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1. (WO2018021979) CASSETTE D'EXPRESSION D'ADN PORTANT UN GÈNE CODANT UNE CHAÎNE LÉGÈRE D'ENTÉROKINASE HUMAINE, SOUCHE PICHIA PASTORIS COMPRENANT LADITE CASSETTE D'ADN, ET SON PROCÉDÉ DE CULTURE
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N° de publication : WO/2018/021979 N° de la demande internationale : PCT/SK2017/050005
Date de publication : 01.02.2018 Date de dépôt international : 27.07.2017
CIB :
C12N 9/64 (2006.01) ,C12R 1/84 (2006.01) ,C12N 15/81 (2006.01)
Déposants : UNIVERZITA KOMENSKÉHO V BRATISLAVE[SK/SK]; Šafárikovo nám. 6 818 06 Bratislava, SK
Inventeurs : KRAHULEC, Ján; SK
Mandataire : MAJLINGOVÁ & PARTNERS, S.R.O.; Budatínska 12 851 06 Bratislava, SK
Données relatives à la priorité :
PP 50048-201629.07.2016SK
Titre (EN) DNA EXPRESSION CASSETTE CARRYING GENE ENCODING HUMAN ENTEROKINASE LIGHT CHAIN, PICHIA PASTORIS STRAIN COMPRISING SAID DNA CASSETTE, AND ITS CULTIVATION METHOD
(FR) CASSETTE D'EXPRESSION D'ADN PORTANT UN GÈNE CODANT UNE CHAÎNE LÉGÈRE D'ENTÉROKINASE HUMAINE, SOUCHE PICHIA PASTORIS COMPRENANT LADITE CASSETTE D'ADN, ET SON PROCÉDÉ DE CULTURE
Abrégé : front page image
(EN) The DNA expression cassette consists of at least the yeast promoter region, after which the nucleotide sequence encoding the secretion signal with the nucleotide sequence encoding a place suitable for the proteolytic processing for the cutting off the secretion signal is functionally bound. Furthermore the DNA expression cassette carries, after the secretion signal, a nucleotide sequence encoding the human enterokinase light chain functionally bound after the secretion signal, having 6 histidines positioned after the C-terminus of the enterokinase gene. Said DNA expression cassette is integrated in the genome of Pichia pastoris yeast. Also the method for the cultivation of said Pichia pastoris yeast producing the human recombinant enterokinase is described. The cultivation method is based on the two-phase cultivation in the fermenter, wherein in the first phase the cells are cultivated at high specific rate of the biomass growth, when the biomass is increased significantly, and the enterokinase is not accumulated in the cultivation medium. This phase is immediately followed by the second production cultivation phase carried out at lower specific biomass cell growth rate representing by minimal biomass growth, but the production and accumulation of the enterokinase in the cultivation medium occurs.
(FR) L'invention concerne une cassette d'expression d'ADN constituée d'au moins la région promotrice d'une levure, après laquelle la séquence nucléotidique codant le signal de sécrétion est liée de manière fonctionnelle, la séquence nucléotidique codant un site approprié pour le traitement protéolytique de coupure du signal de sécrétion. En outre, la cassette d'expression d'ADN porte, après le signal de sécrétion, une séquence nucléotidique codant la chaîne légère de l'entérokinase humaine liée de manière fonctionnelle après le signal de sécrétion, comportant 6 histidines situées après l'extrémité C-terminale du gène de l'entérokinase. Ladite cassette d'expression d'ADN est intégrée dans le génome de la levure Pichia pastoris. L'invention concerne également le procédé de culture de ladite levure Pichia pastoris produisant l'entérokinase humaine recombinée. Le procédé de culture est basé sur la culture en deux phases dans le fermenteur : lors de la première phase, les cellules sont cultivées à un taux spécifique élevé de croissance de biomasse, lorsque la biomasse augmente de manière significative, et l'entérokinase ne s'accumule pas dans le milieu de culture. Cette première phase est immédiatement suivie par la seconde phase du procédé de culture : celle-ci est effectuée à un taux spécifique de croissance de biomasse plus faible, qui est représenté par une croissance minimale de la biomasse, mais en revanche, l'entérokinase est produite dans le milieu de culture et s'y accumule.
États désignés : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DJ, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JO, JP, KE, KG, KH, KN, KP, KR, KW, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG)
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : ???LANGUAGE_SYMBOL_SK??? (SK)