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1. (WO2015128894) PROCÉDÉ DE DÉTECTION DE TRANSDUCTION DE SIGNAL D'UN RÉCEPTEUR COUPLÉ À UNE PROTÉINE G
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2015/128894    N° de la demande internationale :    PCT/JP2014/000992
Date de publication : 03.09.2015 Date de dépôt international : 25.02.2014
Demande présentée en vertu du Chapitre 2 :    06.10.2015    
CIB :
G01N 33/50 (2006.01), C12N 15/09 (2006.01), G01N 33/15 (2006.01)
Déposants : TOHOKU UNIVERSITY [JP/JP]; 1-1, Katahira 2-chome, Aoba-ku, Sendai-shi, Miyagi 9808577 (JP)
Inventeurs : AOKI, Junken; (JP).
INOUE, Asuka; (JP)
Mandataire : HIROTA, Masanori; 6th Fl. Address Bldg., 2-2-19, Akasaka, Minato-ku, Tokyo 1070052 (JP)
Données relatives à la priorité :
Titre (EN) METHOD FOR DETECTING SIGNAL TRANSDUCTION OF G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR
(FR) PROCÉDÉ DE DÉTECTION DE TRANSDUCTION DE SIGNAL D'UN RÉCEPTEUR COUPLÉ À UNE PROTÉINE G
(JA) Gタンパク質共役型受容体のシグナル伝達の検出方法
Abrégé : front page image
(EN) The present invention addresses the problem of [1] providing a method whereby activation of endogenous Gq or G12 family signal transduction induced by binding of a test substance (ligand) and a G protein-coupled receptor can be specifically detected with high sensitivity in a mammalian cell, or [2] providing a method whereby activation of four types (Gs, Gi, Gq, and G12) of Gα family signal transduction induced by binding of a ligand and a GPCR can be specifically detected with high sensitivity in a mammalian cell. In the present invention, activation of Gq family signal transduction induced by binding of a ligand and the GPCR thereof is specifically detected by TGFα shedding assay using knockout cell (∆GNAQ/11) lines for two types of genes (GNAQ and GNA11 genes) for the Gq family. Activation of G12 family signal transduction induced by binding of a ligand and the GPCR thereof is also specifically detected by TGFα shedding assay using knockout cell (∆GNA12/13) lines for two types of genes (GNA12 and GNA13 genes) for the G12 family. A Gα chimera protein based on a Gq- or G12-family structure is also caused to be expressed in knockout cell (∆GNAQ/11/12/13) lines for the abovementioned two types of genes for the Gq family and the abovementioned two types of genes for the G12 family, and activation of four types (Gs, Gi, Gq, and G12) of Gα family signal transduction induced by binding of a ligand and the GPCR thereof is also specifically detected by TGFα shedding assay.
(FR) La présente invention aborde le problème consistant à [1] la fourniture d'un procédé par lequel l'activation de la transduction de signal endogène de la famille Gq ou G12 induite par la liaison d'une substance d'essai (ligand) et d'un récepteur couplé à une protéine G peut être spécifiquement détecté avec une sensibilité élevée dans une cellule de mammifère, ou [2] la fourniture d'un procédé par lequel l'activation de quatre types (Gs, Gi, Gq, et G12) de la transduction de signal de la famille Gα induite par la liaison d'un ligand et d'un GPCR peut être spécifiquement détecté avec une sensibilité élevée dans une cellule de mammifère. Dans la présente invention, l'activation de la transduction de signal de la famille Gq induite par la liaison d'un ligand et le GPCR de ce dernier est spécifiquement détectée par dosage de l'élimination de TGFα à l'aide de lignées de cellules inactivées (∆ GNAQ /11) pour deux types de gènes et gènes (gènes GNAQ et GNA11) de la famille Gq. L'activation de la transduction de signal de la famille G12 induite par la liaison d'un ligand et le GPCR de ce dernier est également détectée spécifiquement par dosage d'élimination de TGFα à l'aide de lignées de cellules inactivées (∆ GNA12 /13) pour deux types de gènes (gènes GNA12 et GNA13) de la famille G12. Une protéine Gα chimère sur la base d'une structure de la famille Gq ou G12 est également amené à être exprimée dans les lignées de cellules inactivées (∆ GNAQ/11/12/13) pour la deux types de gènes mentionnés ci-dessus de la famille Gq et la deux types de gènes mentionnés ci-dessus de la famille G12, et l'activation de quatre types (Gs, Gi, Gq, et G12) de la transduction de signal de la famille Gα induite par la liaison d'un ligand et le GPCR de ce dernier est également détectée spécifiquement par dosage d'élimination de TGFα.
(JA) 本発明は、[1]哺乳動物細胞において、被検物質(リガンド)とGタンパク質共役型受容体(GPCR)との結合により誘導される、内在性Gq又はG12ファミリーのシグナル伝達活性化を高感度かつ特異的に検出できる方法を提供することや、[2]哺乳動物細胞において、リガンドとGPCRとの結合により誘導される、Gαのファミリー4種類(Gs、Gi、Gq、及びG12)のシグナル伝達活性化を高感度かつ特異的に検出できる方法を提供することを課題とする。 Gqファミリー遺伝子2種(GNAQ及びGNA11遺伝子)のノックアウト細胞(ΔGNAQ/11)株を用いたTGFα切断アッセイにより、リガンドとそのGPCRとの結合により誘導される、Gqファミリーのシグナル伝達活性化を特異的に検出する。また、G12ファミリー遺伝子2種(GNA12及びGNA13遺伝子)のノックアウト細胞(ΔGNA12/13)株を用いたTGFα切断アッセイにより、リガンドとそのGPCRとの結合により誘導される、G12ファミリーのシグナル伝達活性化を特異的に検出する。さらに、上記Gqファミリー遺伝子2種と上記G12ファミリー遺伝子2種のノックアウト細胞(ΔGNAQ/11/12/13)株にGqやG12ファミリーを骨格としたGαキメラタンパク質を発現させ、TGFα切断アッセイにより、リガンドとそのGPCRとの結合により誘導される、Gαのファミリー4種類(Gs、Gi、Gq、及びG12)のシグナル伝達活性化を特異的に検出する。
États désignés : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IR, IS, JP, KE, KG, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SA, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AL, AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, RS, SE, SI, SK, SM, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, KM, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : japonais (JA)
Langue de dépôt : japonais (JA)