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1. (WO2018162376) MÉTHODE DE RECHERCHE DE VARIANTS D'ANTICORPS SPÉCIFIQUES D'UN ANTIGÈNE ALTERNATIF

Pub. No.:    WO/2018/162376    International Application No.:    PCT/EP2018/055278
Publication Date: Fri Sep 14 01:59:59 CEST 2018 International Filing Date: Tue Mar 06 00:59:59 CET 2018
IPC: C12N 15/10
C40B 30/02
G06F 19/22
C12Q 1/6811
Applicants: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG
HOFFMANN-LA ROCHE INC.
Inventors: GEORGES, Guy
KLOSTERMANN, Stefan
TISSOT, Alain
ROS, Francesca
BUJOTZEK, Alexander
WRZODEK, Clemens
SCHULTZ, Frederic
Title: MÉTHODE DE RECHERCHE DE VARIANTS D'ANTICORPS SPÉCIFIQUES D'UN ANTIGÈNE ALTERNATIF
Abstract:
La présente invention concerne une méthode de sélection d'un variant d'un acide nucléique codant pour un domaine variable d'anticorps parental, la séquence d'acides aminés de domaine variable d'anticorps parental codée par ledit acide nucléique de codage ayant au moins un point chaud d'aptitude au développement, la méthode comprenant les étapes consistant à (i) fournir une multitude d'échantillons contenant de l'ADN (matériau génomique d'un lymphocyte B sécrétant des anticorps) comprenant chacun un ou plusieurs acides nucléiques codant pour un domaine variable d'anticorps ; (ii) effectuer une amplification par PCR dudit acide nucléique codant pour un domaine variable d'anticorps de l'étape (i) à l'aide d'amorces spécifiques à une séquence consensus pour obtenir des produits d'amplification (lesdites amorces spécifiques à une séquence consensus se liant à des séquences consensus qui sont communes à une pluralité de gènes dans l'ensemble des loci génétiques, générant ainsi un pool de produits d'amplification); (iii) séquencer une pluralité desdits produits d'amplification obtenus à l'étape (ii) afin de déterminer la proportion relative de chaque nucléotide à chaque position dans une lecture de séquençage ; (iv) réaliser un alignement de séquence entre les résultats de lecture de séquençage de l'étape (iii) et l'acide nucléique codant pour le domaine variable d'anticorps parental ; (v) réaliser un classement basé sur l'identité/l'homologie de séquence de l'acide nucléique codant pour le domaine variable d'anticorps dans ledit alignement de séquence avec l'acide nucléique codant pour le domaine variable d'anticorps parental qui est la séquence parfaite/modèle/référence ; et (vi) sélectionner l'acide nucléique codant pour le domaine variable d'anticorps variant sur la base du classement de séquence de l'étape (v), le variant sélectionné dans l'étape (vi) étant sélectionné de telle sorte que le point chaud d'aptitude au développement est retiré.