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1. WO2012004645 - VACCIN RECOMBINANT CONTRE L'INFECTION PAR CLOSTRIDIUM PERFRINGENS ET L'INTOXICATION PAR LA TOXINE EPSILON (Ε)

Numéro de publication WO/2012/004645
Date de publication 12.01.2012
N° de la demande internationale PCT/IB2011/001544
Date du dépôt international 01.07.2011
CIB
C12N 15/31 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
NMICRO-ORGANISMES OU ENZYMES; COMPOSITIONS LES CONTENANT; CULTURE OU CONSERVATION DE MICRO-ORGANISMES; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE; MILIEUX DE CULTURE
15Techniques de mutation ou génie génétique; ADN ou ARN concernant le génie génétique, vecteurs, p.ex. plasmides, ou leur isolement, leur préparation ou leur purification; Utilisation d'hôtes pour ceux-ci
09Technologie d'ADN recombinant
11Fragments d'ADN ou d'ARN; Leurs formes modifiées
31Gènes codant pour des protéines microbiennes, p.ex. entérotoxines
A61K 39/08 2006.01
ANÉCESSITÉS COURANTES DE LA VIE
61SCIENCES MÉDICALE OU VÉTÉRINAIRE; HYGIÈNE
KPRÉPARATIONS À USAGE MÉDICAL, DENTAIRE OU POUR LA TOILETTE
39Préparations médicinales contenant des antigènes ou des anticorps
02Antigènes bactériens
08Clostridium, p.ex. Clostridium tetani
CPC
A61K 2039/55566
AHUMAN NECESSITIES
61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
39Medicinal preparations containing antigens or antibodies
555characterised by a specific combination antigen/adjuvant
55511Organic adjuvants
55566Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
A61K 39/08
AHUMAN NECESSITIES
61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
39Medicinal preparations containing antigens or antibodies
02Bacterial antigens
08Clostridium, e.g. Clostridium tetani
C07K 14/33
CCHEMISTRY; METALLURGY
07ORGANIC CHEMISTRY
KPEPTIDES
14Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
195from bacteria
33from Clostridium (G)
Déposants
  • NATIONAL INSTITUTE OF IMMUNOLOGY [IN/IN]; Aruna Asaf Ali Marg New Delhi 110 067, IN (AllExceptUS)
  • GARG, Lalit, Chander [IN/IN]; IN (UsOnly)
  • GOPAL, Keshav [IN/IN]; IN (UsOnly)
  • DIXIT, Aparna [IN/IN]; IN (UsOnly)
Inventeurs
  • GARG, Lalit, Chander; IN
  • GOPAL, Keshav; IN
  • DIXIT, Aparna; IN
Mandataires
  • G., Arun, Kumar; K & S Partners Intellectual Property Attorneys 109, Sector 11 Gurgaon 122 003 National Capital Region, IN
Données relatives à la priorité
1577/DEL/201005.07.2010IN
Langue de publication anglais (EN)
Langue de dépôt anglais (EN)
États désignés
Titre
(EN) A RECOMBINANT VACCINE AGAINST CLOSTRIDIUM PERFRINGENS INFECTION AND EPSILON (ε) TOXIN INTOXICATION
(FR) VACCIN RECOMBINANT CONTRE L'INFECTION PAR CLOSTRIDIUM PERFRINGENS ET L'INTOXICATION PAR LA TOXINE EPSILON (Ε)
Abrégé
(EN)
The present invention relates to generation and high level expression of recombinant non-toxic of epsilon toxin of Clostridium perfringens as a recombinant vaccine against Clostridium perfringens infection and a process for producing the vaccine involving amplifying, cloning, transforming, incubating and purifying the recombinant non-toxic epsilon toxin protein. Thus in this invention, substitution mutation Y71G was executed in recombinant Etx and the recombinant EtxY71G protein was over-expressed in soluble form. Expressed protein was purified near homogeneity by DEAE sepharose anion exchange chromatography with high yield. Potential of rEtxY71G as a vaccine candidate was evaluated and found to be highly specific and immunogenic. The present invention is the first report for high level expression of non toxic rEtxY71G mutant protein of Clostridium perfringens. Upto 100 mg/L of highly immunogenic and homogeneous recombinant EtxY71G protein of 31 kDa was produced. Further, the immunization with rEtxY71G gave very high titer and conferred protection against epsilon toxin intoxication.
(FR)
Cette invention concerne la génération et l'expression à niveau élevé d'une protéine recombinante non toxique de la toxine epsilon de Clostridium perfringens à titre de vaccin recombinant contre l'infection par Clostridium perfringens et un procédé de fabrication dudit vaccin comprenant l'amplification, le clonage, la transformation, l'incubation et la purification de ladite protéine recombinante non toxique de la toxine epsilon. Par conséquent, dans la présente invention, la mutation par substitution Y71G a été introduite dans l'Etx recombinant et la protéine EtxY71G recombinante a été surexprimée sous une forme soluble. La protéine exprimée a été purifiée à quasi-homogénéité par chromatographie d'échange d'anions sur DEAE-sépharose à un rendement élevé. Le potentiel de la rEtxY71G à titre de candidat-vaccin a été évalué et elle s'est avérée très spécifique et immunogène. La présente invention constitue le premier rapport sur l'expression à niveau élevé de la protéine mutante rEtxY71G non toxique de Clostridium perfringens. Jusqu'à 100 mg/L de cette protéine EtxY71G recombinante très immunogène et homogène de 31 kDa ont été produits. De plus, l'immunisation avec rEtxY71G a donné un titre très élevé et conféré la protection contre l'intoxication par la toxine epsilon.
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