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1. (WO2017182578) PROCÉDÉ DE GÉNÉRATION D’UNE BANQUE D’ARN BRIN-SPÉCIFIQUE

Pub. No.:    WO/2017/182578    International Application No.:    PCT/EP2017/059412
Publication Date: Fri Oct 27 01:59:59 CEST 2017 International Filing Date: Fri Apr 21 01:59:59 CEST 2017
IPC: C12N 15/10
Applicants: QIAGEN GMBH
Inventors: FANG, Nan
KREBS, Wolfgang
HAUPT, Isabell
Title: PROCÉDÉ DE GÉNÉRATION D’UNE BANQUE D’ARN BRIN-SPÉCIFIQUE
Abstract:
La présente invention concerne un procédé de préparation d’une banque brin-spécifique à partir d’un échantillon d’acide nucléique ou, de préférence, d’ARN, pour un ARN comprenant les étapes de : (i) facultativement, fragmentation dudit échantillon d'ARN, (ii) génération d'une pluralité de premiers brins d'ADNc par soumission dudit ARN fragmenté à une transcription inverse en utilisant une transcriptase inverse et des premières amorces oligonucléotidiques, (iii) génération d'une pluralité de deuxièmes brins d'ADNc au moyen d'une ADN polymérase, de deuxièmes amorces oligonucléotidiques, et de la pluralité de premiers brins d'ADNc, et (iv) ligature d’adaptateurs aux terminaisons 3'et 5' de l'ADNc double brin, (v) le premier brin d'ADNc ne permettant pas une ligature d'adaptateur à son extrémité 5' et ledit deuxième brin d'ADNc permettant une ligature d'adaptateur à son extrémité 5 ', ou réciproquement, et (v) facultativement le clonage, le séquençage ou une autre utilisation de la banque brin-spécifique. L'invention concerne en outre un kit pour préparer une banque brin-spécifique à partir d'un échantillon d'ARN, ledit kit comprenant, (i) des amorces oligonucléotidiques statistiques comprenant un nucléotide 5'-terminal qui ne permet pas de ligature d'adaptateur, (ii) des amorces oligonucléotidiques aléatoires comprenant un nucléotide 5'-terminal qui permet une ligature d'adaptateur, (iii) facultativement une transcriptase inverse pour synthétiser un premier brin d'ADNc complémentaire de la matrice d’ARN, (iv) facultativement des dNTP, et (v) facultativement une ADN polymérase.