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1. (WO2018219953) CAPTEURS, MÉTHODES ET KITS DE DÉTECTION DE NADPH SUR L A BASE D'UN TRANSFERT D'ÉNERGIE DE RÉSONANCE

Pub. No.:    WO/2018/219953    International Application No.:    PCT/EP2018/064076
Publication Date: Fri Dec 07 00:59:59 CET 2018 International Filing Date: Wed May 30 01:59:59 CEST 2018
IPC: C12Q 1/00
C12Q 1/26
C12Q 1/66
C12N 9/06
G01N 33/542
G01N 33/573
Applicants: ECOLE POLYTECHNIQUE FÉDÉRALE DE LAUSANNE (EPFL)
Inventors: YU, Qiuliyang
JOHNSSON, Kai Peter
Title: CAPTEURS, MÉTHODES ET KITS DE DÉTECTION DE NADPH SUR L A BASE D'UN TRANSFERT D'ÉNERGIE DE RÉSONANCE
Abstract:
L'invention concerne la détection du cofacteur nicotinamide adénine dinucléotide phosphate (NADPH) réduit. L'invention concerne une molécule de détection pour la détection basée sur le transfert d'énergie de résonance (RET) de NADPH, le détecteur comprenant un segment A connecté par l'intermédiaire d'une liaison à un segment B, chacun du segment A et du segment B comprenant un membre d'une paire RET comprenant un fragment donneur et un fragment accepteur, caractérisé en ce que (i) le segment A comprend une protéine de liaison (BP) pour NADPH, la BP étant la dihydrofolate réductase (DHFR ; EC 1.5.1.3) ou un homologue fonctionnel, un fragment, un dérivé ou un variant de celle-ci, montrant les propriétés de liaison au NADPH souhaitées, et la BP comprenant un domaine de protéine hétérologue inséré au niveau de ou remplaçant au moins une partie de la région correspondant à des positions (20) à (27) de E. coli DHFR, ledit domaine de protéine hétérologue comprenant l'élément de la paire RET ; (ii) le segment B comprend un ligand (L) capable de se lier de façon intramoléculaire à ladite BP uniquement en présence de NADPH ; de sorte que la fraction donneuse et la fraction acceptrice soient en juxtaposition appropriée pour produire un signal RET lorsque L est lié à BP, et la liaison induite par NADPH de L à BP conduisant à une augmentation de l'efficacité de RET.