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1. (WO2018141127) MÉTHODE DE CONSTRUCTION POUR MODÈLE DE RAT IMMUNODÉFICIENT
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N° de publication : WO/2018/141127 N° de la demande internationale : PCT/CN2017/078292
Date de publication : 09.08.2018 Date de dépôt international : 27.03.2017
CIB :
C12N 15/89 (2006.01) ,A01K 67/027 (2006.01)
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
12
BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
N
MICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15
Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09
Technologie d'ADN recombinant
87
Introduction de matériel génétique étranger utilisant des procédés non prévus ailleurs, p.ex. co-transformation
89
utilisant la micro-injection
A NÉCESSITÉS COURANTES DE LA VIE
01
AGRICULTURE; SYLVICULTURE; ÉLEVAGE; CHASSE; PIÉGEAGE; PÊCHE
K
ÉLEVAGE; AVICULTURE; PISCICULTURE; APICULTURE; PÊCHE; OBTENTION D'ANIMAUX, NON PRÉVUE AILLEURS; NOUVELLES RACES D'ANIMAUX
67
Elevage ou obtention d'animaux, non prévus ailleurs; Nouvelles races d'animaux
027
Nouvelles races de vertébrés
Déposants :
南方医科大学 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY [CN/CN]; 中国广东省广州市 白云区沙太南路1023号-1063号 1023-1063, South Shatai Road, Baiyun District Guangzhou, Guangdong 510000, CN
广东圣赛生物科技有限公司 GUANGDONG SHENGSAI BIOTECHNOLOGY CO., LTD [CN/CN]; 中国广东省佛山市 顺德区容桂街道办事处小黄圃社区居民委员会朝桂南路1号高骏科技创新中心4座1503号之二 Building 4, #1503 1 Chaogui South Road, Shunde District Foshan, Guangdong 528300, CN
Inventeurs :
徐洋 XU, Yang; CN
Mandataire :
北京东正专利代理事务所(普通合伙) BEIJING EASTKING PATENT AGENT FIRM; 中国北京市 海淀区北三环西路32号恒润国际大厦1807室 Room 1807, Hengrun International Building, No.32 North Third Ring Road West, Haidian District Beijing 100086, CN
Données relatives à la priorité :
201710065515.306.02.2017CN
Titre (EN) CONSTRUCTION METHOD FOR IMMUNODEFICIENT RAT MODEL
(FR) MÉTHODE DE CONSTRUCTION POUR MODÈLE DE RAT IMMUNODÉFICIENT
(ZH) 一种免疫缺陷大鼠模型的构建方法
Abrégé :
(EN) A construction method for an immunodeficient rat model. The method comprises the following steps: performing in-vitro transcription on Prkdc of rat DNA, and gRNA having IL2Rγ gene knocked out, respectively; mixing with in-vitro transcribed CAS9 protein mRNA respectively; freezing in an RNA enzyme-free ultrapure water to obtain corresponding injections A and B; performing amplification and purification on human SIRPa genomic DNA and freezing in an RNA enzyme-free ultrapure water to obtain an injection C; using a microinjection method, respectively injecting the injections A and B into the cytoplasm of different rat zygotes, and injecting the injection C into the pronucleus of the other rat zygote; implanting the three zygotes into different pseudopregnant females for cultivating to obtain second-generation rats A, B and C respectively; performing hybridization on the second-generation rats A, B and C to reproduce F1 generation; and performing hybridization on the F1 generation to obtain the immunodeficient rat model in which the IL2Rγ and Prkdc genes are knocked out and the human SIRPa gene is transferred. Human cells can be effectively implanted into the rat model; the model is in accordance with text indexes; and strain background is pure.
(FR) L'invention concerne une méthode de construction d'un modèle de rat immunodéficient. La méthode comprend les étapes suivantes : réalisation d'une transcription in vitro de la Prkdc de l'ADN de rat, et de l'ARNg ayant un gène IL2Rγ inactivé, respectivement; mélange avec l'ARNm de protéine CAS9 transcrit in vitro respectivement; congélation dans une eau ultrapure exempte d'enzyme d'ARN pour obtenir des injections correspondantes A et B; réalisation d'une amplification et d'une purification de l'ADN génomique SIRPa humain et congélation dans une eau ultrapure exempte d'enzyme d'ARN pour obtenir une injection C; utilisation d'une méthode de micro-injection, respectivement injection des injections A et B dans le cytoplasme de différents zygotes de rat, et injection de l'injection C dans le pronoyau de l'autre zygote de rat; implantation des trois zygotes dans différentes femelles pseudo-enceintes pour croissance pour obtenir des rats de seconde génération A, B et C respectivement; réalisation d'une hybridation sur les rats de seconde génération A, B et C pour reproduire la génération F1; et réalisation d'une hybridation sur la génération F1 pour obtenir le modèle de rat immunodéficient dans lequel les gènes IL2Rγ et Prkdc sont inactivés et le gène SIRPa humain est transféré. Les cellules humaines peuvent être efficacement implantées dans le modèle de rat; le modèle est conforme aux index de texte; et l'origine de la souche est pure.
(ZH) 一种免疫缺陷大鼠模型的构建方法,包括以下步骤:将针对大鼠DNA的Prkdc和IL2Rγ基因敲除的gRNA分别进行体外转录,再分别与体外转录的CAS9蛋白mRNA混合,冻存于无RNA酶的超纯水中,得到相应的注射液A及B;将人SIRPa基因组DNA扩增,纯化,冻存于无RNA酶的超纯水中,得注射液C;采用显微注射法将注射液A和B分别注射进不同的大鼠受精卵的胞质中,将注射液C注射进另一大鼠受精卵的原核中,将三种受精卵移植入不同假孕雌鼠体内,培育分别得到第二代大鼠A,B和C;将第二代大鼠A、B和C进行杂交,繁殖F1代;再将F1代进行杂交,得到敲除了IL2Rγ和Prkdc基因并转入了人SIRPa基因的免疫缺陷大鼠模型。该大鼠模型可以让人类细胞高效植入,符合试验指标,品系背景纯正。
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Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Langue de publication : chinois (ZH)
Langue de dépôt : chinois (ZH)