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1. (WO2016009059) PROCÉDÉ D'ISOLATION D'ARN À HAUT RENDEMENT

Pub. No.:    WO/2016/009059    International Application No.:    PCT/EP2015/066447
Publication Date: Fri Jan 22 00:59:59 CET 2016 International Filing Date: Sat Jul 18 01:59:59 CEST 2015
IPC: C12N 15/10
Applicants: QIAGEN GMBH
Inventors: LÖPER, David
STEINERT, Kerstin
Title: PROCÉDÉ D'ISOLATION D'ARN À HAUT RENDEMENT
Abstract:
La présente invention concerne un procédé exempt de phénol permettant d'isoler un acide nucléique d'un échantillon, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) préparation d'un mélange de précipitation par addition d'au moins un cation métallique de précipitation et au moins un solvant organique choisi parmi des solvants polaires aprotiques et des solvants protiques à l'échantillon, le mélange de précipitation i) comprenant le cation métallique de précipitation ; ii) comprenant le solvant organique dans une concentration de 15 % ou moins ; iii) comprenant un agent tampon ; et iv) présentant une valeur de pH acide, et des protéines qui précipitent ; b) séparation du précipité du surnageant, le surnageant comprenant un petit ARN ayant une longueur inférieure à 200 nt et un grand ARN ayant une longueur d'au moins 1000 nt ; et c) isolation d'un acide nucléique à partir du surnageant. L'utilisation d'un solvant organique tel qu'indiqué dans l'étape de précipitation des protéines dans la concentration définie permet d'obtenir un surnageant qui en plus d'un petit ARN comprend également un grand ARN. Ceci est un avantage puisque le procédé de la présente invention offre plus de flexibilité à l'utilisateur. Le procédé de l'invention peut être utilisé pour isoler et, par conséquent, analyser différents ARN cibles.