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1. WO2006113590 - DETECTION D'ALTERATIONS GENETIQUES PAR ANALYSE HETERODUPLEX A CYTOMETRIE DE FLUX

Numéro de publication WO/2006/113590
Date de publication 26.10.2006
N° de la demande internationale PCT/US2006/014346
Date du dépôt international 17.04.2006
CIB
C12Q 1/68 2006.01
CCHIMIE; MÉTALLURGIE
12BIOCHIMIE; BIÈRE; SPIRITUEUX; VIN; VINAIGRE; MICROBIOLOGIE; ENZYMOLOGIE; TECHNIQUES DE MUTATION OU DE GÉNÉTIQUE
QPROCÉDÉS DE MESURE OU DE TEST FAISANT INTERVENIR DES ENZYMES, DES ACIDES NUCLÉIQUES OU DES MICRO-ORGANISMES; COMPOSITIONS OU PAPIERS RÉACTIFS À CET EFFET; PROCÉDÉS POUR PRÉPARER CES COMPOSITIONS; PROCÉDÉS DE COMMANDE SENSIBLES AUX CONDITIONS DU MILIEU DANS LES PROCÉDÉS MICROBIOLOGIQUES OU ENZYMOLOGIQUES
1Procédés de mesure ou de test faisant intervenir des enzymes, des acides nucléiques ou des micro-organismes; Compositions à cet effet; Procédés pour préparer ces compositions
68faisant intervenir des acides nucléiques
B01L 3/00 2006.01
BTECHNIQUES INDUSTRIELLES; TRANSPORTS
01PROCÉDÉS OU APPAREILS PHYSIQUES OU CHIMIQUES EN GÉNÉRAL
LAPPAREILS DE LABORATOIRE POUR LA CHIMIE OU LA PHYSIQUE, À USAGE GÉNÉRAL
3Récipients ou ustensiles pour laboratoires, p.ex. verrerie de laboratoire; Compte-gouttes
CPC
C12Q 1/686
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms
68involving nucleic acids
6844Nucleic acid amplification reactions
686Polymerase chain reaction [PCR]
Déposants
  • CEDARS-SINAI MEDICAL CENTER [US]/[US] (AllExceptUS)
  • SZABÓ, Gábor [HU]/[HU] (UsOnly)
  • LUSTYIK, György [HU]/[HU] (UsOnly)
Inventeurs
  • SZABÓ, Gábor
  • LUSTYIK, György
Mandataires
  • LEVY, Seth, D.
Données relatives à la priorité
60/671,91215.04.2005US
Langue de publication anglais (EN)
Langue de dépôt anglais (EN)
États désignés
Titre
(EN) FLOW-CYTOMETRIC HETERODUPLEX ANALYSIS FOR DETECTION OF GENETIC ALTERATIONS
(FR) DETECTION D'ALTERATIONS GENETIQUES PAR ANALYSE HETERODUPLEX A CYTOMETRIE DE FLUX
Abrégé
(EN)
The present invention provides methods and kits useful for the detection of genetic alterations and to diagnose a disease condition caused by a genetic alteration. The invention involves two different PCR products, one control 'unaltered' product and one sample product, which may contain 'altered' DNA, that are mixed, denatured, and allowed to re-anneal. The DNA duplexes are then treated enzymatically or chemically to cleave single stranded or mismatched DNA regions resulting from the genetic alterations. The alterations are then quantitated by measuring a decrease in a fluorescent signal resulting from removal of the fluorescent tag. Further embodiments of the invention include a second, different fluorescent tag that is used to measure non-specific degradation of the duplexes. Other embodiments of the invention include the use of avidin coated microbeads to which the duplexes may be attached for quantitation by flow cytometry. Still further embodiments include biological microbeads for this purpose.
(FR)
La présente invention concerne des procédés et nécessaires convenant à la détection d'altérations génétiques et au diagnostic d'états pathologiques imputables à une altération génétique. L'invention fait intervenir deux produits d'amplification par polymérase, un produit témoins 'non altéré' et un produit échantillon, susceptible de contenir de l'ADN 'altéré', ces produits étant mélangés, dénaturés et laissés se ré-hybrider. On traite alors les duplex d'ADN par voie enzymatique ou chimique de façon à cliver différentes régions d'ADN à brin unique ou sans contreparties issues des altérations génétiques. Pour quantifier ces altérations, on mesure une diminution d'un signal fluorescent résultant de l'enlèvement du marqueur fluorescent. Pour d'autres modes de réalisation, l'invention comporte un deuxième marqueur fluorescent, différent, servant à mesurer la dégradation non spécifique des duplex. Pour encore d'autres modes de réalisation, l'invention concerne l'utilisation de microbilles enduites d'avidine auxquelles les duplex peuvent être attachés aux fins de quantification par cytométrie de flux. Enfin, pour des derniers modes de réalisation, l'invention concerne des microbilles biologiques à cet effet.
Également publié en tant que
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