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1. (WO2016008949) DÉTECTION IN VIVO D'UNE INTERACTION ENTRE PROTÉINES SUR LA BASE D'UN SYSTÈME HYBRIDE À L'ADÉNYLATE CYCLASE
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2016/008949    N° de la demande internationale :    PCT/EP2015/066207
Date de publication : 21.01.2016 Date de dépôt international : 15.07.2015
CIB :
C12N 15/10 (2006.01), G01N 33/68 (2006.01)
Déposants : LADANT, Daniel [FR/FR]; (FR)
Inventeurs : LADANT, Daniel; (FR).
DAVI, Marilyne; (FR)
Mandataire : REGIMBEAU; 20, rue de Chazelles 75847 Paris Cedex 17 (FR)
Données relatives à la priorité :
14306151.3 15.07.2014 EP
Titre (EN) IN VIVO DETECTION OF PROTEINS INTERACTION BASED ON ADENYLATE CYCLASE HYBRID SYSTEM
(FR) DÉTECTION IN VIVO D'UNE INTERACTION ENTRE PROTÉINES SUR LA BASE D'UN SYSTÈME HYBRIDE À L'ADÉNYLATE CYCLASE
Abrégé : front page image
(EN)The present invention relates to a method to detect the interaction between a target ligand and a moiety of interest using an adenylate cyclase enzyme (AC) and calmodulin (CaM) as interacting partners, said method comprising: i) expressing in a suitable host cell: (a) a low number of molecules of a first chimeric polypeptide containing AC, and (b) a low number of molecules of a second chimeric polypeptide containing CaM, wherein said AC in said first chimeric polypeptide and/or said CaM in said second chimeric polypeptide has decreased affinity for its interacting partner, wherein said AC in said first chimeric polypeptide is fused to a moiety of interest and said CaM in said second chimeric polypeptide is fused to a target ligand, or conversely, and wherein, when said moiety of interest and said target ligand interact, said AC is activated, and ii) detecting the activation of said AC. The present inventors herein show that only one AC/CaM complex per cell is sufficient to confer a selectable trait to the host cell. Unexpectedly, even less than one AC/CaM complex per cell can be sufficient to confer a selectable trait to the host cell. This surprising result confers a very high sensitivity, that is helpful for screening high affinity interactions, such as antigen-antibody interactions. Moreover, the bw expression of the chimeric proteins that is achieved in the present invention allows to characterize toxic moieties, what was not possible before.
(FR)La présente invention concerne un procédé de détection de l'interaction entre un ligand cible et une fraction d'intérêt à l'aide d'une enzyme adénylate cyclase (AC) et de la calmoduline (CaM) en tant que partenaires d'interaction, ledit procédé comprenant : i) l'expression dans une cellule hôte appropriée : (a) d'un petit nombre de molécules d'un premier polypeptide chimère contenant AC, et (b) d'un petit nombre de molécules d'un second polypeptide chimère contenant CaM, ledit AC dans ledit premier polypeptide chimère et/ou ladite CaM dans ledit second polypeptide chimère possèdant une affinité réduite pour son partenaire d'interaction, ledit AC dans ledit premier polypeptide chimère étant fusionné à une fraction d'intérêt et ladite CaM dans ledit second polypeptide chimère étant fusionnée à un ligand cible, ou inversement, et ledit AC étant activé lorsque ladite fraction d'intérêt et ledit ligand cible interagissent, et ii) la détection de l'activation dudit AC. Les inventeurs de la présente invention montrent dans le présent document qu'un seul complexe AC/CaM par cellule est suffisant pour conférer un caractère sélectionnable à la cellule hôte. De façon inattendue, même moins d'un complexe AC/CaM par cellule peut être suffisant pour conférer un caractère sélectionnable à la cellule hôte. Ce résultat étonnant confère une très haute sensibilité, qui est utile pour le criblage des interactions à affinité élevée, telles que des interactions antigène-anticorps. De plus, l'expression en poids des protéines chimères qui est réalisée dans la présente invention permet de caractériser des fractions toxiques, ce qui n'était pas possible auparavant.
États désignés : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, ST, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)