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1. (WO2009088991) SYSTÈME DE CRIBLAGE PAR DOUBLE HYBRIDE EN LEVURE À BASE GFP AVEC CYTOMÉTRIE DE FLUX
Dernières données bibliographiques dont dispose le Bureau international   

N° de publication :    WO/2009/088991    N° de la demande internationale :    PCT/US2009/000043
Date de publication : 16.07.2009 Date de dépôt international : 05.01.2009
CIB :
C12N 1/00 (2006.01)
Déposants : LOS ALAMOS NATIONAL SECURITY, LLC [US/US]; Los Alamos National Laboratory, LC/IP, MS A187, Los Alamos, NM 87545 (US) (Tous Sauf US).
CAI, Hong [US/US]; (US) (US Seulement).
CHEN, Jun [CN/US]; (US) (US Seulement)
Inventeurs : CAI, Hong; (US).
CHEN, Jun; (US)
Mandataire : SHARPLES, Kenneth, K.; Los Alamos National Laboratory, LC/IP, MS A187, Los Alamos, NM 87545 (US)
Données relatives à la priorité :
61/010,085 03.01.2008 US
Titre (EN) FLOW CYTOMETRIC GFP-BASED YEAST TWO HYBRID SYSTEM
(FR) SYSTÈME DE CRIBLAGE PAR DOUBLE HYBRIDE EN LEVURE À BASE GFP AVEC CYTOMÉTRIE DE FLUX
Abrégé : front page image
(EN)The invention provides an improved yeast two-hybrid screening system that is optimal for high throughput screening of cDNA libraries for protein-protein interactions. The invention utilizes a combination of stably-integrated yEGFP as a reporter in the reporter yeast strain, combined with flow cytometric detection of fluorescence resulting from transcriptional activation of the reporter protein following interaction of protein-protein pairs. The system of the invention maybe conducted using liquid culture, rather than the agar plating required in conventional Y2H systems, thereby saving substantial time and resources. Moreover, by virtue of the system's liquid culture approach the invention is adaptable to high-throughput format and can be used for large-scale cDNA screening for interacting proteins with high sensitivity and low signal:noise ratios. The invention's Y2H assay/system offers convenient, quantitative and faster reporter analysis compatible with existing liquid handling robots, and also reduces labor requirements in screening cDNA libraries.
(FR)L'invention concerne un système de criblage de levure par double hybride de levure qui donne un résultat optimal en termes de criblage à fort rendement de bibliothèques d'ADNc pour des interactions protéine-protéine. Cette invention fait intervenir une protéine fluorescente verte optimisée par levure (yEGFP) à intégration stable en tant que reporter dans la souche de levure reporter, combinée à une détection de la fluorescence par cytométrie de flux, débouchant sur une activation transcriptionnelle de la protéine reporter à la suite d'une interaction protéine-protéine. Le système de l'invention peut être mis en oeuvre au moyen d'une culture liquide et non de plaques de gélose comme requis dans les systèmes à double hybride en levure (Y2H) classiques, ce qui procure un gain de temps et de ressources substantiel. De plus, grâce à l'emploi d'une méthode par culture liquide, l'invention convient pour les forts rendements et pour le criblage à grande échelle d'ADNc par interactions protéine-protéine avec une grande sensibilité et de faibles rapports signal-bruit. Avec le criblage Y2H/système de l'invention, on dispose de moyens pratiques, quantitatifs et rapides d'analyse rapporteur compatibles avec les robots existants pour manipulations de liquides, avec de moindres besoins de main-d'oeuvre pour le criblage de bibliothèques d'ADNc.
États désignés : AE, AG, AL, AM, AO, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BH, BR, BW, BY, BZ, CA, CH, CN, CO, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DO, DZ, EC, EE, EG, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, GT, HN, HR, HU, ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KM, KN, KP, KR, KZ, LA, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LY, MA, MD, ME, MG, MK, MN, MW, MX, MY, MZ, NA, NG, NI, NO, NZ, OM, PG, PH, PL, PT, RO, RS, RU, SC, SD, SE, SG, SK, SL, SM, ST, SV, SY, TJ, TM, TN, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VC, VN, ZA, ZM, ZW.
Organisation régionale africaine de la propriété intellectuelle (ARIPO) (BW, GH, GM, KE, LS, MW, MZ, NA, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZM, ZW)
Office eurasien des brevets (OEAB) (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM)
Office européen des brevets (OEB) (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, FR, GB, GR, HR, HU, IE, IS, IT, LT, LU, LV, MC, MK, MT, NL, NO, PL, PT, RO, SE, SI, SK, TR)
Organisation africaine de la propriété intellectuelle (OAPI) (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG).
Langue de publication : anglais (EN)
Langue de dépôt : anglais (EN)