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1. (WO2017205996) TECHNIQUE DE PRODUCTION D'UNE PROTÉINE CRYPTOCHROME HUMAINE RECOMBINANTE I (HCRY1) ET SON PROCÉDÉ DE COMBINAISON

Pub. No.:    WO/2017/205996    International Application No.:    PCT/CN2016/000641
Publication Date: Fri Dec 08 00:59:59 CET 2017 International Filing Date: Fri Nov 18 00:59:59 CET 2016
IPC: C12N 15/70
C07K 14/47
A61K 38/17
Applicants: HUANG, Wenlin
黄文林
Inventors: HUANG, Wenlin
黄文林
Title: TECHNIQUE DE PRODUCTION D'UNE PROTÉINE CRYPTOCHROME HUMAINE RECOMBINANTE I (HCRY1) ET SON PROCÉDÉ DE COMBINAISON
Abstract:
La présente invention concerne une technique de production destinée à une protéine cryptochrome humaine recombinante I (hCRY1) et son procédé de combinaison. La technique de production comprend les étapes suivantes : le clonage d'un gène hCRY1 à pET-28a en vue d'obtenir un vecteur recombinant pET-28a-hCRY1; l'introduction du vecteur recombinant dans BL21(DE3) d'E. coli et le criblage en vue d'obtenir une bactérie génétiquement modifiée BL21-hCRY1-b; culture de BL21-hCRY1-b dans une cuve de fermentation et l'induction de l'expression d'une protéine recombinante; le recueil et le rinçage d'un corps d'inclusion; la dénaturation et la dissolution du corps d'inclusion; l'exécution d'une chromatographie d'affinité des protéines pour la purification; l'exécution d'une dialyse à gradient de protéine et la renaturation; l'exécution d'une concentration par ultrafiltration des protéines et le remplacement de solution en vue d'obtenir une protéine hCRY1 recombinante. La technique de production permet d'atteindre un rendement de hCRY1 de 200 à 300 mg/l, bien plus élevé que les autres procédés de production actuellement connus de hCRY1.