied to the cells. As a result, an increase in cleavage efficiency and a reduction in recleavage were both successfully achieved, and the efficiency of target gene modification was improved. The present invention is useful as an efficient genetic modification technology, and also has the feature of making it possible to adjust the enhancement and attenuation of genetic modification efficiency by adjusting cleavage efficiency through adjustment of the amount of guide RNA that is introduced.
(FR)
La présente invention concerne une technologie pour la modification génétique plus efficace, comprenant la rupture de gène cible, utilisant une nucléase dépendante de l’ARN guide. La présente invention aborde également le problème de différentes efficacités de clivage pour chaque séquence cible. Spécifiquement, par la présente invention, un nouveau système a été élaboré dans lequel, lors du développement d’un système de clivage cible qui utilise une nucléase dépendante de l’ARN guide, uniquement le gène nucléase est intégré dans un vecteur viral d’ARN à brin négatif, qui présente les propriétés d’efficacité d’infection élevées et d’expression de transgène élevée, et, après que le vecteur viral a été introduit dans les cellules à l’avance et que la nucléase a été amenée à s’exprimer, l’ARN guide est séparément alimenté aux cellules. En résultat, une augmentation dans l’efficacité de clivage et une réduction du re-clivage étaient à la fois atteintes avec succès, et l’efficacité de la modification de gène cible était améliorée. La présente invention est utile comme technologie de modification génétique efficace, et possède également la caractéristique de rendre possible l’ajustement de l’amélioration et de l’atténuation de l’efficacité de modification génétique en ajustant l’efficacité de clivage par l’ajustement de la quantité d’ARN guide qui est introduit.
(JA)
本発明は、ガイドRNA依存性ヌクレアーゼを用いた標的遺伝子破壊を含む遺伝子改変をより効率的に行うための技術を提供する。また、標的配列ごとに切断効率が異なるという課題に対応する。具体的には本発明は、ガイドRNA依存性ヌクレアーゼを利用した標的切断系を構築するにあたり、感染効率が高く、導入遺伝子を高発現させる特性を持つマイナス鎖RNAウイルスベクターにヌクレアーゼ遺伝子だけを搭載させ、これをあらかじめ細胞に導入してヌクレアーゼを発現させた後で、ガイドRNAを別途細胞に供給する新たなシステムを開発した。これにより、切断効率の上昇と再切断の低下を両立させることに成功し、標的遺伝子改変効率の向上を実現できた。本発明は、効率的な遺伝子改変技術として有用であるとともに、ガイドRNAの導入量の調整により切断効率を調節することによって、遺伝子改変効率の向上と減衰を調節できるという特長を持つ。
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