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1. (WO2013075660) PROCÉDÉ POUR L'EXPRESSION MASSIVE D'UNE PROTÉINE RECOMBINANTE DE BACTÉRIES GÉNÉTIQUEMENT MODIFIÉES ET UTILISATION ASSOCIÉE
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2013/075660    N° de la demande internationale :    PCT/CN2012/085182
Date de publication : 30.05.2013 Date de dépôt international : 23.11.2012
CIB :
C12N 15/70 (2006.01), C12N 1/20 (2006.01), C12N 1/21 (2006.01), C12N 15/67 (2006.01), C07K 1/18 (2006.01), C12R 1/19 (2006.01)
Déposants : PROTEIN DESIGN LAB, LTD. [CN/CN]; East 1000 Meters Qianshajiancun Sujiatuozhen, Haidian District Beijing 100095 (CN)
Inventeurs : QIU, Xiaoqing; (CN)
Mandataire : HAIHONG JIACHENG INTELLECTUAL PROPERTY & PARTNERS; 9th Floor, Tower B, Zhongguancun Intellectual Property Mansion No.21, South Road Haidian, Haidian District Beijing 100080 (CN)
Données relatives à la priorité :
201110380864.7 25.11.2011 CN
Titre (EN) METHOD FOR HIGHLY EXPRESSING RECOMBINANT PROTEIN OF ENGINEERING BACTERIA AND USE THEREOF
(FR) PROCÉDÉ POUR L'EXPRESSION MASSIVE D'UNE PROTÉINE RECOMBINANTE DE BACTÉRIES GÉNÉTIQUEMENT MODIFIÉES ET UTILISATION ASSOCIÉE
(ZH) 一种高效表达工程菌重组蛋白的方法及应用
Abrégé : front page image
(EN)Provided are a method for highly expressing a recombinant protein of engineering bacteria and the use thereof. The method comprises the following steps: (1) engineering bacteria of Escherichia coli with pET system are transfected with recombinant mutated plasmid to obtain positive monoclonal colonies; (2) the positive monoclonal colonies are enriched to obtain a seed bacteria solution, and the seed bacteria solution is induced to enrichment and growth in a large amount; and (3) the bacteria supernatant containing the recombinant protein as the expression target is separated, and then the recombinant protein in the bacteria supernatant is extracted and purified. The method is characterized in that the engineering bacteria of Escherichia coli with pET system are E.coliB834 (DE3). The components of the mass enrichment medium and the protein purification steps are also optimized such that a significant improvement in the yield and purity of the protein is achieved and the method is suitable for applying to the large-scale production of recombinant protein expressed by the engineering bacteria of Escherichia coli.
(FR)L'invention concerne un procédé pour l'expression massive d'une protéine recombinante de bactéries génétiquement modifiées et l'utilisation de celui-ci. Le procédé comprend les étapes suivantes : (1) modification génétique de bactéries d'Escherichia coli par un système pET qui sont transfectées par un plasmide recombinant muté pour obtenir des colonies monoclonales positives ; (2) les colonies monoclonales positives sont enrichies pour obtenir une solution de bactéries primaires et la solution de bactéries primaires est induite à s'enrichir et croître en grande quantité ; et (3) le surnageant bactérien contenant la protéine recombinante en tant que cible d'expression est séparé puis la protéine recombinante dans le surnageant bactérien est extraite et purifiée. Le procédé est caractérisé en ce que les bactéries génétiquement modifiées d'Escherichia coli par un système pET sont E. coliB834 (DE3). Les composants du milieu d'enrichissement en masse et les étapes de purification protéique sont également optimisées de telle sorte qu'une amélioration significative du rendement et de la pureté de la protéine est obtenue et le procédé est approprié pour l'application à une production à grande échelle d'une protéine recombinante exprimée par les bactéries génétiquement modifiées d'Escherichia coli.
(ZH)提供了一种高效表达工程菌重组蛋白的方法及其应用。该方法包括如下步骤:(1)重组突变质粒转染大肠杆菌pET系统工程菌中得到阳性单克隆菌落,(2)对阳性单克隆菌落进行增菌得到种子菌液,诱导所述种子菌液大量增菌生长,(3)分离含有表达目的的重组蛋白的菌体上清液,提纯菌体上清液中的重组蛋白,其特征在于:所述大肠杆菌pET系统工程菌指E.coliB834(DE3)。还对大量增菌培养基的成分及蛋白质纯化步骤进行了优化,在蛋白质产量和纯度上都得到了明显的提高,适合于应用在大肠杆菌工程菌表达重组蛋白的规模化生产中。
États désignés : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BN, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CL, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PA, PE, PG, PH, PL, PT, QA, RO, RS, RU, RW, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TH, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LR, LS, MW, MZ, NA, RW, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
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Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : chinois (ZH)
Langue de dépôt : chinois (ZH)