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1. (WO2016191272) PROCÉDÉS DE SÉQUENÇAGE DU GÉNOME DE NOUVELLE GÉNÉRATION ET COMPOSITIONS ET KITS ASSOCIÉS

Pub. No.:    WO/2016/191272    International Application No.:    PCT/US2016/033506
Publication Date: Fri Dec 02 00:59:59 CET 2016 International Filing Date: Sat May 21 01:59:59 CEST 2016
IPC: C12Q 1/68
C12P 19/34
C07H 21/04
C40B 20/04
Applicants: SIGMA-ALDRICH CO. LLC
Inventors: WARD, Brian
Title: PROCÉDÉS DE SÉQUENÇAGE DU GÉNOME DE NOUVELLE GÉNÉRATION ET COMPOSITIONS ET KITS ASSOCIÉS
Abstract:
La présente invention concerne des procédés permettant d'identifier des séquences d'ADN rares et/ou inconnues par des approches de séquençage de nouvelle génération. De l'ADN isolé à double brin (ds), à simple brin (ss), ou à ds/ss est fragmenté et les fragments sont polis, phosphorylés, et une queue leur est éventuellement rajoutée. La fragmentation peut être enzymatique ou mécanique. Une séquence d'adaptateur universel est ligaturée à chaque fragment, ledit adaptateur pouvant comprendre un brin supérieur ne comprenant pas de phosphate à l'extrémité 5', ayant une extrémité 3' comprenant un -H à la place du -OH, et/ou une base supplémentaire à l'extrémité 3' complémentaire d'une quelconque base ajoutée aux fragments polis. Les ligatamères peuvent ensuite servir de modèles pour l'amplification à l'aide d'une amorce sens complémentaire de la séquence d'adaptateur et d'une amorce antisens ciblée sur la séquence de fragments. L'invention concerne également des compositions produites par ces procédés et des kits conçus pour mettre en œuvre ces procédés.