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1. (WO2018036955) PROCÉDÉ POUR L'AMPLIFICATION D'ACIDES NUCLÉIQUES ET UTILISATION D'UNE TROUSSE POUR SA RÉALISATION
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N° de publication : WO/2018/036955 N° de la demande internationale : PCT/EP2017/071011
Date de publication : 01.03.2018 Date de dépôt international : 21.08.2017
CIB :
C12Q 1/68
C CHIMIE; MÉTALLURGIE
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BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
Q
PROCÉDÉS DE MESURE, DE RECHERCHE OU D'ANALYSE FAISANT INTERVENIR DES ENZYMES OU DES MICRO-ORGANISMES; COMPOSITIONS OU PAPIERS RÉACTIFS À CET EFFET; PROCÉDÉS POUR PRÉPARER CES COMPOSITIONS; PROCÉDÉS DE COMMANDE SENSIBLES AUX CONDITIONS DU MILIEU DANS LES PROCÉDÉS MICROBIOLOGIQUES OU ENZYMOLOGIQUES
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Procédés de mesure, de recherche ou d'analyse faisant intervenir des enzymes ou des micro-organismes; Compositions à cet effet; Procédés pour préparer ces compositions
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faisant intervenir des acides nucléiques
Déposants :
AGCT GMBH [DE/DE]; Maria-Goeppert-Str. 1 23562 Luebeck, DE
Inventeurs :
CHERKASOV, Dmitry; DE
BASLER, Norbert; DE
BECKER, Claus; DE
HESS, Hans-Jörg; DE
MÜLLER-HERMANN, Andreas; DE
Mandataire :
KALHAMMER, Georg; DE
KELLER, Günter; DE
BEST, Michael; DE
TEIPEL, Stephan; DE
Données relatives à la priorité :
16185624.025.08.2016EP
Titre (EN) PROCESS FOR THE AMPLIFICATION OF NUCLEIC ACIDS AND USE OF A KIT FOR CARRYING OUT THE SAME
(FR) PROCÉDÉ POUR L'AMPLIFICATION D'ACIDES NUCLÉIQUES ET UTILISATION D'UNE TROUSSE POUR SA RÉALISATION
(DE) VERFAHREN ZUR AMPLIFIKATION VON NUKLEINSÄUREN UND VERWENDUNG EINES KITS ZU DESSEN DURCHFÜHRUNG
Abrégé :
(EN) There is disclosed a process for the amplification of nucleic acids that essentially makes use of the fact that a predefined nucleic acid chain (target sequence) can be multiplied/amplified in the presence of a target-sequence-specific activator oligonucleotide. The target-sequence-specific activator oligonucleotide brings about the separation of de-novo synthesized complementary primer elongation products by means of strand displacement, so that a new primer oligonucleotide can attach to the respective strand of the template. The complex thus formed, of a primer oligonucleotide and a template strand, can initiate a new primer elongation reaction. The primer elongation products thus formed, in turn, act again as templates, the result being an exponentially proceeding amplification reaction. The activator oligonucleotide does not act as a template itself here and is preferably inert to a primer elongation reaction. The activator oligonucleotide acts as cofactor in the reaction and regenerates the single-strand state of the relevant strand segments of the templates, which is required for the reaction. By using a set of components comprising at least one primer oligonucleotide, at least one polymerase, a set of substrates for the polymerase (for example dNTPs) and at least one specific activator oligonucleotide it is possible to amplify, in a linear fashion, a nucleic acid to be amplified. By using such a set and a second primer oligonucleotide, a nucleic acid to be amplified can be amplified exponentially, in which process resulting specific primer elongation products are used as templates for further primer elongation reactions.
(FR) L'invention concerne un procédé pour l'amplification d'acides nucléiques, dans lequel on utilise essentiellement le fait qu'une chaîne d'acide nucléique prédéfinie (séquence cible) peut être multipliée/amplifiée en présence d'un oligonucléotide activateur spécifique à une séquence cible. L'oligonucléotide activateur spécifique à une séquence cible provoque la séparation de produits d'allongement d'amorce complémentaires nouvellement synthétisés par déplacement de brin de telle sorte qu'un nouvel oligonucléotide d'amorce peut se fixer sur chaque brin de matrice. Le complexe ainsi formé d'un oligonucléotide d'amorce et d'un brin de matrice peut initier une nouvelle réaction d'allongement d'amorce. Les produits d'allongement d'amorce ainsi formés servent à leur tour de matrices, de telle sorte qu'une réaction d'amplification se déroulant de manière exponentielle est obtenue. L'oligonucléotide activateur lui-même ne sert pas de matrice et est de préférence inerte par rapport à une réaction d'allongement d'amorce. L'oligonucléotide activateur sert de cofacteur dans la réaction qui régénère l'état monobrin, nécessaire pour la réaction, des segments de brin pertinents des matrices. L'utilisation d'un ensemble de composants, comprenant au moins un oligonucléotide d'amorce, au moins une polymérase, un ensemble de substrats pour la polymérase (par exemple des dNTP) et au moins un oligonucléotide activateur spécifique, permet d'amplifier de manière linéaire un acide nucléique à amplifier. L'utilisation d'un tel ensemble et d'un deuxième oligonucléotide d'amorce permet d'amplifier de manière exponentielle un acide nucléique à amplifier, les produits d'allongement d'amorce spécifiques obtenus étant utilisés en tant que matrices pour d'autres réactions d'allongement d'amorce.
(DE) Offenbart wird ein Verfahren zur Amplifikation von Nukleinsäuren, bei dem im Wesentlichen davon Gebrauch gemacht wird, dass eine vordefinierte Nukleinsäurekette (Zielsequenz) in Anwesenheiteines zielsequenzspezifischen Aktivator-Oligonukleotides vervielfältigt/amplifiziert werden kann. Das zielsequenzspezifische Aktivator-Oligonukleotid bewirkt die Trennung von neu synthetisierten komplementären Primer-Verlängerungsprodukten mittels Strangverdrängung, so dass sich an dem jeweiligen Matrizenstrang ein neues Primer-Oligonukleotid anlagern kann. Der so gebildete Komplex aus einem Primer-Oligonukleotid und einem Matrizenstrang kann eine neue Primer-Verlängerungsreaktion initiieren. Die so gebildeten Primer-Verlängerungsprodukte dienen wiederum als Matrizen, so dass eine exponentiellablaufende Amplifikationsreaktion resultiert. Das Aktivator-Oligonukleotid dient dabei selbst nicht als Matrize und ist vorzugsweise gegenüber einer Primer-Verlängerungs-Reaktion inert. Das Aktivator-Oligonukleotid dient als Kofaktor in der Reaktion, welcher den für die Reaktion notwendigen einzelsträngigen Zustand der relevanten Strang-Segmente der Matrizen regeneriert. Durch Verwendung eines Komponenten-Set, umfassend mindestens ein Primer-Oligonukleotid, mindestens eine Polymerase, ein Set von Substraten für Polymerase (z.B. dNTPs) und mindestens ein spezifisches Aktivator-Oligonukleotid kann eine zu amplifizierende Nukleinsäure linearamplifiziert werden. Durch Verwendung eines solchen Setsund eines zweiten Primer-Oligonukleotids, kann eine zu amplifizierende Nukleinsäure exponentiellamplifiziert werden, wobei resultierende spezifische Primer-Verlängerungsprodukte für weitere Primer-Verlängerungsreaktionen als Matrizen verwendet werden.
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Langue de publication : allemand (DE)
Langue de dépôt : allemand (DE)